海南地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬血清流行病學(xué)調(diào)查

代 蕾

（海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，海南 ?？?71100）

偽狂犬?。╬seudorabies，PR）是由偽狂犬病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種可感染家畜以及其他多種野生動(dòng)物的烈性傳染病[1]， 豬是PRV 的主要宿主。臨床上PRV 可引起妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎及弱仔，仔豬出現(xiàn)腹瀉以及神經(jīng)癥狀[1]，是危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一。我國(guó)自1947 年首次報(bào)道該病以來(lái)，已經(jīng)有20多個(gè)省市報(bào)道發(fā)生了該病，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。偽狂犬野毒包括Ge、gB、gI、gG、TK 等基因，其中g(shù)E 基因是PRV 的主要毒力相關(guān)基因[3]。gE 基因缺失疫苗是我國(guó)用于預(yù)防豬偽狂犬病的疫苗， 免疫該疫苗的豬不會(huì)產(chǎn)生gE基因抗體[4]。因此使用gE 基因抗體檢測(cè)試劑盒能夠檢測(cè)出PRV 野毒抗體，使用gB 抗體檢測(cè)試劑盒可以了解接種PRV 疫苗免疫保護(hù)情況。

為了調(diào)查海南地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬病毒野毒感染情況，本試驗(yàn)在2018 年1月-5月選取了10 個(gè)豬偽狂犬gE 基因缺失疫苗免疫的規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)采集豬血清樣品600 份，進(jìn)行豬偽狂犬病病毒gB、gE 抗體檢測(cè)，以期為海南各豬場(chǎng)豬偽狂犬病凈化提供幫助。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

2018年1月-5月采集我省10 個(gè)(A、B、C、D、E、F、G、H、I、J) 規(guī)模化豬場(chǎng)(均免疫的是Bartha．gE 基因缺失疫苗， 未曾免疫過(guò)gE 基因未缺失疫苗)共600 份血清樣品，每個(gè)場(chǎng)隨機(jī)抽取采集10 份公豬血清、10 份母豬血清、30 份仔豬血清、10 份育肥豬血清。

1.2 檢測(cè)試劑

IDEXX PRV-gE 檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：130312，美國(guó)IDEXX 公司)和IDEXX PRV-gB 抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：130118，美國(guó)IDEXX 公司)。

1.3 主要儀器設(shè)備

離心機(jī)、微量加樣器，購(gòu)自德國(guó)Eppendorf 公司；iMARK 型酶標(biāo)儀，購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD；自動(dòng)洗板機(jī)，購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD。

1.4 檢測(cè)方法

利用阻斷ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）的方法，具體操作步驟詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

1.5 結(jié)果判定

檢測(cè)每孔OD650的值，OD650陰性對(duì)照平均值減去OD650陽(yáng)性對(duì)照平均值差必須≥0.30，否則結(jié)果不成立。

每孔OD650的值用S 表示，N 為陰性對(duì)照OD650的平均值。

如果S/N〉0.70 判定gB 或者gE 抗體結(jié)果為陰性；S/N≤0.60 為陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 10 個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬gE 和gB 抗體總體檢測(cè)結(jié)果

10 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)600 份血清PRV-gE 抗體、PRV-gB 抗體ELISA 檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1 可知，600 份樣品中PRV-gE 抗體陽(yáng)性樣品有81份，PRV-gE 抗體陽(yáng)性率為13.5%，說(shuō)明豬場(chǎng)中存在野毒感染；600 份樣品中PRV-gB 抗體陽(yáng)性樣品有444 份，PRV-gB 抗體陽(yáng)性率為74%，說(shuō)明豬場(chǎng)中PRV 免疫合格率基本達(dá)標(biāo)， 豬場(chǎng)對(duì)PRV 病一定保護(hù)力。由表1 可知，A、F、G、H、I 場(chǎng)PRV-gE抗體陽(yáng)性率均低于10%以下， 尤其是H 場(chǎng)PRV-gE 抗體陽(yáng)性率為0，這些場(chǎng)開(kāi)展豬偽狂犬凈化工作具有很好的基礎(chǔ)。

表1 10 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬gE 和gB 抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同階段豬群豬偽狂犬血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

從表2 可知，PRV gE 抗體陽(yáng)性率最高的是育肥豬群（37%），其次是仔豬群（27%）和公豬群（12%），最低是母豬群（4%）；PRV gB 抗體陽(yáng)性率最高為公豬（100%），其次是母豬（97%），育肥豬（63%）和仔豬（60.7%）較低。

表2 不同階段豬群豬偽狂犬gE 和gB 抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

3 小結(jié)與討論

本調(diào)查10 個(gè)集約化豬場(chǎng)的600 份豬血清檢測(cè)的結(jié)果顯示，偽狂犬病毒野毒(gE 基因)抗體平均陽(yáng)性率為13.33%， 其中豬場(chǎng)野毒抗體最低為0%， 最高為51.66%， 而群體陽(yáng)性率中母豬為4%，公豬為12%，仔豬為9%，保育豬為37%；偽狂犬中和(gB 基因)抗體平均陽(yáng)性率為73.67%，其中豬場(chǎng)中和抗體最低為51.7%， 最高為90%，而群體陽(yáng)性率中母豬為97%，公豬為100%，仔豬為60.7%，保育豬為63%。我省豬場(chǎng)存在野毒感染情況，PR 免疫效果在養(yǎng)殖場(chǎng)之間和群體間存在差異，規(guī)?；i場(chǎng)要增加抗體檢測(cè)頻率，針對(duì)抗體水平較低的豬群，要盡快補(bǔ)免，及時(shí)淘汰感染PRV 的豬和免疫耐受豬， 逐步實(shí)現(xiàn)PRV 的凈化。

2012年國(guó)務(wù)院辦公廳印發(fā)《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020 年）》[國(guó)辦發(fā)（2013）31號(hào)]要求，到2020 年全國(guó)所有種豬場(chǎng)豬偽狂犬要達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)[5]。然而，由于PRV 出現(xiàn)變異、毒力返強(qiáng)等情況，PR 頻發(fā)和PR 野毒感染居高不下[6]。通過(guò)本次調(diào)查已發(fā)現(xiàn)豬偽狂犬野毒感染的普遍性，因此應(yīng)提高重視，加強(qiáng)防治。