荔枝多酚對營養(yǎng)性肥胖小鼠減肥和增強免疫力作用研究

涂杜，張軍麗，彭新宇，袁明貴，高彪，向蓉，徐志宏

（廣東省農(nóng)業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共實驗室，廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室，農(nóng)業(yè)部獸用藥物與診斷技術(shù)廣東科學觀測實驗站，廣東省中獸藥工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510640）

營養(yǎng)性肥胖已經(jīng)成為一種全球性疾病，以脂肪組織聚集為主要特征，表現(xiàn)出機體能量攝入大于消耗的能量平衡狀態(tài)，它是慢性疾病發(fā)生的主要誘因[1]，而且還會引起一系列并發(fā)癥，參與高血壓、2 型糖尿病、冠心病、腦血管疾病甚至某些腫瘤的發(fā)生過程[2-3]?，F(xiàn)代人生活節(jié)奏的加快和膳食結(jié)構(gòu)的改變，導致肥胖癥及相關(guān)代謝性疾病的流行，并變成了對公眾健康的主要威脅，因此預防肥胖的發(fā)生和發(fā)展有著非常重要的現(xiàn)實意義。

植物多酚作為一種天然綠色化合物，被稱為“第七營養(yǎng)素”[4]。由于其獨特的生物活性，植物多酚已成為當今研究開發(fā)的熱點，并在傳統(tǒng)工業(yè)如制革工業(yè)、石油開采及木材應用，和精細加工產(chǎn)業(yè)如日化用品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)和食品添加劑及功能高分子材料方面均得到廣泛應用[5-10]。研究表明植物多酚對人體衰老以及諸如腫瘤、心血管疾病等代謝性疾病具有預防和控制作用[11]，同時可防或治療肥胖的效果[12-14]，對脂肪代謝、食物攝入等具有調(diào)節(jié)作用，從而減輕體重和逆轉(zhuǎn)肥胖[15]。

荔枝中含有大量的多酚類物質(zhì)，能有效緩解機體損傷、調(diào)節(jié)脂肪代謝、抑菌消炎，抗氧化、抗病毒、提高機體的免疫力，具有預防疾病、預防癌癥和抗肥胖的作用[16-18]。但目前對荔枝多酚的研究多集中在多酚的結(jié)構(gòu)及抗氧化能力分析上，對其抗肥胖研究很少，因此本文試圖探討荔枝多酚（litchi polyphenol，LP）對高脂性肥胖小鼠減肥及免疫力的影響，可為進一步探究天然植物活性成分（多酚）治療由于脂質(zhì)代謝異常引起的肥胖癥、高血壓、糖尿病以及心血管疾病的研究奠定基礎(chǔ)，而且將荔枝殼中的多酚類物質(zhì)進行利用，開發(fā)新的植物多酚資源，對我國荔枝資源的綜合利用、荔枝產(chǎn)后深加工技術(shù)的開發(fā)有積極意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

SPF 級 C57BL/6 小鼠（雄性）：（體質(zhì)量 13 g～15 g，3～4 周齡，生產(chǎn)許可證號：SCXK 魯 20140007）：濟南朋悅實驗動物繁育有限公司。小鼠養(yǎng)于SPF 級屏障系統(tǒng)中，許可證號：SYXK（粵）2016-0165，正壓通風，空調(diào)調(diào)節(jié)溫度，溫度為（26±1）℃，光照周期12 h 明12 h暗，小鼠自由飲食與飲水，適應性飼養(yǎng)一周。

荔枝多酚（純度90%）：華中農(nóng)業(yè)大學食品科學技術(shù)學院自制；左旋肉堿膠囊（左旋肉堿含量為69 g/100 g膠囊）：綠瘦健康產(chǎn)業(yè)集團有限公司；高脂飼料（40%，配方：正常繁殖鼠飼料50 g/100 g，豬油18.9 g/100 g，蔗糖15 g/100 g，酪蛋白11.3 g/100 g，膽固醇1.3 g/100 g，膽鹽0.3 g/100 g，鼠用預混料2 g/100 g，麥芽糊精1.2 g/100 g）：上海普路騰生物科技有限公司；普通飼料（配方：玉米28%、面粉15%、麩皮16%、豆粕11%、進口魚粉12%、苜蓿10%、酵母1.8%、油脂1.2%、石粉1%、磷酸氫鈣1.2%、復合維生素2%、微量元素0.8%）：北京華阜康生物科技股份有限公司；小鼠免疫球蛋白 A（immunoglobulin A ，IgA）ELISA 試劑盒、小鼠免疫球蛋白 G（immunoglobulin G ，IgG）ELISA 試劑盒、小鼠免疫球蛋白 M（immunoglobulin M ，IgM）ELISA 試劑盒：上海酶聯(lián)生物科技有限公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設備

XS-205DU 型十萬分一天平：瑞士mettler-toledo；ELX-800 型全自動酶標儀：美國伯騰；Eppendorf-5804R 型低溫/高速離心機：德國Eppendorf。

1.3 方法

1.3.1 試驗設計

試驗前，供試C57BL/6 小鼠在清潔屏障環(huán)境下適應性喂養(yǎng)1 周，按體質(zhì)量隨機分為2 組，其中正常組12 只，每3 只1 籠，飼喂基礎(chǔ)飼料；其余60 只飼喂高脂飼料，每周稱量一次小鼠體重。第4 周造模成功后，高脂小鼠隨機分成5 組，分別為模型組、陽性對照（左旋肉堿）組、LP 高劑量組、中劑量組、低劑量組，每天各組定時按10 mL/kg 體重灌胃蒸餾水或藥物，其中正常組、模型組給予蒸餾水，左旋肉堿組按500 mg/kg 濃度灌胃；荔枝多酚高、中、低劑量組分別按500、400、300 mg/kg 的濃度灌胃，動物繼續(xù)給予高脂飼料，同時灌胃給予上述藥物2 周。小鼠摘眼球取血，按照實驗動物標準處死小鼠，解剖，快速分離小鼠脾臟、胸腺及體脂（雙腎周、腸系膜和附睪脂肪）并稱重。

1.3.2 體重、攝食量及Lee's 指數(shù)

試驗第 1、7、14、21、28、35、42 天定時（8：00）稱量小鼠體重，并計算處理各組小鼠采食量和平均攝食量。攝食量=飼料投放量-飼料剩余量；平均攝食量=3只小鼠總攝食量/3。

小鼠肥胖模型建立成功后及實驗終點稱量小鼠體重，測量體長（鼻尖至肛門外沿的距離），計算Lee's指數(shù)[19]：

Lee's=103×體重（g）1/3/體長（cm）

1.3.3 血清生化指標和脂肪指標

小鼠禁食24 h，摘眼球采血靜置后，4 000 r/min 離心5 min 分離血清于-20 ℃保存，按試劑盒檢測IgA、IgG、IgM 含量。

精確分離腹腔內(nèi)（包括腸系膜，腎周圍，附睪雙側(cè)）脂肪組織，用濾紙吸干后稱重。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理與分析

所有試驗數(shù)據(jù)均使用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件分析。多組間比較采用單因素方差分析（One-way Anova），兩兩比較采用Duncan 法。結(jié)果以均數(shù)±標準差表示，p＜0.05有顯著性意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 高脂飼料對小鼠體質(zhì)量、攝食量和Lee's指數(shù)的影響

高脂飼料對小鼠體質(zhì)量、攝食量和Lee's 指數(shù)的影響見表1。飼料對促進小鼠營養(yǎng)型肥胖有顯著性作用，實驗造模是成功的。

表1 高脂飼料對小鼠體質(zhì)量、攝食量和Lee's 指數(shù)的影響Table 1 The effect of high-fat diets on body weight，mean food intake，Lee's index of mice

由表1可以看出，造模結(jié)束后，高脂組小鼠體重增加明顯，相對于正常組有顯著差異（p＜0.05）。在攝食量方面，高脂組的小鼠攝食量有顯著上升；在Lee's 指數(shù)方面，高脂組小鼠Lee's 指數(shù)有顯著增加，說明高脂飼料對促進小鼠營養(yǎng)型肥胖有顯著性作用，實驗造模成功。

2.2 LP對小鼠體質(zhì)量、平均攝食量和Lee's指數(shù)的影響

LP 對小鼠體質(zhì)量、攝食量、Lee's 指數(shù)的影響見表2。

表2 LP 對小鼠體質(zhì)量、攝食量、Lee's 指數(shù)的影響（n=10）Table 2 The effect of LP on body weight，mean food intake，Lee's index of mice（n=10）

模型組、陽性對照組、荔枝多酚高劑量組、中劑量組和低劑量組分別喂藥兩周后，從表2可以看出，正常組最終體重與其他各組小鼠體重差異顯著（p＜0.05），陽性對照組和高劑量組最終體重顯著低于模型組（p＜0.05），說明小鼠在攝食高脂飼料時，如果同時灌胃一定劑量的左旋肉堿或者高劑量的LP 有助于抑制高脂飼料對小鼠體質(zhì)量減輕，起到減肥作用。另一方面，攝食量也是影響小鼠體重的關(guān)鍵因素，在試驗中，模型組小鼠對食物的攝入量是最多的，達到40.94 g，小鼠體重增重較明顯；高劑量組、中劑量組和低劑量組攝食量與模型組差異顯著（p＜0.05），表明LP 能抑制小鼠進食或抑制對高脂飼料的轉(zhuǎn)化和吸收，從而體現(xiàn)出降脂減肥的作用，高劑量組小鼠攝食量和最終體重均最低。陽性對照組、高劑量組Lee's 指數(shù)顯著低于模型組也充分體現(xiàn)了減肥效果。

2.3 LP對肥胖小鼠體內(nèi)脂肪的影響

LP 對小鼠脂肪濕重的影響見表3。

表3 LP 對小鼠脂肪濕重的影響（n=10）Table 3 The effect of LP on fat wet weight of mice（n=10）

由表3可見，陽性對照組、高劑量組小鼠腸系膜、雙腎周、附睪濕重均明顯低于模型組，而中劑量組、低劑量組的雙腎周、附睪濕重低于模型組（p＜0.05），表明LP 有助于減少小鼠體內(nèi)脂肪蓄積。

2.4 LP對小鼠血清中IgA、IgG、IgM含量的影響

LP 對小鼠血清中IgG、IgA 和IgM 含量的影響見表4。

表4 LP對小鼠血清中 IgG、IgA 和 IgM 含量的影響（n=10）Table 4 The effect of LP on IgG、IgA and IgM of serum in mice（n=10）

由表4知，正常組小鼠血清中IgA、IgG、IgM 含量均顯著高于模型組（p＜0.05），表明小鼠進食高脂飼料后，機體免疫力下降。高劑量組小鼠血清中的IgA 含量顯著高于模型組（p＜0.05），與正常組無顯著性差異，其他組間差異不顯著；中劑量組、低劑量組的IgG、IgM 含量均顯著高于模型組（p＜0.05）。

3 結(jié)論

多酚具有促進脂肪及類脂代謝等生理作用，能夠抑制碳水化合物在小腸的消化和葡萄糖的吸收，刺激胰腺β-細胞胰島素的分泌，調(diào)節(jié)肝臟內(nèi)葡萄糖的釋放，激活胰島素受體和促進胰島素敏感性組織內(nèi)的葡萄糖攝取，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)信號通路與基因表達[20]。Kitano-Okada T 等[21]研究了豆類多酚具有促進皮下脂質(zhì)代謝而減肥，Kim S 等[22]研究表明白藜蘆醇能通過抑制galanin 介導的脂肪生成信號級聯(lián)抑制腸系膜和附睪的脂肪組織，從而發(fā)揮抗肥胖作用。本研究建立高脂小鼠肥胖模型，通過荔枝多酚處理后，能顯著降低肥胖小鼠的體重、攝食量、Lee's 指數(shù)及脂肪濕重（p＜0.05），其中高劑量荔枝多酚處理效果最佳，與左旋肉堿相當。與Wu 等[23]研究也表明荔枝花提取物（主要是多酚）對小鼠的生長性能有一定的影響，它能夠減少肝臟的大小，腎周和附睪的脂肪。本研究表明荔枝多酚可通過減少肥胖動物的攝食量，抑制內(nèi)臟脂肪的沉積，減輕體重，起到減肥效果，減肥效果與劑量有關(guān)，高劑量減肥效果更好。

免疫器官和體液免疫是衡量機體免疫功能的重要指標，其數(shù)值高低的變化可以反映機體免疫功能的狀態(tài)。大量研究表明多酚類物質(zhì)對于機體的免疫力提高有顯著性作用，其中LP 中含有6 種獨立存在的多酚物質(zhì)：沒食子酸、綠原酸、兒茶素、咖啡酸、表兒茶素和蘆丁[24]。Zhao 等[25]研究發(fā)現(xiàn)荔枝果皮提取物用乙酸乙酯洗脫出的混合物（原花青素B2、原花青素B4、表兒茶素）和從混合物中分離出的表兒茶素對小鼠脾細胞具有顯著的增殖作用，從而表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)的功能。胡兆軍發(fā)現(xiàn)“億福林”（主要成分為茶多酚）可提高人體血清中免疫球蛋白的含量，尤其是IgM 和IgA 的含量[26]。本研究發(fā)現(xiàn)高劑量LP 組小鼠血清中的IgA 含量顯著高于模型組（p＜0.05），中、低劑量組的 IgG、IgM 含量均與模型組差異顯著（p＜0.05），表明荔枝多酚對提高肥胖小鼠體液免疫力具有重要作用，但是不同劑量發(fā)揮的作用還需進一步研究。

綜上，LP 對高脂飼料引起的小鼠肥胖模型具有很好的減肥、提高免疫力的效果。但限于條件、本文僅通過體液免疫研究了LP 的免疫調(diào)節(jié)功能，未能深入對細胞免疫及免疫細胞分泌的一些細胞因子如白細胞介素、腫瘤壞死因子及干擾素的影響進行測定，值得進一步研究；且LP 成分復雜，其各單成分在機體免疫調(diào)節(jié)中的作用機制、量效和構(gòu)效關(guān)系有待進一步研究。