6種殺菌劑對(duì)番茄枯萎病菌的毒力測(cè)定

王 繹，趙玲玲，楊雪峰，陳海軍，邵 科，劉洪林，侯亞光

（1.內(nèi)蒙古自治區(qū)生物技術(shù)研究院,內(nèi)蒙古呼和浩特 010020；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所,內(nèi)蒙古呼和浩特 010018）

番茄是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的蔬菜,在世界各地都有種植,它既可以生食,又可作為菜肴的原材料[1]。2015年,我國(guó)番茄的產(chǎn)量居亞洲首位,達(dá)到5 594萬(wàn)t,在世界也占據(jù)著領(lǐng)先地位[2]。番茄不僅營(yíng)養(yǎng)豐富,其所含有的番茄紅素更是植物合成物中最強(qiáng)的抗氧化劑,有“植物黃金”的美譽(yù)。溫室栽培使得我國(guó)北方四季都可進(jìn)行番茄種植,能夠產(chǎn)生可觀的經(jīng)濟(jì)效益。番茄越來(lái)越受消費(fèi)者歡迎,各地溫室番茄的種植面積持續(xù)增大,復(fù)種指數(shù)連年提高,但是,番茄的各種病蟲(chóng)害卻呈現(xiàn)逐年加重的趨勢(shì),其中,番茄枯萎病作為土傳病害,發(fā)病尤為嚴(yán)重。番茄枯萎病在溫室中的發(fā)病率為10%～30%,發(fā)病較重時(shí),病株的葉片由下而上逐漸變黃,最后全株葉片萎蔫、枯萎[3],病原菌主要通過(guò)侵染番茄的根和莖基部,進(jìn)入植物體后快速繁殖,阻塞和破壞植物維管束結(jié)構(gòu),逐漸向上延伸,影響植物水和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸,導(dǎo)致植株因缺失水分、營(yíng)養(yǎng)而枯萎死亡。染病植株根部及莖基部縱切可觀察到維管束變褐,后期根部變褐腐爛。濕度大時(shí),染病部位出現(xiàn)粉紅色霉層[4]。該病的病程進(jìn)展較慢,一般出現(xiàn)癥狀后15～30 d才會(huì)枯死[5]。番茄枯萎病菌,即番茄專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporumf.sp.lycopersici）。一旦發(fā)病,將對(duì)番茄的質(zhì)量和產(chǎn)量造成嚴(yán)重影響,且病原菌可在土壤中長(zhǎng)期存活,會(huì)為下一季農(nóng)業(yè)生產(chǎn)埋下隱患。有研究表明,除能夠侵染番茄外,番茄專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌實(shí)際上還可侵染茄子、黃瓜和甜椒等溫室作物[6-7]。番茄枯萎病一旦出現(xiàn)癥狀,防治難度較大。目前尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)番茄枯萎病免疫的品種,生產(chǎn)上采用輪作、避免選擇感病品種、選購(gòu)健康種苗、移栽時(shí)蘸根等方式預(yù)防番茄枯萎病。同時(shí),增施充分腐熟的有機(jī)肥,加強(qiáng)水肥管理,通過(guò)培育壯苗提高植株耐病性。這些手段可減輕田間發(fā)病情況,但不能徹底消除枯萎病對(duì)番茄生產(chǎn)的危害。對(duì)于該病害的化學(xué)防治主要依靠化學(xué)農(nóng)藥蘸根、灌根,實(shí)際防治效果并不能滿(mǎn)足生產(chǎn)需要。本試驗(yàn)選擇了目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的防治其他植物枯萎病較好的、性?xún)r(jià)比較高的4種殺菌劑,同時(shí)也選用農(nóng)戶(hù)常用的百菌清、代森錳鋅2種藥劑,共6種藥劑對(duì)番茄枯萎病菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定,旨在為生產(chǎn)中進(jìn)一步篩選化學(xué)制劑有效防治番茄枯萎病提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試菌株

番茄枯萎病菌采自?xún)?nèi)蒙古呼和浩特市郜獨(dú)利村番茄種植大棚,從染病植株上分離得到。病原菌經(jīng)單孢純化、分子鑒定,確認(rèn)為番茄專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌。之后通過(guò)科赫氏法則[8]系列實(shí)驗(yàn),證實(shí)其為番茄枯萎病菌。病菌于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng),用于室內(nèi)毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)。

1.2 供試農(nóng)藥

75%百菌清、99%噁霉靈、70%甲基托布津、30%甲霜噁霉靈水劑、50%克菌丹、80%代森錳鋅,藥劑來(lái)源見(jiàn)表1。

1.3 試驗(yàn)方法

室內(nèi)PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)病菌,通過(guò)檢測(cè)上述藥劑在不同濃度下對(duì)病菌的抑制程度,測(cè)定供試殺菌劑有效成分對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果。根據(jù)前期的預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,將藥品配制成實(shí)驗(yàn)用母液,按照系列稀釋的方法,通過(guò)濃度初篩試驗(yàn)確定適宜的濃度比范圍（表1）,并以此濃度加入到融化好的PDA固體培養(yǎng)基中,充分混勻后將其倒入9 cm直徑的一次性培養(yǎng)皿中,制成含系列濃度藥劑的 PDA平板（以加入等量無(wú)菌水的處理作為對(duì)照）。將活化后的待測(cè)菌株接種于PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)7 d后,用打孔器沿其菌落邊緣打取直徑為5 mm的菌餅,接種于不同處理濃度的含藥和空白PDA平板中央,28℃人工氣候箱恒溫培養(yǎng),每個(gè)處理5皿,設(shè)3次重復(fù)。

表1 供試藥劑及最終濃度設(shè)定

根據(jù)對(duì)照皿中菌絲的生長(zhǎng)情況,采用十字交叉的測(cè)量方法來(lái)測(cè)量各個(gè)處理的菌落生長(zhǎng)直徑,并通過(guò)如下公式計(jì)算這一農(nóng)藥濃度的抑制生長(zhǎng)率。

抑制生長(zhǎng)率/%=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑）×100

將各藥劑中的有效成分在PDA培養(yǎng)基中的濃度作為測(cè)試濃度,計(jì)算回歸方程和抑制中濃度EC50值。應(yīng)用Excel和統(tǒng)計(jì)軟件DPS對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納整理和統(tǒng)計(jì)分析,得到每個(gè)藥劑的毒力回歸方程、EC50值及各自的相關(guān)系數(shù),比較這6種殺菌劑在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下對(duì)供試番茄專(zhuān)化型尖孢鐮刀菌的抑制作用。

2 結(jié)果與分析

6種殺菌劑的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明（表2）,以70%甲基托布津的毒力最高,其EC50值為1.10 mg/L,其次為50%克菌丹,其 EC50值為 1.81 mg/L。農(nóng)戶(hù)常用的75%百菌清毒力較低,EC50值為28.08 mg/L,80%代森錳鋅對(duì)番茄枯萎病病原菌的毒力最低,其EC50值高達(dá)66.89mg/L。病菌對(duì)藥劑的敏感性與回歸方程的斜率線性正相關(guān)。本試驗(yàn)中,供試菌株對(duì)50%克菌丹和70%甲基托布津較為敏感,其回歸方程中對(duì)應(yīng)的斜率分別為0.247 6和0.203 0。

表2 6種殺菌劑對(duì)番茄枯萎病病原菌的毒力測(cè)定

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)應(yīng)用6種殺菌劑,分別觀察在不同濃度下上述藥劑對(duì)番茄枯萎病菌菌絲的抑制作用。從結(jié)果可以看出：70%甲基托布津?qū)Ψ芽菸【亩玖ψ罡?其EC50值為1.10 mg/L,其次為50%克菌丹,EC50值為1.81 mg/L。而常用蘸根劑99%噁霉靈對(duì)枯萎病病原菌的EC50值為3.78 mg/L,農(nóng)戶(hù)習(xí)慣使用的75%百菌清和80%代森錳鋅對(duì)番茄枯萎病菌的抑制效果均不理想,EC50值分別為28.08 mg/L和66.89 mg/L。在防治病害時(shí)應(yīng)有針對(duì)性地使用效果較好的藥劑,且應(yīng)注意輪換用藥,不應(yīng)過(guò)度依賴(lài)種植經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行病害的防治。試驗(yàn)中所使用的殺菌劑均從當(dāng)?shù)剞r(nóng)資店購(gòu)買(mǎi),為商品制劑,藥劑中添加的助劑或其他成分可能會(huì)對(duì)病原菌產(chǎn)生一定的影響。在田間防治番茄枯萎病時(shí),應(yīng)選用抗病品種,購(gòu)買(mǎi)合格種苗,并在種植過(guò)程中重視水肥的施用,著重培育壯苗。同時(shí),還要結(jié)合土壤改良、有機(jī)肥和生物菌肥的使用,提高土壤中有益微生物數(shù)量,加強(qiáng)田間管理等措施。

由本試驗(yàn)結(jié)果可知,該地區(qū)已不適宜繼續(xù)施用75%百菌清來(lái)防治番茄枯萎病。番茄枯萎病是典型的土傳病害,其病原菌可在土壤或病殘?bào)w中存活多年,并可通過(guò)灌溉、施肥、農(nóng)機(jī)等途徑傳播[9]。北方設(shè)施農(nóng)業(yè)追求經(jīng)濟(jì)效益,不注重輪作倒茬,長(zhǎng)年連作的土壤中微生物總量、細(xì)菌、放線菌的數(shù)量都呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì),真菌數(shù)則呈線性式迅速增長(zhǎng),“細(xì)菌性”土壤逐漸變?yōu)椤罢婢浴蓖寥?不但導(dǎo)致土壤肥力下降,次生鹽漬化,還為土傳病害的生存和蔓延提供了有利的環(huán)境條件[10]。因此,在設(shè)施農(nóng)業(yè)日常生產(chǎn)中,不僅要注重植物病蟲(chóng)害防治,還須進(jìn)行土壤健康管理,通過(guò)增施有機(jī)肥、添加有益菌等手段改善土壤物理性質(zhì),增加土壤微生物總量[11]。在使用殺菌劑進(jìn)行病害防治或土壤消毒后,要及時(shí)補(bǔ)充有益微生物,最大限度地抑制病原菌的繁殖和蔓延。