• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    雞BCO2基因功能性單核苷酸多態(tài)性的生物 信息分析

    2019-07-08 22:15:19郝文文楊倩倩張貝張健張傳生耿立英李祥龍
    家禽科學 2019年4期
    關(guān)鍵詞:泛素多態(tài)性位點

    郝文文 楊倩倩 張貝 張健 張傳生 耿立英 李祥龍

    摘? 要:旨在篩選雞BCO2基因中具有潛在生物學功能的同義單核苷酸多態(tài)性(non-synonymous single nucleotide polymorphisms,nsSNPs)。從SNP數(shù)據(jù)庫中檢索出8個BCO2 基因nsSNPs,利用SIFT、PolyPhen-2、PANTHER和PROVEAN方法分析引起的氨基酸替換是否可能影響B(tài)CO2 的功能預測。進一步對雞BCO2基因編碼的氨基酸序列進行翻譯后修飾位點預測以及進化位點保守性預測;使用SWISS-MODEL構(gòu)建了BCO2野生型以及突變型蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明:3個nsSNPs(rs739117331、rs735703078和rs736211538)可能嚴重影響B(tài)CO2蛋白功能。

    關(guān)鍵詞:雞;BCO2基因;非同義SNP;SNP功能預測;蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)構(gòu)建中圖分類號:S831? ? ?文獻標識碼:B? ? ?文章編號:1673-1085(2019)04-0017-05

    非同義單核苷酸多態(tài)性(nsSNPs)是指處于編碼區(qū)可引起氨基酸序列變化的單核苷酸突變,因其可能會對蛋白質(zhì)功能造成影響,多被認為是導致畜禽表型變異的重要原因[1,2]。利用生物信息學方法對未知表型的nsSNP進行功能性預測,是一種篩選候選功能位點的理想策略,目前已有諸多成功的研究報道[3-6]。BCO2基因(Beta-carotene 9′,10′-monooxygenase,BCO2)編碼的β-胡蘿卜素加氧酶2在動物體內(nèi)類胡蘿卜素的代謝過程中起著至關(guān)重要的作用[7]。雞皮膚表現(xiàn)出黃色主要是由于表皮層類胡蘿卜素沉積的結(jié)果,類胡蘿卜素被降解,雞皮膚呈現(xiàn)白色。研究發(fā)現(xiàn),雞BCO2基因的一個G/A突變位點(chr24:6268434bp)與黃皮膚性狀存在著連鎖關(guān)系,且該基因在黃色皮膚組織中的表達量顯著低于白色皮膚組織[8]。還發(fā)現(xiàn),在綿羊、家兔等動物的黃脂肪性狀也與BCO2基因編碼區(qū)的突變有關(guān)[9-11],這提示BCO2基因突變可以造成它介導類胡蘿卜素降解的功能發(fā)生改變。本研究對利用生物信息技術(shù)對雞BCO2基因編碼區(qū)nsSNPs進行分析,篩選其中候選功能性錯義突變位點,為后續(xù)的表型關(guān)聯(lián)分析和雞皮膚顏色的分子遺傳育種提供理論依據(jù)。

    1? 材料與方法

    1.1? BCO2基因nsSNPs的搜集? 以BCO2基因的序列號(ENSGALG00000007868)從Ensembl genome browser(http://asia.ensembl.org)中進行檢索,確定各SNPs在基因中的位置(外顯子區(qū)、內(nèi)含子區(qū)、啟動子區(qū)域等),篩選出位于編碼區(qū)的nsSNPs。

    1.2? NsSNPs對BCO2基因功能的影響? 應(yīng)用4種預測方法SIFT(http://blocks.fhcrc.org/sift/SIFT.html)[12]、PolyPhen-2(http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2)[13]、PANTHER(http://pantherdb.org/tools/csnpScoreForm.jsp)[14]和PROVEN(http://provean.jcvi.org/seq_submit.php)[15]軟件分析各nsSNP對進行BCO2蛋白功能的影響。

    1.3? 進化保守位點分析? 利用在線服務(wù)器ConSurf(http://consurftest.tau.ac.il)[16]分析BCO2蛋白氨基酸位點的進化保守水平。越保守位點發(fā)生變異越可能造成功能或結(jié)構(gòu)上的影響。

    1.4? 翻譯后修飾位點預測? 分別利用BDM-PUB(http://bdmpub.biocuckoo.org/)和NetPhos 2.0(http://gps.biocuckoo.org/)[17]在線軟件預測BCO2蛋白質(zhì)氨基酸泛素化修飾位點和預測磷酸化修飾位點。

    1.5? 蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析? 利用I-Mutant 2.0(http://gpcr.biocomp.unibo.it/cgi/predictors/I-Mutant2.0/I-Mutant2.0.cgi)[18]在線軟件評估nsSNP引起的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的改變。在評估結(jié)果中,DDG為自由能變化值,DDG<0表示此nsSNP降低了蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,DDG>0表示此nsSNP增加了蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,-0.05≤DDG≤0.05表示蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性變化為中性。RI(Reliability Index)為可靠性指數(shù),范圍在0~10。

    2? 結(jié)果與分析

    2.1? 雞BCO2基因nsSNPs的篩選結(jié)果? 從SNP數(shù)據(jù)庫中共檢索到BCO2基因兩個轉(zhuǎn)錄子:

    BCO2-201(ENSGALT00000043097);

    BCO2-202(ENSGALT00000012775)。

    8個nsSNPs,具體結(jié)果見表1。

    2.2? 雞BCO2基因有害nsSNPs預測結(jié)果? 采用SIFT、PolyPhen-2、PANTHER和PROVEN四種方法在BCO2-201分別預測到4個、5個、3個和3個有害突變,在BCO2-202分別預測到4個、4個、3個和3個有害突變。其中rs736211538、rs735703078在兩個轉(zhuǎn)錄子、BCO2-201的rs739117331和BCO2-201的rs736989374均至少三種方法預測為有害位點。

    2.3? 進化保守位點分析? 利用在線服務(wù)器ConSurf預測BCO2基因的進化保守位點,分數(shù)在7~9之間的位點為進化保守性位點。如表2所示,在BCO2編碼的多肽鏈氨基酸序列中,與多態(tài)位點一致的保守性位點共有3個,分別為rs739117331、rs735703078和rs736211538,這3個位點的多態(tài)性更容易對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或功能造成影響。

    2.4? 翻譯后修飾位點預測? 本研究利用BDM-PUB在線軟件預測泛素化修飾位點,利用NetPhos 2.0預測磷酸化修飾位點(表3)。結(jié)果,與BCO2蛋白多態(tài)位點一致的泛素化修飾位點為K416,磷酸化修飾位點為S535。

    2.5? 蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析? 利用I-Mutant2.0評估nsSNP引起的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的影響(見表4),可見BCO2-202中除D510E和K416N使蛋白質(zhì)穩(wěn)定性升高,其他位點多態(tài)性均使得蛋白質(zhì)穩(wěn)定性下降;BCO2-201中除D354A和K260N使蛋白質(zhì)穩(wěn)定性升高,其他位點多態(tài)性均使得蛋白質(zhì)穩(wěn)定性下降。

    2.6? 蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)建模? 利用在線建模服務(wù)器SWISS-MODEL為雞BCO2-201和BCO2-202兩個轉(zhuǎn)錄子蛋白質(zhì)突變體建模,并利用軟件PyMOL將功能性錯義突變分別定位到BCO2-201(圖1A)和BCO2-202(圖1B)蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)。

    3? 討論與結(jié)論

    本研究通過蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能特性這個角度驗證雞的BCO2基因編碼區(qū)中的nsSNPs是否有害。首先,從Ensembl檢索到BCO2基因編碼區(qū)8個nsSNPs,并用四款軟件對其進行功能預測,初步篩選出候選的有害nsSNPs;同時,本研究又從蛋白質(zhì)翻譯后修飾以及氨基酸位點進化保守水平的角度對候選nsSNPs潛在生物學功能進行評估。在發(fā)現(xiàn)的8個nsSNPs中,其中D371A被4個方法均預測為有害突變;進化保守性預測結(jié)果也顯示D371屬于高度保守,這意味著該位點對BCO2功能正常發(fā)揮十分重要。因此D371A在BCO2所有的nsSNPs中危害最大,相應(yīng)的多態(tài)位點為功能性位點。另外,位點S535A為磷酸化修飾位點,它可破壞影響蛋白質(zhì)之間的信號傳導致使蛋白質(zhì)功能不能正常發(fā)揮,加之有3個方法均預測S535A為有害突變,同時S535還是保守性位點,所以S535A為第2個功能位點。第3個候選功能位點為T331P,該位點也被3個nsSNPs功能預測軟件預測為有害突變,且該位點也是進化保守性位點,因此不可忽視該突變對BCO2蛋白質(zhì)功能的影響;最后,雖然K416為泛素化修飾位點,該位點突變可能通過影響蛋白質(zhì)合成后的泛素化過程,破致使蛋白質(zhì)功能不能正常發(fā)揮,但4種軟件對K416N的預測結(jié)果均為中性,因此該突變有待進一步研究。

    參考文獻:

    [1]? Cao,R.,et al.,dbSAP:single amino-acid polymorphism database for protein variation detection[J].Nucleic Acids Res, 2017,45(D1): D827-D832.

    [2]? Katsonis, P., et al., Single nucleotide variations: biological impact and theoretical interpretation[J].Protein Sci, 2014,23(12): 1650-66.

    [3]? Kelly, J.N. and S.D. Barr, In silico analysis of functional single nucleotide polymorphisms in the human TRIM22 gene[J].PLoS One,2014,9(7): e101436.

    [4]? Rebai, M. and A. Rebai, In silico characterization of functional SNP within the oestrogen receptor gene[J].J Genet, 2016,95(4): 865-874.

    [5]? Saleh, M.A., et al., Impacts of Nonsynonymous Single Nucleotide Polymorphisms of Adiponectin Receptor 1 Gene on Corresponding Protein Stability: A Computational Approach[J].Biomed Res Int,2016,2016: 9142190.

    [6]? Singh, R.K. and K. Mahalingam, In silico approach to identify non-synonymous SNPs in human obesity related gene,MC3R (melanocortin-3-receptor)[J].Comput Biol Chem,2017,67:122-130.

    [7]? Wu, L., et al., Molecular aspects of beta, beta-carotene-9',10'-oxygenase 2 in carotenoid metabolism and diseases[J].Exp Biol Med (Maywood), 2016,241(17):1879-1887.

    [8]? Eriksson, J., et al., Identification of the yellow skin gene reveals a hybrid origin of the domestic chicken[J].PLoS Genet,2008,4(2):e1000010.

    [9]? Strychalski,J.,et al.,A novel AAT-deletion mutation in the coding sequence of the BCO2 gene in yellow-fat rabbits[J].J Appl Genet,2015,56(4): 535-537.

    [10]? Niu, Y., et al., Biallelic beta-carotene oxygenase 2 knockout results in yellow fat in sheep via CRISPR/Cas9[J].Anim Genet,2017,48(2):242-244.

    [11]? Vage, D.I. and I.A. Boman, A nonsense mutation in the beta-carotene oxygenase 2(BCO2)gene is tightly associated with accumulation of carotenoids in adipose tissue in sheep (Ovis aries)[J].BMC Genet, 2010,11:10.

    [12]? Kumar, P., S. Henikoff, and P.C. Ng, Predicting the effects of coding non-synonymous variants on protein function using the SIFT algorithm[J].Nat Protoc, 2009,4(7):1073-81.

    [13]? Adzhubei, I.A., et al., A method and server for predicting damaging missense mutations[J].Nat Methods,2010,7(4):248-249.

    [14]? Tang, H. and P.D. Thomas, PANTHER-PSEP: predicting disease-causing genetic variants using position-specific evolutionary preservation[J].Bioinformatics,2016,32(14):2230-2232.

    [15]? Choi, Y. and A.P. Chan, PROVEAN web server: a tool to predict the functional effect of amino acid substitutions and indels[J].Bioinformatics, 2015,31(16): 2745-2747.

    [16]? Ashkenazy, H., et al., ConSurf 2016: an improved methodology to estimate and visualize evolutionary conservation in macromolecules[J].Nucleic Acids Res, 2016,44(W1): W344-350.

    [17]? Xue, Y., et al., GPS 2.1:enhanced prediction of kinase-specific phosphorylation sites with an algorithm of motif length selection[J].Protein Eng Des Sel,2011,24(3):255-260.

    [18]? Capriotti, E., P.Fariselli, and R. Casadio, I-Mutant2.0:predicting stability changes upon mutation from the protein sequence or structure[J].Nucleic Acids Res,2005,33(Web Server issue): 306-310.收稿日期:2019-03-22

    基金項目:河北省教育廳重點項目(項目編號:ZD2018225),河北科技師范學院博士啟動基金(項目編號:2018YB002),河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蛋雞產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團隊崗位項目(項目編號:HBCT2013090206)。

    作者簡介:郝文文(1996-),女,研究生在讀,研究方向為家禽遺傳育種,E-mail:794911295@qq.com。

    通訊作者:張傳生(1976-),男,寧陽縣人,教授,主要從事動物遺傳育種的研究。E-mail:cszhang1976@126.com。

    猜你喜歡
    泛素多態(tài)性位點
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進展
    鎳基單晶高溫合金多組元置換的第一性原理研究
    上海金屬(2021年6期)2021-12-02 10:47:20
    CLOCK基因rs4580704多態(tài)性位點與2型糖尿病和睡眠質(zhì)量的相關(guān)性
    二項式通項公式在遺傳學計算中的運用*
    生物學通報(2019年3期)2019-02-17 18:03:58
    馬鈴薯cpDNA/mtDNA多態(tài)性的多重PCR檢測
    GlobalFiler~? PCR擴增試劑盒驗證及其STR遺傳多態(tài)性
    蛋白泛素化和類泛素化修飾在植物開花時間調(diào)控中的作用
    泛RNA:miRNA是RNA的“泛素”
    泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域與泛素化信號的識別
    SCF E3泛素化連接酶的研究進展
    av一本久久久久| 黄片播放在线免费| 啦啦啦视频在线资源免费观看| a级毛片黄视频| 国产野战对白在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 狂野欧美激情性xxxx| 精品高清国产在线一区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产在线免费精品| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产在线一区二区三区精| 久久久久精品人妻al黑| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲视频免费观看视频| 十八禁人妻一区二区| 国产精品久久电影中文字幕 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 99九九在线精品视频| 欧美日韩黄片免| 1024香蕉在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 窝窝影院91人妻| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲中文av在线| 一区在线观看完整版| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久久精品区二区三区| 成年人免费黄色播放视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 两个人看的免费小视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产精品一区二区在线观看99| 免费在线观看黄色视频的| 久久99热这里只频精品6学生| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久天堂一区二区三区四区| 免费看十八禁软件| 青青草视频在线视频观看| 在线观看66精品国产| 国产高清激情床上av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 成人手机av| 欧美在线一区亚洲| 久久婷婷成人综合色麻豆| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲美女黄片视频| 国产在线观看jvid| 成年动漫av网址| 国产精品二区激情视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 麻豆av在线久日| 最黄视频免费看| 日本vs欧美在线观看视频| 国产成人啪精品午夜网站| 国产在线免费精品| 精品福利永久在线观看| 制服诱惑二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 丰满迷人的少妇在线观看| av国产精品久久久久影院| 久久国产亚洲av麻豆专区| 热99国产精品久久久久久7| 动漫黄色视频在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久国产精品麻豆| 1024视频免费在线观看| 女警被强在线播放| 国产成人av教育| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品一区二区在线不卡| 一级毛片精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 在线观看免费视频日本深夜| 国产男靠女视频免费网站| a级片在线免费高清观看视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久精品成人免费网站| 视频区图区小说| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产成人免费无遮挡视频| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产不卡一卡二| 日韩欧美三级三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美日韩成人在线一区二区| 中文字幕色久视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 热re99久久精品国产66热6| 久久狼人影院| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲人成电影免费在线| 国产片内射在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日韩欧美国产一区二区入口| 日韩欧美一区视频在线观看| 在线永久观看黄色视频| 国产免费现黄频在线看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美精品一区二区大全| 国产麻豆69| 久久国产精品人妻蜜桃| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 无限看片的www在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 考比视频在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 免费看a级黄色片| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 男女下面插进去视频免费观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久久久网色| 国产欧美亚洲国产| 国产97色在线日韩免费| 亚洲欧美激情在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲欧洲日产国产| 三上悠亚av全集在线观看| 极品教师在线免费播放| 夫妻午夜视频| 三上悠亚av全集在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美大码av| 欧美日韩亚洲高清精品| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲五月色婷婷综合| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲成国产人片在线观看| 激情在线观看视频在线高清 | 黄色视频不卡| 国产亚洲欧美精品永久| 老汉色∧v一级毛片| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲成国产人片在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 女人精品久久久久毛片| 天堂俺去俺来也www色官网| 深夜精品福利| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 免费日韩欧美在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久精品国产亚洲av高清一级| 18在线观看网站| 777米奇影视久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 99热国产这里只有精品6| 黄色毛片三级朝国网站| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产亚洲欧美在线一区二区| bbb黄色大片| 黄色怎么调成土黄色| 超碰97精品在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 久久香蕉激情| 色综合婷婷激情| 极品少妇高潮喷水抽搐| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 嫩草影视91久久| 欧美激情极品国产一区二区三区| 黄片大片在线免费观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 精品少妇久久久久久888优播| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 午夜免费成人在线视频| 一夜夜www| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产xxxxx性猛交| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲伊人久久精品综合| 黄片播放在线免费| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 在线观看一区二区三区激情| 成人亚洲精品一区在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲精品在线观看二区| 午夜福利在线免费观看网站| 国产成人av教育| 亚洲av成人一区二区三| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美乱妇无乱码| 成人国产av品久久久| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 午夜激情av网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 黄片大片在线免费观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一本久久精品| 少妇精品久久久久久久| 中文字幕人妻丝袜制服| 美女主播在线视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 怎么达到女性高潮| 一级a爱视频在线免费观看| 在线观看免费视频网站a站| 久久99一区二区三区| 人妻久久中文字幕网| av免费在线观看网站| 他把我摸到了高潮在线观看 | 日韩一区二区三区影片| 男女床上黄色一级片免费看| 高清毛片免费观看视频网站 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产不卡一卡二| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 性少妇av在线| 精品高清国产在线一区| 亚洲 国产 在线| 视频区欧美日本亚洲| 热99re8久久精品国产| 美国免费a级毛片| 97在线人人人人妻| 国产免费现黄频在线看| 两性夫妻黄色片| 亚洲国产欧美在线一区| 午夜福利影视在线免费观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲av美国av| 久久性视频一级片| 色尼玛亚洲综合影院| 岛国在线观看网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 在线观看舔阴道视频| 精品乱码久久久久久99久播| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| av线在线观看网站| 久9热在线精品视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 黄频高清免费视频| 99精品在免费线老司机午夜| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 正在播放国产对白刺激| 91成人精品电影| 亚洲熟女精品中文字幕| 水蜜桃什么品种好| 日韩欧美免费精品| 中文字幕高清在线视频| 18禁国产床啪视频网站| √禁漫天堂资源中文www| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲精品自拍成人| 成年人午夜在线观看视频| 久久久国产精品麻豆| 最新美女视频免费是黄的| www.自偷自拍.com| 中文欧美无线码| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美激情高清一区二区三区| 久久青草综合色| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久久国产一区二区| 韩国精品一区二区三区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品国产亚洲在线| 18在线观看网站| 超碰成人久久| 精品国产乱码久久久久久男人| 日本av手机在线免费观看| 久热这里只有精品99| 欧美黄色淫秽网站| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一进一出抽搐动态| 国产亚洲一区二区精品| 免费看十八禁软件| 黄色成人免费大全| 免费观看人在逋| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产精品欧美亚洲77777| 精品亚洲成a人片在线观看| 一区在线观看完整版| 久热爱精品视频在线9| 免费观看人在逋| 美女福利国产在线| www.999成人在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产一区有黄有色的免费视频| 美女主播在线视频| 12—13女人毛片做爰片一| 视频在线观看一区二区三区| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美激情高清一区二区三区| av电影中文网址| videosex国产| 亚洲中文日韩欧美视频| av有码第一页| 在线观看免费高清a一片| 高清视频免费观看一区二区| 久久国产精品人妻蜜桃| a级片在线免费高清观看视频| 久久久国产一区二区| 91成人精品电影| 国产国语露脸激情在线看| 国产一区二区三区视频了| 亚洲av国产av综合av卡| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品免费一区二区三区在线 | 日本av手机在线免费观看| 一进一出好大好爽视频| svipshipincom国产片| 日本欧美视频一区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 桃花免费在线播放| 亚洲成人免费av在线播放| 精品一区二区三区四区五区乱码| 99久久人妻综合| 美女主播在线视频| 日韩免费av在线播放| 成人黄色视频免费在线看| 午夜两性在线视频| 国产精品成人在线| 老汉色∧v一级毛片| 一区二区三区精品91| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品成人在线| 999精品在线视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产一区二区三区视频了| 嫁个100分男人电影在线观看| 在线观看66精品国产| 母亲3免费完整高清在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 十八禁网站免费在线| 9色porny在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产av国产精品国产| 国产欧美日韩精品亚洲av| 青青草视频在线视频观看| 久久中文看片网| 成人影院久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久热在线av| 99国产精品免费福利视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产欧美日韩精品亚洲av| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 99在线人妻在线中文字幕 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 婷婷成人精品国产| 欧美日韩福利视频一区二区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 99久久国产精品久久久| 免费看a级黄色片| 女人精品久久久久毛片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲国产欧美在线一区| 久热这里只有精品99| √禁漫天堂资源中文www| 国产主播在线观看一区二区| 国产片内射在线| 另类亚洲欧美激情| 欧美精品av麻豆av| 99re6热这里在线精品视频| 我的亚洲天堂| 大香蕉久久网| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲国产欧美网| 亚洲性夜色夜夜综合| 一区二区三区乱码不卡18| 俄罗斯特黄特色一大片| 在线 av 中文字幕| 最近最新免费中文字幕在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产黄频视频在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美日韩福利视频一区二区| 十八禁高潮呻吟视频| 成人国产av品久久久| 最新在线观看一区二区三区| 日本欧美视频一区| 男女高潮啪啪啪动态图| 男女床上黄色一级片免费看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜福利免费观看在线| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 久热爱精品视频在线9| 日韩大码丰满熟妇| 美女视频免费永久观看网站| 无人区码免费观看不卡 | 成人三级做爰电影| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产精品偷伦视频观看了| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 在线永久观看黄色视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品1区2区在线观看. | 亚洲精品在线观看二区| 中国美女看黄片| 99九九在线精品视频| 国产一卡二卡三卡精品| 桃花免费在线播放| 动漫黄色视频在线观看| 男女下面插进去视频免费观看| 99国产精品99久久久久| 国产一卡二卡三卡精品| 婷婷丁香在线五月| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 女性被躁到高潮视频| 国产精品.久久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 9191精品国产免费久久| 男女免费视频国产| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 十八禁网站免费在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲成人免费av在线播放| 一进一出抽搐动态| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| a级毛片在线看网站| av不卡在线播放| 国产免费现黄频在线看| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 免费av中文字幕在线| 丁香欧美五月| aaaaa片日本免费| 999久久久国产精品视频| 久久九九热精品免费| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 男女边摸边吃奶| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 男女午夜视频在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 18禁国产床啪视频网站| 午夜福利视频精品| 黄频高清免费视频| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 免费黄频网站在线观看国产| 国产高清videossex| 国产在线视频一区二区| 国产亚洲精品一区二区www | 国产片内射在线| 亚洲精品美女久久av网站| 咕卡用的链子| 欧美精品一区二区大全| 国产成人欧美| 首页视频小说图片口味搜索| av视频免费观看在线观看| 色视频在线一区二区三区| 老司机影院毛片| 欧美激情久久久久久爽电影 | av在线播放免费不卡| 中文字幕最新亚洲高清| 国产免费现黄频在线看| 激情在线观看视频在线高清 | 精品国产乱子伦一区二区三区| 91成年电影在线观看| 老司机亚洲免费影院| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲少妇的诱惑av| av一本久久久久| 岛国毛片在线播放| 中文字幕精品免费在线观看视频| a级毛片在线看网站| 悠悠久久av| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品免费一区二区三区在线 | 老熟妇乱子伦视频在线观看| 男人操女人黄网站| 免费黄频网站在线观看国产| 久久ye,这里只有精品| 国产亚洲欧美在线一区二区| 色老头精品视频在线观看| 中文欧美无线码| 十八禁高潮呻吟视频| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲专区字幕在线| 国产精品偷伦视频观看了| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲精品国产一区二区精华液| 99re6热这里在线精品视频| 一区二区三区乱码不卡18| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 午夜精品国产一区二区电影| av网站在线播放免费| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲专区字幕在线| 久久性视频一级片| 男女午夜视频在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 露出奶头的视频| av免费在线观看网站| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲七黄色美女视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产成人免费观看mmmm| 久久中文看片网| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久久国内视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久影院123| 99国产综合亚洲精品| 少妇 在线观看| 视频区图区小说| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日日夜夜操网爽| 久久久久久久精品吃奶| 少妇粗大呻吟视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产精品九九99| 老司机在亚洲福利影院| 三级毛片av免费| 久热这里只有精品99| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲精华国产精华精| 亚洲专区中文字幕在线| 午夜成年电影在线免费观看| 国产免费现黄频在线看| 麻豆成人av在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产不卡av网站在线观看| 91九色精品人成在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 国产野战对白在线观看| 91老司机精品| 男女免费视频国产| 亚洲国产成人一精品久久久| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲av电影在线进入| 一边摸一边做爽爽视频免费| 十分钟在线观看高清视频www| 精品乱码久久久久久99久播| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲熟女精品中文字幕| av在线播放免费不卡| 国产免费视频播放在线视频| 1024视频免费在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 午夜免费鲁丝| 国产成人精品无人区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 欧美中文综合在线视频| 亚洲av电影在线进入| 中文亚洲av片在线观看爽 | 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99国产精品99久久久久| 99riav亚洲国产免费| 少妇精品久久久久久久| 日日夜夜操网爽| 色精品久久人妻99蜜桃| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产成人av激情在线播放| 久久99一区二区三区| 好男人电影高清在线观看| 成人影院久久| 精品免费久久久久久久清纯 | 大香蕉久久网| 一级黄色大片毛片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 91国产中文字幕| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 成人国产一区最新在线观看| 国产高清videossex| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产激情久久老熟女| 亚洲人成77777在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产欧美日韩一区二区三| 香蕉久久夜色| 波多野结衣一区麻豆| 久热这里只有精品99| 国产亚洲精品一区二区www | 久久 成人 亚洲| 久久久久国内视频| 免费少妇av软件| 热re99久久国产66热| 青草久久国产| 亚洲国产看品久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一区福利在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 99香蕉大伊视频| 久久天堂一区二区三区四区| 老司机亚洲免费影院| 老司机午夜十八禁免费视频|