非小細(xì)胞肺癌中EML4-ALK融合基因的檢測及臨床意義

鄧婉芳　羅承東　邢世江　黃麗云　曾維斌　李新　許家健

【摘要】 目的：為了對非小細(xì)胞肺癌的治療提供參考依據(jù)，分析ALK融合基因的檢測及臨床意義。方法：根據(jù)隨機(jī)原則的相關(guān)要求從2015年1月-2018年6月在筆者所在醫(yī)院治療的非小細(xì)胞肺癌患者中抽取60例作為研究對象，所有患者均通過二代測序技術(shù)（NGS）檢測病理標(biāo)本中的EML4-ALK融合基因，探討EML4-ALK融合基因表達(dá)與各病理特征及臨床指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果：研究數(shù)據(jù)顯示，60例患者中EML4-ALK融合基因陽性表達(dá)率為13.33%（8/60），而且陽性表達(dá)率在病理組織類型、既往吸煙史及腫瘤分化程度間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：在非小細(xì)胞肺癌患者中EML4-ALK融合基因存在過度表達(dá)的情況，這與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，臨床應(yīng)重視對其檢測。

【關(guān)鍵詞】 非小細(xì)胞肺癌; EML4-ALK融合基因; 腫瘤

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.11.027 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）11-00-03

Detection and Clinical Significance of ALK Fusion Gene in Non-small Cell Lung Cancer/DENG Wanfang，LUO Chengdong，XING Shijiang，et al.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（11）：-65

【Abstract】 Objective：To provide reference for the treatment of non-small cell lung cancer，and to analyze the detection and clinical significance of EML4-ALK fusion gene.Method：According to the relevant requirements of random principle，60 patients with non-small cell lung cancer treated in our hospital from January 2015 to June 2018 were selected as the research subjects.All patients were detected ALK fusion gene in pathological specimens by second generation sequencing（NGS），and the relationship between ALK fusion gene expression and pathological characteristics and clinical indicators was discussed.Result：The data showed that the positive expression rate of ALK fusion gene was 13.33%（8/60） in 60 patients，and there were significant differences in histopathological type，smoking history and tumor differentiation（P<0.05）.Conclusion：Overexpression of ALK fusion gene exists in NSCLC patients，which is closely related to the occurrence and development of tumors.Clinical detection of ALK fusion gene shall be emphasized.

【Key words】 Non-small cell lung cancer; ALK fusion gene; Tumor

First-authors address：Zhongshan Xiaolan Peoples Hospital，Zhongshan 528415，China

近年來，肺癌在我國的發(fā)病率有明顯增加的趨勢，對人類健康和生命安全造成了嚴(yán)重的威脅，肺癌在男性癌癥患者中發(fā)病率最高，在女性癌癥患者中發(fā)病率位居第二。究其原因，可能是由于男性肺癌患者吸煙、酗酒等不良生活習(xí)慣較多，而女性較少，因此男性患病的概率更大。相比西方國家，我國居民的肺癌發(fā)病率和死亡率相對偏高，且正在呈逐漸上升狀態(tài)。根據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在2018年我國共有23萬人發(fā)生了肺癌，而造成肺癌發(fā)生的原因，臨床上尚無最終定論，但根據(jù)學(xué)者和專家的深入研究分析，發(fā)現(xiàn)肺癌的發(fā)生機(jī)制與多種因素有關(guān)，包括遺傳、環(huán)境、不良生活習(xí)慣和飲食習(xí)慣，如吸煙、酗酒等。肺癌主要分為非小細(xì)胞癌和小細(xì)胞癌兩大類，肺癌患者中有一半以上的屬于非小細(xì)胞肺癌。有報(bào)道顯示，70%左右的非小細(xì)胞肺癌患者確診時已屬于中晚期，常規(guī)的放化療雖然能夠取得一定的療效，但是預(yù)后并不令人滿意[1]，這樣的治療方法不僅需要承受巨大的痛苦和一系列化療不良反應(yīng)，其家庭也承受著巨大的經(jīng)濟(jì)壓力和心理負(fù)擔(dān)，患者因此會出現(xiàn)不良心理情緒，進(jìn)而影響治療。因此，國內(nèi)外的相關(guān)專家學(xué)者們十分重視對肺癌的治療和診斷滿意提升肺癌非小細(xì)胞癌患者的生存質(zhì)量，降低死亡率。在近些年發(fā)現(xiàn)，肺癌患者中不僅具有EGFR、KRAS、BRAF等常見的腫瘤驅(qū)動突變基因，同時還發(fā)現(xiàn)存在間變型淋巴瘤激酶ALK等基因融合的情況。伴隨臨床對腫瘤研究的深入，副反應(yīng)輕、特異性高的分子靶向治療越來越受到關(guān)注[2]。國外報(bào)道發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生和發(fā)展和某一個或者某一部分活化癌基因即驅(qū)動基因密切相關(guān)，不同腫瘤間的驅(qū)動基因不盡相同，其中在非小細(xì)胞肺癌中間變淋巴瘤激酶（ALK）比較常見[3-4]。為了更好地指導(dǎo)臨床對非小細(xì)胞肺癌的治療，筆者所在醫(yī)院隨機(jī)從2015年1月-2018年6月治療的非小細(xì)胞肺癌患者中抽取60例作為研究對象，并通過二代測序技術(shù)（NGS）檢測病理標(biāo)本中的EML4-ALK融合基因，以此來探討EML4-ALK融合基因表達(dá)和各病理特征及臨床指標(biāo)間的關(guān)系，取得一定的研究結(jié)果，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

根據(jù)隨機(jī)原則的相關(guān)要求從2015年1月-2018年6月在筆者所在醫(yī)院治療的非小細(xì)胞肺癌患者中抽取60例作為研究對象。入組患者均有明確的病理診斷結(jié)果且影像資料明確。詳細(xì)記錄入組患者的臨床資料，包括年齡、性別、既往吸煙史、是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理組織類型及臨床分期等。其中病理組織分類以世界衛(wèi)生組織最新擬定的腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)為準(zhǔn);臨床分期參考最新版的《腫瘤學(xué)》中擬定的癌癥TNM分期標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];（2）臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）肝腎功能嚴(yán)重異常;（2）精神狀態(tài)異常。

1.2 方法

使用Illumina 公司的NextSeq500，通過二代測序技術(shù)（NGS）檢測病理標(biāo)本中的ALK融合基因。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS 19.0的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

60例患者中檢出EML4-ALK融合基因陽性共8例，陽性表達(dá)率為13.33%。EML4-ALK融合基因與臨床病理參數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析提示：EML4-ALK融合基因在不同病理組織類型、既往吸煙史及腫瘤分化程度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

肺癌的發(fā)生和發(fā)展受到多種因素的影響，是一個十分復(fù)雜的過程。其中基因和環(huán)境是造成肺癌發(fā)生的主要原因[6-7]。除此之外，遺傳因素、不良飲食習(xí)慣和生活習(xí)慣也在潛移默化的增加了肺癌的發(fā)生率[8]。肺癌分為兩大類，包括非小細(xì)胞癌和小細(xì)胞癌，根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，肺癌患者中有80%的患者為非小細(xì)胞癌，臨床上十分重視對非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)診斷和治療[9]。近年來，肺癌在我國的發(fā)病率有日益增加的趨勢，而且就診時多已屬于中晚期，傳統(tǒng)的化療方案治療效果并不令人滿意[10]。目前，臨床上主要通過手術(shù)、化療、放療的方式治療肺癌[11]。但是隨著各種專家學(xué)者們對肺癌的發(fā)病機(jī)制和分子生物學(xué)的不斷研究，人們逐漸發(fā)現(xiàn)采用融合基因的靶向藥因具有較高的特異性和較低的不良反應(yīng)的優(yōu)勢，因此受到醫(yī)學(xué)界的重視。在臨床中，發(fā)現(xiàn)克唑替尼對于存在ALK、ROSI融合基因的肺癌患者具有較好的治療效果，不僅如此，臨床上逐步展開了以小分子酪氨酸酶抑制劑為代表的靶向藥的實(shí)驗(yàn)，靶向藥的出現(xiàn)對于非小細(xì)胞癌的治療有著十分重要的意義[12-13]。所以，檢測肺癌患者的融合基因，有助于提升肺癌患者的生存率，降低死亡率。

ALK是一種跨膜受體的酪氨酸激酶，屬于胰島素受體家族。與ALK發(fā)生融合的主要有棘皮動物微管相關(guān)蛋白，EML4結(jié)構(gòu)中的N末端堿基區(qū)在腫瘤的發(fā)生過程中有著重要的影響。由于2號染色體短臂發(fā)生的到位，造成了EML4與ALK激酶區(qū)域的融合，因此造成EML4和ALK的融合。EML4融合之后能夠驅(qū)動EML4-ALK轉(zhuǎn)錄活化因子，進(jìn)而增加融合蛋白的表達(dá)，活化后的ALK造成細(xì)胞轉(zhuǎn)向惡化。目前臨床上一經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過10種的融合方式，其中最常見的主要包括V1和V3變體。ALK融合基因是近年來新發(fā)現(xiàn)的驅(qū)動基因，其除了對ALK有特異性靶向抑制作用外，還對C-MET和ROS1等信號通路有抑制作用。本次研究顯示60例患者中ALK融合基因陽性表達(dá)率為13.33%，而且陽性表達(dá)率在病理組織類型、既往吸煙史及腫瘤分化程度間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這和多數(shù)臨床報(bào)道相一致[14]。國內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)，EML4-ALK融合基因是NSCLC的一個潛在治療靶點(diǎn)，是在2007年由SODA等首次從NSCLC腫瘤組織中擴(kuò)增出的，變異ALK基因和伴侶基因EML4融合，激發(fā)ALK的強(qiáng)表達(dá)，引起細(xì)胞過度增殖，這也提示臨床明確ALK基因和伴侶基因是否融合對指導(dǎo)患者個體化治療具有重要參考價(jià)值[15]。驅(qū)動基因的編碼蛋白和腫瘤細(xì)胞的生長、浸潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有報(bào)道指出，如果滅活驅(qū)動基因則腫瘤細(xì)胞凋亡率明顯增加。而且伴隨非小細(xì)胞肺癌發(fā)生率的增加，臨床對驅(qū)動基因的研究越來越多，與此相關(guān)的靶向藥物也在臨床得到推廣和普及[16]。ALK與伴侶基因EML4融合陽性和細(xì)胞增殖關(guān)系密切，能夠明顯促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性增殖過程，是目前得到公認(rèn)的肺癌常見誘導(dǎo)基因，在NSCLC患者中具有較高的陽性表達(dá)率。作為一種新型的檢測技術(shù)，NGS能夠?qū)ο鄳?yīng)的突變區(qū)域進(jìn)行同時的高深度測序，通過生物學(xué)信息，對融合變異類型進(jìn)行最終的確認(rèn)，并不斷地發(fā)現(xiàn)新的融合分子類型，以便于臨床上治療非小細(xì)胞肺癌時能夠選擇最佳的分子靶向藥物進(jìn)行治療，且對容易耐受的藥物進(jìn)行規(guī)避，NGS研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)可用于臨床檢測非小細(xì)胞癌，有助于非小細(xì)胞肺癌患者的早期診斷和治療，促進(jìn)患者早日康復(fù)，具有十分重要的臨床意義和價(jià)值。

總之，在非小細(xì)胞肺癌患者中ALK融合基因存在過度表達(dá)的情況，這與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，臨床應(yīng)重視對其檢測。

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