金訶邦士片緩解體力疲勞功能的實(shí)驗(yàn)研究

馬文俊 劉有菊 韓成芳

【摘 要】 目的：研究金訶邦士片緩解小鼠體力疲勞的作用。方法：選用昆明種小鼠為研究對(duì)象，用金訶邦士片0.17、0.33、1.00g/kg·bw劑量（分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍）分別給各組小鼠連續(xù)灌胃33d，測(cè)定各組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、血清尿素含量、肝糖原含量和血乳酸面積。結(jié)果：與陰性對(duì)照組比較，給予小鼠不同劑量的金訶邦士片，能顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，減少疲勞小鼠血清尿素含量，降低游泳后小鼠血乳酸曲線下面積。結(jié)論：金訶邦士片具有緩解體力疲勞功能。

【關(guān)鍵詞】 金訶邦士片;負(fù)重游泳;血清尿素;肝糖原;血乳酸

【中圖分類號(hào)】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】 1005-0019（2019）14-063-01

金訶邦士片是以枸杞子提取物、淫羊藿提取物為主要原料，用以緩解體力疲勞的保健食品。配方中枸杞子含有胡籮卜素、維生素A、維生素C等多種維生素和鈣、鐵、鋅等多種微量元素，有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、增強(qiáng)機(jī)體抵抗力、促進(jìn)細(xì)胞新生、降低血中膽固醇含量、抗動(dòng)脈粥樣硬化、改善皮膚彈性、抗臟器及皮膚衰老等作用[1-4]。枸杞多糖（LBP） 作為補(bǔ)陰類中藥枸杞的有效成分， 能夠增加肝糖原、肌糖原貯備量， 提高運(yùn)動(dòng)前后血液乳酸脫氫酶（LDH） 的活力[5，6]。淫羊藿是我國(guó)傳統(tǒng)補(bǔ)益類中藥，具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕以及提高免疫能力和抑制腫瘤等功效[7]，其含有的多糖成分，可以補(bǔ)充或延緩運(yùn)動(dòng)對(duì)內(nèi)源性糖的消耗，從而有利于機(jī)體內(nèi)糖原儲(chǔ)備的提高[8]。中醫(yī)藥在緩解運(yùn)動(dòng)性疲勞方面已經(jīng)顯現(xiàn)出很大的優(yōu)勢(shì)，中藥可通過(guò)加強(qiáng)機(jī)體抗氧化，清除自由基及減少機(jī)體由于疲勞引起的代謝產(chǎn)物堆積;或通過(guò)改善疲勞所致骨骼肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變、神經(jīng)系統(tǒng)功能異常及調(diào)節(jié)免疫等發(fā)揮抗疲勞作用[9]。本實(shí)驗(yàn)以運(yùn)動(dòng)耐力訓(xùn)練大鼠為模型，研究金訶邦士片抗疲勞能力的影響。

1 材料與方法

1.1 受試樣品

金訶邦士片由青海阿如拉藏醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)有限公司提供，人體推薦劑量為2g/人·日（按60kg計(jì)），批號(hào)：301P11060601。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

選用軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的SPF級(jí)健康KM種雄性小鼠200只，體重18～22g，動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK-（軍）2007-0004，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度為22-25℃，相對(duì)濕度控制在55%一70%，實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制為12h白晝、12h黑夜。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK（魯）2008-0005。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分為四批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每批隨機(jī)分為4組，12只/組。實(shí)驗(yàn)一批進(jìn)行負(fù)重游泳試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)二批進(jìn)行血清尿素的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)三批進(jìn)行肝糖原的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)四批進(jìn)行血乳酸的測(cè)定。

1.3 儀器與試劑

755分光光度計(jì)（2002001）、YSI1500乳酸測(cè)定儀（2003001）、VITALAB SELECTRA-E型生化分析儀（2005001）、ES-1000E電子天平（2003004）、ES500HA電子天平（2005007）、BS223S電子天平（2008007）、離心機(jī)（98090）、振蕩器、游泳箱、鉛絲、加樣器、勻漿器、具塞試管。

尿素氮試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)：110841）。破膜液（YSI公司，批號(hào)：07F100143）、緩沖液（YSI公司，批號(hào)：06IJI086）、乳酸標(biāo)準(zhǔn)液（YSI公司，批號(hào)：11G100082）、三氯醋酸（北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)：010225）、葡萄糖（Amresco，批號(hào)：2734B53）、濃H2SO4（北京化工廠，批號(hào)：20110208）、蒽酮（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司，批號(hào)：20031203）。

1.4 方法

金訶邦士片的推薦量為成人（按60kg體重計(jì)）每日2g，相當(dāng)于0.033g/日/kg體重。實(shí)驗(yàn)設(shè)人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即每日0.17g/kg·bw、0.33g/kg·bw、1.00g/kg·bw為低、中、高劑量組。受試物以無(wú)菌水配制，每日一次經(jīng)口給予，連續(xù)灌胃33天后測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。小鼠灌胃體積為0.1ml/10g·bw。同時(shí)設(shè)一空白對(duì)照組（0g/kg·bw），用無(wú)菌水代替受試物，每日灌胃體積與各受試物相同。各劑量組均給予基礎(chǔ)飼料。參考衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中緩解體力疲勞功能檢驗(yàn)方法[10]，實(shí)驗(yàn)結(jié)束進(jìn)行各項(xiàng)抗疲勞指示的測(cè)定。

1.4.1 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

末次給小鼠受試物30min，將尾根部負(fù)荷5%體重鉛絲的小鼠置于游泳箱中游泳。水深30cm，水溫25.0℃±1.0℃，記錄小鼠自游泳開(kāi)始至死亡的時(shí)間，作為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間游泳時(shí)間為計(jì)量資料，若受試物組游泳時(shí)間明顯長(zhǎng)于空白對(duì)照組游泳時(shí)間，且差異有顯著性（P<0.05），可判定該受試物有延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的作用。

1.4.2 血清尿素測(cè)定

末次給小鼠受試物30min后，在溫度為30℃的水中游泳90min，休息60min后立即拔眼球采血0.5ml。置4℃冰箱約3h，血凝固后2000r/min離心15min取VG血清。于VITALAB SELECTRA-E型生化分析儀上測(cè)定。

所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組血清尿素含量明顯低于空白對(duì)照組，且差異有顯著性（P<0.05），可判定該受試物有減少疲勞小鼠尿素含量的作用。

1.4.3 肝糖原測(cè)定：蒽酮法

末次給小鼠受試物30min后，立即處死，取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，精確稱取肝臟100mg，加入4mlTCA，勻漿1min，將勻漿液倒入離心管，以3000r/min離心15mim，取上清液0.5ml，加95%乙醇2ml，充分混勻至兩種液體間不留有界面，用干凈塞子塞上，室溫下豎立放置過(guò)夜。次日以3000r/min離心15min。小心倒掉上清液并使試管倒立放置10min。用2ml蒸餾水溶解糖原待測(cè)。取0.25ml待測(cè)液和0.25ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（50mg/dl）和0.375ml蒸餾水放入試管中，混勻。

將2.5ml蒽酮試劑用力加入各管，煮沸15min，然后移到冰水浴，冷卻后在620nm波長(zhǎng)下，用試劑空白管調(diào)零后測(cè)定吸光度。按下式計(jì)算肝糖原含量：

肝糖原（mg/100g肝）=DUDS×0.0625×VG×16×100×0.9式中：DU為樣品管吸光度，DS標(biāo)準(zhǔn)管吸光度;V為提取液體積（ml），G為肝組織重量（g）;16為稀釋倍數(shù);0.0625：0.125ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液中的葡萄糖含量;0.9為將葡萄糖換算成糖原的系數(shù)。

所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組肝糖原含量明顯高于空白對(duì)照組，且差異有顯著性（P<0.05），可判定該受試物有促進(jìn)小鼠肝糖原儲(chǔ)備的作用。

1.4.4 血乳酸測(cè)定

末次給小鼠受試物30min后，采血20μl加入40μl破膜液中，震蕩均勻。然后使小鼠在溫度為30℃的水中游泳10min后停止，立即采血20μl，加入40μl 破膜液中，振蕩均勻。休息20min后，再各采血20μl，加入40μl破膜液中，振蕩均勻。用乳酸測(cè)定儀測(cè)定，所得值乘3即為血乳酸值（mmol/L）。按下式計(jì)算三個(gè)時(shí)間點(diǎn)血乳酸曲線下面積：

血乳酸曲線下面積=5×（游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值）。

所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若受試物組血乳酸曲線下面積明顯低于空白對(duì)照組，且差異有顯著性（P<0.05），可判定該受試物有減少小鼠游泳后血乳酸曲線下面積的作用。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，再用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法（Dunnet檢驗(yàn)法）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 金訶邦士片對(duì)小鼠體重的影響

2.2 金訶邦士片對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

2.3 金訶邦士片對(duì)小鼠游泳后血清尿素的影響

2.4 金訶邦士片對(duì)小鼠肝糖原含量的影響

2.5 金訶邦士片對(duì)小鼠游泳后血乳酸值的影響

3 討論

所謂抗疲勞就是延緩疲勞的產(chǎn)生和/或加速疲勞的消除。疲勞的主要表現(xiàn)是運(yùn)動(dòng)時(shí)體內(nèi)能量降低和肌肉力量的下降， 測(cè)定機(jī)體持續(xù)運(yùn)動(dòng)到力竭的時(shí)間可以反映機(jī)體的耐力，而負(fù)荷運(yùn)動(dòng)引起機(jī)體的生化指標(biāo)變化可反映疲勞的程度。在功能食品研究中營(yíng)養(yǎng)素被稱為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，人體在運(yùn)動(dòng)和勞動(dòng)過(guò)程中，會(huì)消耗大量的能源物質(zhì)。而糖是人體的主要供能物質(zhì)，機(jī)體內(nèi)的糖主要是葡萄糖和糖原，二者在機(jī)體勞動(dòng)或運(yùn)動(dòng)中被大量消耗，劇烈運(yùn)動(dòng)至衰竭時(shí)，肌糖原可降到最低水平。乳酸是糖原無(wú)氧代謝產(chǎn)物，在激烈的動(dòng)力或靜力性運(yùn)動(dòng)時(shí)，肌肉中乳酸增加約30倍，乳酸易于積累，由于乳酸肌肉中大量堆積，使肌肉中酸性物質(zhì)增多，而導(dǎo)致疲勞。血清尿素是機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸分解代謝的最終產(chǎn)物，反映機(jī)體蛋白質(zhì)氨基酸分解代謝的狀況，對(duì)于評(píng)價(jià)機(jī)體承受運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的能力是一個(gè)非常靈敏的指標(biāo)[11]。大鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞模型的建立，游泳條件及環(huán)境的影響因素也是關(guān)鍵之一。有研究顯示，當(dāng)水溫等于或稍低于動(dòng)物正常體溫時(shí)，動(dòng)物游泳時(shí)間最長(zhǎng)[12]。因此，本研究結(jié)果提示經(jīng)口給予小鼠不同劑量的金訶邦士片33天后，與0g/kg·bw組比較，該受試物在1.00g/kg·bw組能延長(zhǎng)小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間（P<0.05）、減少疲勞小鼠血清尿素含量（P<0.05）、降低游泳后小鼠血乳酸曲線下面積（P<0.05）。受試物對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)無(wú)不良影響。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版）對(duì)緩解體力疲勞保健食品的判定標(biāo)準(zhǔn)可知，金訶邦士片具有緩解體力疲勞的功能。

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