精準(zhǔn)檢測(cè)，科學(xué)防控

唐彩琰 何閃

編者按：2019年6月3日，在第一屆獸醫(yī)檢測(cè)診斷大會(huì)召開期間，《國外畜牧學(xué)—豬與禽》編輯非常榮幸采訪到北京愛德士元亨生物科技有限公司（以下簡稱“愛德士”）中國區(qū)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)服務(wù)總監(jiān)徐靈龍先生（以下簡稱“徐先生”）和愛德士豬產(chǎn)品線現(xiàn)場技術(shù)服務(wù)總監(jiān)李昭春先生（以下簡稱“李先生”）（圖1）。

問：愛德士的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）產(chǎn)品有哪些優(yōu)勢(shì)及獨(dú)到之處？

徐先生：美國愛德士生物科技公司（以下稱愛德士）成立于1984年。大家對(duì)愛德士品牌的認(rèn)知始于酶聯(lián)免疫法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）系列產(chǎn)品，其實(shí)我們?cè)缭?993年就有了PCR診斷產(chǎn)品面世，并于2007年研發(fā)了熒光定量PCR系列產(chǎn)品。愛德士產(chǎn)品無論在研發(fā)設(shè)計(jì)還是在產(chǎn)品質(zhì)控方面始終如一地執(zhí)行行業(yè)最高標(biāo)準(zhǔn)和最嚴(yán)格的質(zhì)控體系。我們除了給客戶提供性能優(yōu)異的PCR產(chǎn)品之外，同時(shí)也提供PCR實(shí)驗(yàn)室問題解決方案，幫助客戶建立實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控體系。首先，愛德士現(xiàn)有的熒光定量PCR體系擁有獨(dú)特的內(nèi)參系統(tǒng)，可以監(jiān)控取樣環(huán)節(jié)、樣本運(yùn)輸/保存、樣本前處理及核酸提取、PCR體系配置、儀器及程序設(shè)定等各個(gè)環(huán)節(jié);若任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題導(dǎo)致假陰性的結(jié)果（尤其是針對(duì)非洲豬瘟的檢測(cè)，對(duì)豬場來說往往是致命的），愛德士的內(nèi)參系統(tǒng)均能指示出來。其次，我們引入兩個(gè)特殊試劑：陽性對(duì)照追蹤檢測(cè)混合液和細(xì)菌DNA檢測(cè)混合液，讓PCR實(shí)驗(yàn)室全方面的污染監(jiān)測(cè)成為現(xiàn)實(shí)，避免環(huán)境污染帶來的樣品假陽性結(jié)果;另外，愛德士PCR產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)了通用試劑及通用擴(kuò)增程序，簡化了實(shí)驗(yàn)室的操作，減輕了試劑污染壓力，并實(shí)現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)室的高通量檢測(cè)。

問：目前市場上檢測(cè)非洲豬瘟病毒的熒光定量PCR產(chǎn)品品牌眾多，愛德士的非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）熒光定量PCR產(chǎn)品性能如何？

徐先生：關(guān)于熒光定量PCR產(chǎn)品的性能評(píng)估指標(biāo)通常來說包括產(chǎn)品的分析敏感性和特異性、診斷敏感性和特異性、重復(fù)性及穩(wěn)定性等幾大方面。我們的非洲豬瘟PCR產(chǎn)品在這些方面均進(jìn)行了相關(guān)測(cè)試及驗(yàn)證，其中包括兼容性（覆蓋目前已知的24個(gè)基因型）、最低檢出限（單拷貝，1～10拷貝/反應(yīng)）、PCR擴(kuò)增效率（效率100.7%;相關(guān)系數(shù)0.999 6;斜率-3.306 4）、混樣檢測(cè)能力（最多可達(dá)20份）、分析特異性（與其他豬病病原體如豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬圓環(huán)病毒和豬細(xì)小病毒等無任何交叉）診斷特異性（100%，n=227）;另外，該產(chǎn)品的重復(fù)性、穩(wěn)定性和容忍度等都非常優(yōu)異。同時(shí)愛德士非洲豬瘟PCR產(chǎn)品成功通過了非洲豬瘟歐盟參考實(shí)驗(yàn)室（西班牙馬德里動(dòng)物衛(wèi)生中心）的驗(yàn)證，驗(yàn)證報(bào)告提到愛德士的非洲豬瘟產(chǎn)品能夠得到可信的檢測(cè)結(jié)果（性能表現(xiàn)優(yōu)于參考方法國際獸醫(yī)局[（Office International Des Epizooties，OIE）和通用探針庫（Universal Probe Library，UPL）-PCR]。另外在中國非洲豬瘟防控中，愛德士的產(chǎn)品經(jīng)歷了實(shí)踐的檢驗(yàn)，獲得了眾多客戶的認(rèn)可與信賴。

問：對(duì)于PCR實(shí)驗(yàn)室的污染問題，愛德士有哪些好的建議？

徐先生：因?yàn)镻CR方法尤其是熒光定量PCR的高敏感性，目前PCR實(shí)驗(yàn)室污染非常普遍。要想避免PCR污染，我們需要對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)、人流、物流控制及操作過程等方面制定標(biāo)準(zhǔn)化流程;同時(shí)，我們要注意實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的定期污染監(jiān)測(cè)，查找實(shí)驗(yàn)室漏洞，避免環(huán)境污染累計(jì)效應(yīng)給實(shí)驗(yàn)室?guī)淼臑?zāi)難性后果。如果實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)出現(xiàn)了污染，我們要及時(shí)排查污染源，進(jìn)行有效的污染清除，避免干擾檢測(cè)結(jié)果，導(dǎo)致結(jié)果的不準(zhǔn)確。

問：在非洲豬瘟防控體系中，愛德士可以提供哪些服務(wù)？

徐先生：在實(shí)驗(yàn)室層面，前期我們可以幫助客戶設(shè)計(jì)與規(guī)劃實(shí)驗(yàn)室，制定儀器耗材選用標(biāo)準(zhǔn)，建立實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理與控制標(biāo)準(zhǔn);協(xié)助建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程（Standard Operating Procedure，SOP）并在實(shí)驗(yàn)室人員標(biāo)準(zhǔn)化操作、培訓(xùn)、考核等方面提供技術(shù)支持。在現(xiàn)場層面，我們可以根據(jù)豬場情況，有針對(duì)性地提供因地制宜的解決方案：如建立非洲豬瘟陰性豬場監(jiān)測(cè)體系，為正在發(fā)生問題的豬場提供精準(zhǔn)清除方案以及具體的復(fù)養(yǎng)方案等等。

問：面對(duì)非洲豬瘟的傳播風(fēng)險(xiǎn)，在飼料環(huán)節(jié)如何進(jìn)行整體評(píng)估？

李先生：飼料廠執(zhí)行類似于豬場的非洲豬瘟生物安全策略有利于飼料的安全。具體來說，一是精簡飼料配方，停用豬源性原料，可以通過膨化、預(yù)烘干和高溫制粒等手段降低風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)對(duì)大宗原料的來源加以控制，減少使用高風(fēng)險(xiǎn)飼料。二是對(duì)原料和成品料定期評(píng)估，采樣過程中要注意樣本的交叉污染，同時(shí)為了監(jiān)控整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程，建議在檢測(cè)飼料樣本過程中增加內(nèi)部陽性對(duì)照（Internal Positive Control，IPC）。三是監(jiān)控成品料在包裝、運(yùn)輸環(huán)節(jié)的污染問題。

問：豬場如何做到最早發(fā)現(xiàn)ASF感染風(fēng)險(xiǎn)？

李先生：首先，我們建議豬場建立實(shí)時(shí)監(jiān)控體系：側(cè)重監(jiān)控豬場內(nèi)外部環(huán)境、監(jiān)控高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域并及時(shí)排查可疑病例，以便在病毒進(jìn)入豬場的第一時(shí)間就能夠發(fā)現(xiàn);其次，根據(jù)病毒的傳播特性，一般經(jīng)口鼻感染的豬感染病毒出現(xiàn)在口鼻處的時(shí)間早于血液2 d～3 d，我們可以通過愛德士的非洲豬瘟熒光定量PCR方法最早發(fā)現(xiàn)感染，為豬場及時(shí)處置爭取最寶貴的時(shí)間。

問：在精準(zhǔn)清除的過程中如何做到“精準(zhǔn)”？

李先生：首先需要正確采樣：選擇合適的樣本，保證樣本確實(shí)有效;如果采樣過程中操作不正確（如鼻腔拭子采樣出現(xiàn)漏采或交叉污染），就會(huì)失去最早發(fā)現(xiàn)感染和最早進(jìn)行科學(xué)處置的時(shí)機(jī)。其次需要足夠的樣本數(shù)量：發(fā)病豬群所用的棟舍及相鄰棟舍建議全部采樣，其余豬群大比例采樣篩查，及早確認(rèn)發(fā)病范圍和數(shù)量。再次是科學(xué)的混樣：由于檢測(cè)目的不一樣，我們會(huì)選取不同的樣本來進(jìn)行檢測(cè)，但ASF病毒在不同的樣本中出現(xiàn)的時(shí)間和病毒載量差異性很大，這時(shí)需要根據(jù)所選試劑盒的敏感度和樣本所含病毒拷貝數(shù)決定最佳的混樣比例。

問：陰性豬場如何建立非洲豬瘟的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)體系？

李先生：在沒有疫苗免疫前，我們需要提升針對(duì)非洲豬瘟的生物安全措施。同時(shí)，我們要建立一套行之有效的監(jiān)控體系。豬場應(yīng)該按照自身布局特點(diǎn)對(duì)整個(gè)區(qū)域進(jìn)行劃分，不同區(qū)域、不同風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)應(yīng)有不同的監(jiān)測(cè)重點(diǎn)。豬場可以參照生產(chǎn)區(qū)、配套區(qū)、流通環(huán)節(jié)及外部環(huán)境建立監(jiān)控體系，針對(duì)不同的環(huán)節(jié)，對(duì)人、車和物等加以控制及檢測(cè)。并且，豬場應(yīng)通過前期病原監(jiān)測(cè)、信息搜集和場地條件等評(píng)估豬群的暴露風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)，再基于暴露風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)，制定不同的生物安全及管理策略，備齊物資，設(shè)定有目標(biāo)、可執(zhí)行的預(yù)案，并通過員工培訓(xùn)、設(shè)施改進(jìn)和流程優(yōu)化等方式，嚴(yán)格執(zhí)行預(yù)設(shè)方案，設(shè)立合理的執(zhí)行情況檢查制度，根據(jù)現(xiàn)場執(zhí)行情況、周邊疫情發(fā)展情況和病原監(jiān)測(cè)結(jié)果等匯總反饋，動(dòng)態(tài)了解自身現(xiàn)狀，不斷提升自己，實(shí)現(xiàn)安全保障?！酢?/p>

編后按：北京愛德士元亨生物科技有限公司成立15年以來，始終為客戶提供最優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、最專業(yè)的技術(shù)支持及最完善的售后服務(wù)。愛德士在動(dòng)物健康領(lǐng)域、水質(zhì)檢測(cè)和牛奶檢測(cè)等方面是全球翹楚（圖2）。