普通胰島素注射液與維生素C注射液配伍的穩(wěn)定性考察

章 瑾 王青青 蔡鑫君 周 峰

胰島素是機(jī)體內(nèi)唯一能降低血糖的激素，也是唯一能促進(jìn)糖、蛋白質(zhì)、脂肪合成和貯存的激素[1]，它能很好地控制餐后血糖；與葡萄糖注射液混合，可有效抵消葡萄糖載體溶液帶來(lái)的血糖波動(dòng)。維生素C作為一種抗氧化劑參與體內(nèi)多種代謝過(guò)程，幫助膽固醇的轉(zhuǎn)化，可減少毛細(xì)血管的脆性，增加機(jī)體免疫力，同時(shí)也是許多酶的輔因子，在膠原、神經(jīng)遞質(zhì)和許多神經(jīng)肽的合成中發(fā)揮重要作用，因此，在傷口愈合、能量代謝和神經(jīng)系統(tǒng)中具有重要功能[2-3]。也有學(xué)者提出，維生素C可促進(jìn)免疫細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-6和IL-8減少炎癥，并且具有直接的抗病毒效應(yīng)及抗癌作用[4-5]。維生素C注射液作為輔助用藥應(yīng)用廣泛，對(duì)于一些不能用生理鹽水作為輸液溶媒的糖尿病患者，比如合并嚴(yán)重高血壓或其他心血管疾病時(shí)，只能將維生素C混合到葡萄糖溶液中輸注。維生素C是一種多羥基化合物，結(jié)構(gòu)類似于葡萄糖，其分子中第2、3位上兩個(gè)相鄰的烯醇式羥基，極易解離釋放出H+，故具有酸性。維生素C具有強(qiáng)還原性，易被可逆氧化成脫氫維生素C。脫氫維生素C若繼續(xù)氧化，則生成不可逆轉(zhuǎn)的二酮古樂(lè)糖酸，完全失去生理活性。而胰島素是由A、B兩個(gè)肽鏈共51個(gè)氨基酸組成的2雙鏈，兩條肽鏈之間由兩個(gè)二硫鍵連接，具有蛋白質(zhì)兩性，溶液不穩(wěn)定，易發(fā)生脫氨、分解和交鏈反應(yīng)。胰島素在維生素C存在的情況下可能會(huì)降解失效，本次研究將對(duì)不同胰島素濃度下的混合溶液進(jìn)行理化性質(zhì)的分析比對(duì)，為臨床合理有效用藥提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑 磷酸二氫鈉（分析純）；乙腈（分析純）；胰島素標(biāo)準(zhǔn)品（27IU/mg，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；普通胰島素注射液（江蘇萬(wàn)邦生化醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司，批號(hào)21712204）；維生素C注射液（上海信誼金朱藥業(yè)有限公司，批號(hào)1730205）；5%葡萄糖注射液500mL（杭州民生藥業(yè)有限公司，批號(hào) A1712202）。

1.2 儀 器 Agilent1260高效液相色譜儀（Agilent Technologies，USA）；FE28-Standard 臺(tái)式 pH 計(jì) [梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；BT25S型電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式多用真空泵（河南省予華儀器有限公司）。

2 方法

2.1 供試液配置 在靜脈用藥調(diào)配中心（PIVAS）萬(wàn)級(jí)潔凈度環(huán)境、百級(jí)潔凈度生物安全柜中，由藥學(xué)人員按照無(wú)菌操作技術(shù)規(guī)程進(jìn)行配置。

2.1.1 對(duì)照組供試液 分別精密量取普通胰島素注射液2、4、6、8IU加入到500mL5%葡萄糖注射液中，得供試液A～D。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)組供試液 分別精密量取普通胰島素注射液2、4、6、8IU加入到500mL5%葡萄糖注射液中，再分別加入2g維生素C注射液，得供試液E～H。供試液組成見(jiàn)表1。

2.2 外觀、pH值檢查 在室溫（25℃）下，觀察并記錄配置后4h 內(nèi)各供試液的外觀是否有變化，并于 0、0.5、1、2、4、6h 時(shí)使用pH計(jì)分別測(cè)定其pH值（各供試液重復(fù)測(cè)定3次）

2.3 胰島素含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Aglient Extend C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.1mol/L 磷酸二氫鈉：乙腈（75:25）；柱溫：40℃；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm；進(jìn)樣量：20μL。

表1 供試液組成

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制 精密稱取胰島素標(biāo)準(zhǔn)品1mg（27IU）用流動(dòng)相定容至50mL，置冰箱保存。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、6.0和8.0mL，用流動(dòng)相定容至 100mL，分別進(jìn)樣20μL，以胰島素峰面積（A）對(duì)胰島素濃度（C）作線性回歸，得方程：A=3681.9C+3.0836，r=0.9997，說(shuō)明胰島素在濃度0.0027IU/mL～0.0432IU/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3.4 精密度和重現(xiàn)性 在“2.3.1”項(xiàng)色譜條件下，精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1mL（0.54IU），用流動(dòng)相定容至50mL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測(cè)得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）值為1.56%，說(shuō)明該方法精密度良好。

精密量取普通胰島素注射液1mL（4IU），用流動(dòng)相定容至100mL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測(cè)得RSD值為1.58%，說(shuō)明該方法重現(xiàn)性良好。

3 結(jié)果

3.1 外觀檢查結(jié)果 在室溫（25℃）下，6h內(nèi)各供試液外觀均澄清透明，且無(wú)顏色變化，無(wú)沉淀或氣體產(chǎn)生，無(wú)結(jié)晶析出。

3.2 pH值檢查結(jié)果 配置6h內(nèi)，各供試液pH值檢查結(jié)果見(jiàn)表 2。A、B、E供試液在 4h內(nèi)pH值變化不大（RSD＜2%，n=5）；其他各供試液在4h內(nèi)的pH值變化均較大（RSD＞2%，n=5）；各供試液在6h內(nèi)的pH值變化均較大（RSD＞2%，n=6）；配伍溶液E、F、G、H的pH值較配伍前均明顯升高。

表2 各供試液pH值檢查結(jié)果

3.3 配伍液胰島素含量變化 在室溫（25℃）下，6h內(nèi)各供試液的胰島素含量與新鮮配置的輸液中胰島素含量比值均＞90%；配伍溶液中的胰島素含量與配伍前溶液中的胰島素含量比值也均＞90%。結(jié)果表明，在500mL5%葡萄糖溶劑中，2IU～8IU胰島素與2g維生素C配伍后含量未明顯下降。見(jiàn)表3。

表3 各供試液的胰島素峰面積及配伍后胰島素含量下降情況

4 討論

由于維生素C穩(wěn)定性較差，配置后無(wú)法長(zhǎng)期保存，但是臨床藥師查房發(fā)現(xiàn)常有上午配置的輸液到下午還未完全用到病人身上。因此，本研究考察了普通胰島素與維生素C的葡萄糖配伍溶液在6h內(nèi)的外觀、pH值和胰島素的含量等穩(wěn)定性指標(biāo)。通過(guò)臨床調(diào)研，發(fā)現(xiàn)胰島素濃度小于0.016IU/mL，維生素C的常用劑量為2g。

本研究結(jié)果顯示，在室溫6h內(nèi)，各配伍液的外觀均無(wú)明顯改變。pH值檢查結(jié)果顯示，6h內(nèi)配伍液的pH值均有不同程度升高，特別是在最后2h，升高明顯；配伍液與配伍前的胰島素溶液相比，pH值明顯升高，這可能與維生素C的pH值有關(guān)。維生素C的烯二醇式結(jié)構(gòu)在酸性條件下易生成2，3-二酮古洛糖酸，再氧化水解生成蘇阿糖酸和草酸，所以引起pH值升高。6h內(nèi)，輸液中的維生素C是否已氧化水解失效還需進(jìn)一步對(duì)維生素C作定量分析。

胰島素的定量分析結(jié)果顯示，配伍后的輸液胰島素含量未明顯下降，均為配伍前溶液的90%以上。單從含量變化分析，胰島素含量未明顯減少，結(jié)果提示，6h內(nèi)0.016IU/mL及以下濃度的胰島素與0.004g/mL維生素C的5%葡萄糖配伍溶液穩(wěn)定性良好。