miR-425-5p在子宮內(nèi)膜癌患者血清和組織中的表達(dá)及預(yù)后

葉夏斌 吳星梅 呂 旸

浙江省麗水市人民醫(yī)院(323000)

子宮內(nèi)膜癌好發(fā)于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性[1]。死亡率位居?jì)D科惡性腫瘤前3位，嚴(yán)重威脅者女性生命健康安全[2]。子宮內(nèi)膜癌確診多為中晚期，導(dǎo)致治療效果和預(yù)后不甚理想。微小RNA是一類非編碼內(nèi)源單鏈RNA小分子，在多種癌細(xì)胞增殖和凋亡、應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞侵襲、新陳代謝等過(guò)程中參與調(diào)控反應(yīng)[3]。在促進(jìn)血管生成過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]，參與胰腺癌和胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移[5-6]。但在子宮內(nèi)膜癌患者血清和組織中的表達(dá)及預(yù)后報(bào)道較少。本研究分析子宮內(nèi)膜癌患者血清和組織中miR-425-5p的表達(dá)水平，探究與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后關(guān)系，為子宮內(nèi)膜癌患者病程進(jìn)展監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷提供參考。

1 資料和方法

1.1 一般資料

本院2014年4月—2015年5月收治的子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象，收集患者臨床病理資料。納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：① 符合《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南(第四版)》[7]診斷標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)宮腔鏡檢查確診，專家會(huì)診后手術(shù)治療；②依從性好，能配合完成治療及隨訪；③患者及家屬自愿簽署知情同意書；④術(shù)前未進(jìn)行放化療治療。排除術(shù)前進(jìn)行過(guò)雌性激素治療，合并其它惡性腫瘤者，患有心、腦、腎等重要器官疾病者。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)血清及組織miR-425-5p表達(dá)水平。術(shù)前清晨取受試者空腹靜脈血離心取上清備用。手術(shù)時(shí)取子宮內(nèi)膜癌癌組織及癌旁(>5 cm)正常組織，洗凈置液氮速凍5 min備用。按總RNA試劑盒(德國(guó)QiaGen公司)操作說(shuō)明書提取血清總RNA；用RNAiso Plus試劑盒(TaKaRa公司)提取組織總RNA。以miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司)將2 μl純凈無(wú)降解總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。按照TaKaRa公司SYBR Green PCR master mix試劑說(shuō)明加配反應(yīng)體系。每個(gè)樣品設(shè)置3次生物學(xué)重復(fù)。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物序列見(jiàn)表1。體系加配完成后放入Bio-Rad 熒光定量PCR儀反應(yīng)，收集數(shù)據(jù)，以U6為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt算法計(jì)算血清和組織中miR-425-5p相對(duì)表達(dá)量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3 隨訪

以復(fù)診或電話等方式術(shù)后隨訪3年，截至日期為2018年6月1日。記錄總生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 血清miR-425-5p表達(dá)

共納入134例，觀察組84例，對(duì)照組50例?；颊吣挲g(54.6±11.2)歲(35～78歲)，未絕經(jīng)37例，絕經(jīng)47例；另取體檢健康婦女為健康對(duì)照組，年齡(55.1±10.9)歲(34～77歲)，未絕經(jīng)35例，絕經(jīng)49例。兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 血清miR-425-5p表達(dá)水平觀察組(2.47±0.68)高于對(duì)照組(1.03±0.16)(t=14.713，P=0.000)。

癌組織(2.04±0.73)高于癌旁正常組織(1.01±0.12)(t=12.761，P=0.000)。

2.2 miR-425-5p表達(dá)與內(nèi)膜癌病理特征

根據(jù)miR-425-5p在血清和組織中不同表達(dá)水平，將患者分為血清miR-425-5p低表達(dá)組(26例)和高表達(dá)組(58例)，組織miR-425-5p低表達(dá)組(32例)和高表達(dá)組(52例)。內(nèi)膜癌血清和組織miR-425-5p表達(dá)水平與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度有關(guān)(P<0.05)，與患者年齡和絕經(jīng)狀態(tài)無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 內(nèi)膜癌患者miR-425-5p表達(dá)水平與預(yù)后

血清及組織miR-425-5p低表達(dá)組患者總生存率(57.7%、53.6%)高于高表達(dá)組(34.8%、32.6%)(P<0.05)，見(jiàn)圖1。

2.4 影響子宮內(nèi)膜癌不良預(yù)后危險(xiǎn)因素

COX單因素分析結(jié)果表明，血清和組織中miR-425-5p表達(dá)水平、腫瘤分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P<0.05)；多因素分析顯示，血清和組織中miR-425-5p表達(dá)水平、組織分化程度是影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，詳見(jiàn)表3。

表2 不同臨床病理特征患者miR-425-5p血清和組織表達(dá)[例(%)]

圖1 內(nèi)膜癌患者miR-425-5p表達(dá)與總生存率(左:血清表達(dá)，右:組織表達(dá))

表3影響子宮內(nèi)膜癌不良預(yù)后產(chǎn)生的危險(xiǎn)因素分析

臨床病理特征 單因素分析 HR 95%置信區(qū)間 P 多因素分析 HR 95%置信區(qū)間 P 年齡(<55歲、≥55歲)1.1050.751～1.6270.1541.0410.691～1.5680.201血清miR4255p(高、低表達(dá))3.1462.491～3.9730.0002.7072.141～3.4220.009組織miR4255p(高、低表達(dá))3.2422.613～4.0220.0002.7132.118～3.4760.007絕經(jīng)狀態(tài)(絕經(jīng)前、絕經(jīng)后)1.0350.703～1.5230.1020.9380.647～1.3610.216腫瘤分期(T1～T2 、T3～T4)1.7051.334～2.1780.0211.4270.987～2.0640.059分化程度(高 、中低)1.9801.219～3.2150.0141.5111.074～2.1260.027淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是、否)1.8111.117～2.9370.0171.4280.969～2.1030.058

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是女性最常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，2015年我國(guó)發(fā)病率為63.4/10萬(wàn)，死亡率21.8/10萬(wàn)，發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)[7]。子宮內(nèi)膜癌發(fā)病原因尚未清楚，研究表明高水平的雌激素、初潮早、未育、絕經(jīng)延遲、林奇綜合征以及激素替代應(yīng)用等均可能誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌[8]。目前手術(shù)切除是最有效治療手段[9]，但手術(shù)療效和預(yù)后并不理想。因此尋求新的病程監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷靶標(biāo)，提高生存率并改善預(yù)后，仍是臨床治療子宮內(nèi)膜癌的首要任務(wù)。

微小RNA(miRNA)是一種重要的非編碼RNA，在許多癌癥病理中發(fā)揮重要作用[10]。在癌癥中表達(dá)及臨床意義已成為目前研究熱點(diǎn)之一。已有研究表明，miRNA參與前列腺癌、乳腺癌、宮頸癌等多種癌癥發(fā)病過(guò)程[11]。類似的miR-382抑制前列腺細(xì)胞增殖和遷移[12]。相同miRNA在不同癌癥組織中表達(dá)趨勢(shì)存在差異，如在乳腺癌組織中miR-199a-3p表達(dá)下調(diào)，與不良預(yù)后有關(guān)[13]，而在胃癌組織表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)胃癌患者不良預(yù)后[14]。Wan等研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌中miR-124抑制宮頸癌細(xì)胞增殖和遷移，影響患者預(yù)后[15]。在子宮內(nèi)膜癌中miR183通過(guò)調(diào)控p53蛋白表達(dá)，抑制癌細(xì)胞增殖，影響子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后[16]。miR-425-5p是重要的miRNA之一，研究發(fā)現(xiàn)其在胰腺癌和胃癌中均表達(dá)上調(diào)，參與癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，影響癌癥病理特征和預(yù)后[5-6]。

以往miRNA對(duì)預(yù)后作用的研究，多分別在血清或組織中進(jìn)行。本研究同時(shí)觀察血清和組織結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-425-5p在子宮內(nèi)膜癌患者血清高表達(dá)與胰腺癌表達(dá)趨勢(shì)一致[5]，提示miR-425-5p高表達(dá)可能促進(jìn)了癌細(xì)胞增殖，影響了子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后；在癌組織中表達(dá)水平高于癌旁正常組織，與Zhang等[6]研究miR-425-5p在胃癌組織及癌旁組織表達(dá)趨勢(shì)一致。表明miR-425-5p在癌組織中高表達(dá)，與癌細(xì)胞分化與遷移有關(guān)。

miRNA主要通過(guò)與靶基因結(jié)合，進(jìn)而影響腫瘤進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移[10]。蔡洲等[5]研究發(fā)現(xiàn)，miR-425-5p通過(guò)下調(diào)CCM3表達(dá)，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖和遷移。在胃癌組織中調(diào)控靶基因表達(dá)，影響患者腫瘤分期而影響預(yù)后[6]。本研究結(jié)果顯示，血清和組織中miR-425-5p表達(dá)水平均與子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度有關(guān)，與Sun等發(fā)現(xiàn)miR-425-5p在宮頸癌患者血清高表達(dá)，與患者腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)一致[17]。表明miR-425-5p表達(dá)水平越高，腫瘤分期越高，淋巴轉(zhuǎn)移幾率越大，提示miR-425-5p表達(dá)水平可為腫瘤分期提供參考?？追狈频萚18]研究表明miR-497-5p在子宮內(nèi)膜病變組織中表達(dá)水平與患者生存率有關(guān)。本研究患者術(shù)后3年，miR-425-5p高表達(dá)患者生存率降低，與文獻(xiàn)[17]miR-425-5p表達(dá)與宮頸癌患者生存率趨勢(shì)一致。表明miR-425-5p表達(dá)水平影響患者預(yù)后，可為患者生存預(yù)測(cè)提供參考?；貧w分析表明血清和組織中miR-425-5p表達(dá)水平和組織分化程度是影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可為子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后判斷提供指標(biāo)參考。

綜上所述，miR-425-5p在子宮內(nèi)膜癌患者血清和癌組織中表達(dá)上調(diào)，與患者預(yù)后有關(guān)。但在子宮內(nèi)膜癌血清和組織中miR-425-5p調(diào)控腫瘤發(fā)生的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。