投飼頻率對雜交魴生長、飼料利用、消化酶活性及魚體生化組成的影響

邱婷婷 王秀娟 馬恒甲 吳玉波 陳曉潔 陳曉榕 鮑俊東

摘要：為研究投飼頻率對雜交魴生長、飼料利用、消化酶活性及魚體生化組成的影響，在室外微流水水槽中以配合飼料按0.5、1、2、3和4次/d的投飼頻率分別投喂雜交魴幼魚8周。結果表明，投飼頻率從0.5次/d增加至3次/d時，雜交魴的體增重顯著增加，隨后投飼頻率從3次/d增加至4次/d時，體增重并未顯著提高。雜交魴的攝食率和魚體脂肪含量隨著投飼頻率的增加而顯著增加，而試驗魚的腸道胰蛋白酶活性和魚體水分含量則顯著降低。餌料系數(shù)隨著投飼頻率的增加呈現(xiàn)先降低后增加的趨勢，且0.5次/d組最高，而2次/d和3次/d組最低。各試驗組之間的腸道淀粉酶活性、腸道脂肪酶活性、魚體的蛋白質含量、灰分含量及肌肉氨基酸組成均無顯著差異。雜交魴的適宜投飼頻率為3次/d，其飼料利用效率最高。

關鍵詞：雜交魴;投飼頻率;體增重;飼料利用;消化酶;魚體生化組成

中圖分類號：S964.3? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）08-0105-05

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.08.024? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Abstract： An eight-week feeding trial was conducted to examine the growth， feed utilization， digestive enzymes and body composition of juvenile hybrid bream at different feeding frequencies. Fish were fed a test diet at 0.5，1，2，3 or 4 meals/d. The weight gain significantly increased with increase in feeding frequency from 0.5 to 3 meal/d， and afterward did not change with feeding frequency from 3 to 4 meal/d. With the increasing of feeding frequency， the feed intake and body lipid content of fish significant increased， while intestinal trypsin activity and body moisture content of fish significant decreased. The feed conversion ratio exhibited a downward trend first and then an upward trend， with the increasing of feeding frequency， and fish fed 0.5 meals/d exhibited highest FCR， while fish fed 2 and 3 meals/d exhibited lowest FCR. No significant differences were found in intestinal amylase activity， intestinal lipase activity， body crude protein content， body ash content and muscle amino acid composition among all the feeding frequencies. The present study reveals that the optimum feeding frequency is 3 meals/d for hybrid bream with the highest feed utilization.

Key words： hybrid bream; feeding frequency; weight gain; feed utilization; digestive enzyme; body composition

當餌料營養(yǎng)完全滿足魚類的生長需求時，投飼策略是提高魚類養(yǎng)殖效益的有效措施[1]。合理的投飼策略不僅可以減少餌料的浪費，同時也可降低養(yǎng)殖魚類對水體環(huán)境的負面影響[2]，而不恰當?shù)耐讹暡呗詫е卖~類養(yǎng)殖成本增加、個體差異變大、成活率降低等[3]。魚類的投飼策略主要包括投飼時間、投飼頻率、投飼水平及攝食節(jié)律等方面。目前，相關學者已廣泛評估多種養(yǎng)殖魚類的投飼水平和投飼頻率等飼喂制度[4-6]。研究發(fā)現(xiàn)，適宜的投飼頻率不僅能提高養(yǎng)殖魚類的生長性能和飼料利用效率，也能降低養(yǎng)殖管理過程中的勞動力成本與飼養(yǎng)成本[7，8]?？梢?，投飼頻率是一種相對實用的投飼策略[9]。

雜交魴是以三角魴（Megalobrama terminalis Richardson，♀）為母本、翹嘴紅鲌（Erythroculter ilishaeformis，♂）為父本雜交而得到的新品種。雜交魴是一種雜食性淡水養(yǎng)殖魚類，體型較大。由于雜交魴的生長速度快、適應環(huán)境能力強、營養(yǎng)組成豐富等特點，已成為浙江、江蘇等省廣泛養(yǎng)殖的新品種[10]。目前，有關雜交魴的飼喂制度均基于1 d投喂兩次，對雜交魴適宜的投喂時間和投飼頻率缺乏系統(tǒng)研究。為此，本研究旨在查明優(yōu)化雜交魴生長、飼料利用效率、消化酶活性和魚體生化組成的最佳投飼頻率，以期為雜交魴商業(yè)化池塘養(yǎng)殖提供合理的管理策略。

1? 材料與方法

1.1? 試驗飼料與試驗設計

試驗所用的蒸氣干燥紅魚粉（由新西蘭進口）;寵物級雞肉粉（由美國進口）;去皮豆粕、菜粕、棉粕、次粉、面粉和魚油等均購自浙江省鴻利飼料有限公司（德清，中國）;維生素和礦物質預混物購自帝斯曼公司（上海，中國）。試驗飼料原料的主要營養(yǎng)組成見表1。

所有飼料原料粉碎后，經(jīng)40目過篩，按飼料配方準確稱重并用手混勻，再在攪拌機中加水混合? 10 min，最后用SLX-80型單螺桿飼料膨化機制成的顆粒飼料（3 mm×5 mm）。壓制切割的顆粒飼料置于室溫下，自然陰干。風干后的顆粒飼料用自封袋密封，使用前冷凍保存在-20 ℃中。試驗飼料的營養(yǎng)配方見表2，投飼頻率包括0.5次/d（每2 d投喂1次，08：00）、1次/d（1 d投喂1次，08：00）、2次/d（1 d投喂2次，08：00和16：00）、3次/d（1 d投喂3次，08：00、12：00和16：00）和4次/d（1 d投喂4次，08：00、11：00、14：00和17：00）。

雜交魴幼魚由國家級三角魴原種場提供。飼養(yǎng)試驗地點在浙江省杭州市農業(yè)科學研究院水產研究所。試驗前，挑選體質健康、大小相近的幼魚450尾置于室外15個微流水水槽（直徑80 cm，高70 cm，容積350 L）中馴養(yǎng)7 d，每個水槽30尾魚。暫養(yǎng)期間，每天8：00和16：00分別飽食投喂雜交魴。

1.2? 養(yǎng)殖試驗

試驗開始前，將暫養(yǎng)的雜交魴停食24 h，每次隨機取20尾魚，群體稱重后隨機放入塑料水槽中。每尾雜交魴幼魚的初始體重為（10.6±0.8） g。每個試驗處理設置3個重復，共用15個塑料水槽。放養(yǎng)結束后，從剩余的雜交魴中隨機取3組魚（每組15尾魚），解剖，并稱重后，置于-20 ℃中保存，用于魚體初始體成分分析的樣品。

試驗期間，配合飼料按0.5、1、2、3和4次/d的投飼頻率分別飽食投喂試驗魚。采用微流水（流速2 L/min）養(yǎng)殖試驗魚，并在塑料水槽內持續(xù)充氣。試驗期間水溫的變化范圍為27.8～33.0 ℃，pH為6.8± 0.1，溶氧量始終大于5.0 mg/L，光照周期保持14 h光照和10 h黑暗。

飼養(yǎng)試驗周期持續(xù)56 d。飼養(yǎng)試驗結束后，雜交魴禁食24 h，然后將每個塑料水槽中的魚依次捕出、計數(shù)并群體稱重。從每個水槽中取3尾雜交魴，解剖，取出背肌肌肉和腸道樣品后保存于-20 ℃。另取3尾雜交魴用于終末魚體成分分析的樣品。

1.3? 化學分析

所有試驗樣品化凍后，在120 ℃的高壓蒸氣滅菌鍋內蒸煮20 min，然后置于75 ℃烘箱內烘干。根據(jù)AOAC[11]方法分析試驗魚和飼料樣品的水分、粗蛋白質（凱氏定氮法）、粗脂肪（乙醚抽提法）和灰分（550 ℃灼燒法）含量;采用釩鉬酸銨顯色法測定磷含量;采用Sykam-433氨基酸法分析魚體肌肉的氨基酸組成。腸道樣品中的淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性根據(jù)南京建成生物工程研究所試劑盒的方法測定。

1.4? 數(shù)據(jù)計算和統(tǒng)計分析

試驗魚的各項指標分別根據(jù)以下公式計算：

式中，I為每個塑料水槽內投喂的飼料量（g）;W0和Wt分別為試驗開始和結束時雜交魴魚體重（g）;N0和Nt分別為試驗開始和結束時每個塑料水槽內魚尾數(shù);t為試驗時間（d）。

采用單因素方差分析（One-way ANOVA）方法檢驗投飼頻率對FBW、WG、FI、FCR、腸道消化酶活性（淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶）、魚體組成（水分、蛋白質、脂肪和灰分）及肌肉氨基酸組成的影響，采用Duncans test多重比較方法檢驗處理間差異。取P<0.05為差異顯著性水平。利用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計分析。

2? 結果與分析

2.1? 投飼頻率對雜交魴幼魚生長和飼料利用的影響

投飼頻率從0.5次/d增加到3次/d時，試驗魚的FBW和WG顯著增加（P<0.05，表3）。當投飼頻率從3次/d增加到4次/d時，F(xiàn)BW和WG并未顯著提高（P>0.05）。投飼頻率0.5、1和2 次/d時的FBW和WG顯著低于投喂3、4次/d（P<0.05），且投喂3、4次/d時的FBW和WG之間均無顯著差異（P>0.05）。FI隨著投飼頻率的增加而增加（P<0.05）。投喂0.5、1次/d時的FI顯著低于投喂2、3和4次/d的FI，而試驗魚投喂2、3和4次/d之間的FI均無顯著差異（P>0.05）。FCR隨著投飼頻率的增加呈現(xiàn)先降低后增加的趨勢（P<0.05），且0.5次/d組具有最高的FCR，而2次/d和3次/d組的FCR最低（P<0.05）。

2.2? 投飼頻率對雜交魴幼魚消化酶活性的影響

由表4可以看出，試驗魚投喂0.5、1、2、3和4次/d之間的腸道淀粉酶活性和腸道脂肪酶活性均無顯著差異（P>0.05），而試驗魚的腸道胰蛋白酶則隨著投飼頻率的增加而顯著降低（P<0.05）。投喂0.5次/d的腸道胰蛋白酶顯著高于投喂4次/d，而試驗魚投喂0.5、1、2和3次/d組之間或1、2、3和4次/d組之間的腸道胰蛋白酶均無顯著差異（P>0.05）。

2.3? 投飼頻率對雜交魴幼魚生化組成的影響

投飼頻率顯著影響魚體的生化組成。隨著投飼頻率的增加，魚體的水分含量呈顯著下降趨勢，而魚體脂肪含量則呈上升趨勢（P<0.05，表5）。試驗魚投喂0.5次/d、1、2、3和4次/d的魚體蛋白質和灰分含量均無顯著差異（P>0.05）。

試驗魚肌肉中共檢測到18種氨基酸，但必需氨基酸（Arg、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Thr、Trp和Val）和非必需氨基酸（Asp、Ser、Glu、Gly、Ala、Tyr、Cys和Cys）組成均無明顯差異（P>0.05，表6）。

3? 討論

3.1? 投飼頻率對雜交魴幼魚生長和飼料利用的影響

不同投飼頻率會顯著影響?zhàn)B殖魚類的增重率、攝食率和餌料利用效率[12]。當投喂頻率在一定范圍內增加時，魚類的生長速度隨之加快，之后隨著投喂頻率的繼續(xù)增加，魚類的生長保持在相對穩(wěn)定的狀態(tài)[13]。本研究中雜交魴的投飼頻率從0.5次/d增加到3次/d，魚體的體增重顯著增加。隨后，當投飼頻率從3次/d增加到4次/d時，雜交魴的體增重不再顯著。結果表明，雜交魴幼魚在3次/d的投飼頻率下可以達到最大的生長速度。同樣，在對亞洲鱸魚（Lates calcarifer）[7]、大蓋巨脂鯉（Colosmma macropomum）[14]、巖鯛（Oplegnathus fasciatus）[15]的研究中發(fā)現(xiàn)，其生長表現(xiàn)在投飼頻率為3次/d時達到最佳。

有關投飼頻率提高魚類生長的原因主要有以下3種觀點：①僅通過提高魚類的攝食量來實現(xiàn)。例如，在研究投飼頻率對雜交太陽魚（Lepomis cyanellus× L. macrochirus）影響中發(fā)現(xiàn)，當投飼頻率從1次/d增加到3或4次/d時，其魚體的增重率達到最高峰，魚的攝食量也顯著提高，但不同投飼頻率對雜交太陽魚的餌料系數(shù)卻無顯著影響[16]。同樣，何利君等[17]報道投飼頻率主要通過提高南方鲇（Silurus meridionalis）攝食量來促進其生長，而與飼料轉化率無關。②僅通過提高魚類的飼料轉化效率來實現(xiàn)。Dwyer等[18]發(fā)現(xiàn)在一定范圍內增加投飼頻率時，黃蓋鰈（Limanda ferruginea）幼魚的生長速率與飼料轉化率同時升高。俄羅斯鱘（Acipenser gueldenstaedtii）幼魚的增重率也隨著投飼頻率的增加持續(xù)升高，而餌料系數(shù)呈現(xiàn)先下降后平穩(wěn)的趨勢[19]。③由魚類的攝食量和飼料利用效率共同作用的結果。Zhao等[20]報道投飼頻率的提高可以顯著加快異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）的生長，提高其攝食率和飼料轉化效率。本研究中雜交魴幼魚的FI隨著投飼頻率的增加而增加，其FCR則隨著投飼頻率的增加而降低，表明雜交魴WG的增加主要得益于攝食量和飼料利用效率的提高。這與在卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）[9]和異育銀鯽[20]等魚類中的研究結果相一致。

3.2? 投飼頻率對雜交魴幼魚腸道消化酶活性的影響

研究表明，投飼頻率會改善大黃魚（Pseudosciaena crocea）仔魚的消化酶活性[21]。崔超等[19]報道投飼頻率不會對俄羅斯鱘幼魚肝臟中蛋白酶活性產生影響，而淀粉酶和脂肪酶活性則隨著投飼頻率的增加而顯著升高。然而，王武等[22]認為投飼頻率不會對瓦氏黃顙魚（Pelteobaggrus vachelli）肝胰腺中的蛋白酶活性產生影響，而腸中的蛋白酶活性則隨投飼頻率的增加而顯著降低。隨著投飼頻率增加，條石鯛（Oplegnathus fasciatus）幼魚的主要消化酶活性呈現(xiàn)顯著下降趨勢[23]。本試驗的研究結果也顯示，雜交魴腸道中的淀粉酶、脂肪酶活性不受投飼頻率的影響，而蛋白酶活性則隨著投飼頻率的增加呈現(xiàn)下降趨勢。試驗魚的胃腸排空時間隨著投喂頻率的變化而變化，減少胃腸排空時間將導致食物消化率降低[24]，而過高的投飼頻率將導致水產養(yǎng)殖動物的胃腸負擔加重[1]。因此，魚類胃腸排空時間的變化是導致投飼頻率對蛋白酶活性產生變化的一個重要機制。

3.3? 投飼頻率對雜交魴幼魚生化組成的影響

魚體的生化組成同時受內源性因子和外源性因子的影響。養(yǎng)殖魚類的品種類型、生長階段的差異等內源性因子顯著影響著魚體所含蛋白質和灰分含量的多少，而食物營養(yǎng)、投飼策略等外源性因子決定了魚體所含脂肪的高低[25]。本研究中當投飼頻率由0.5次/d增加到4次/d時，雜交魴魚體水分含量顯著降低，脂肪含量顯著升高，而魚體蛋白質和灰分含量無顯著差異，表明投飼頻率的不同會顯著影響?zhàn)B殖魚類的魚體生化組成。一般認為，增加投飼頻率會促進魚類攝食量的增加，而過剩的營養(yǎng)物質則通過生理代謝轉化為脂肪而儲存在魚體內，導致魚體脂肪含量上升，水分含量下降[26]。Tian等[27]報道投飼頻率的增加會導致團頭魴（Megalobrama amblycephala）魚體的水分含量降低而脂肪含量顯著升高。同樣，在大黃魚[12]、牙鲆（Paralichthys olivaceus）[28]、花鱸（Lateolabrax maculatus）[29]的研究中也出現(xiàn)類似的結果。

蛋白質在生物內的吸收和利用主要通過小分子氨基酸來實現(xiàn)。氨基酸是蛋白質的基本構成單元，氨基酸的組成和比例不僅決定了蛋白質的構造和功能，也影響著養(yǎng)殖魚類的口感和風味[30]。因此，氨基酸的組成模式是魚類營養(yǎng)品質的重要評判標準[10]。本研究中投飼頻率對魚體肌肉中的必需氨基酸和非必需氨基酸均無顯著影響，表明投飼頻率不會對魚體肌肉的營養(yǎng)品質產生負面影響。

參考文獻：

[1] BOOTH M A，TUCKER B J，ALLAN G L，et al. Effect of feeding regime and fish size on weight gain，feed intake and gastric evacuation in juvenile Australian snapper Pagrus auratus[J].Aquaculture，2008，282：104-110.

[2] TUCKER B J，BOOTH M A，ALLAN G，et al. Effects of photoperiod and feeding frequency on performance of newly weaned Australian snapper Pagrus auratus[J].Aquaculture，2006，258：514-520.

[3] QIN J，F(xiàn)AST A W，DEANDA D，et al. Growth and survival of larval snakehead （Channa striatus） fed different diets[J].Aquaculture，1997，148：105-113.

[4] LUO L，LI T，XING W，et al. Effects of feeding rates and feeding frequency on the growth performances of juvenile hybrid sturgeon，Acipenser schrenckii Brandt♀×A. baeri Brandt♂[J].Aquaculture，2015，448：229-233.

[5] SILVA C R， GOMES L C， BRANDO F R. Effect of feeding rate and frequency on tambaqui （Colosmma macropomum） growth，production and feeding costs during the first growth phase in cages[J].Aquaculture，2007，264：135-139.

[6] LI M H，ROBINSON E H，OBERLE D F，et al. Effects of feeding rate and frequency on production characteristics of pond-raised hybrid catfish[J].North American journal of aquaculture，2012，74（2）：142-147.

[7] BISWAS G，THIRUNAVUKKARASU A R，SUNDARAY J K，et al. Optimization of feeding frequency of Asian seabass （Lates calcarifer） fry reared in net cages under brackishwater environment[J].Aquaculture，2010，305：26-31.

[8] VILLARROEL M，ALAVRIO J M R，LOPEZ-LUNA J. Effect of feeding frequency and one day fasting on tilapia（Oreochromis niloticus） and water quality[J].Israeli journal of aquaculture-bamidgeh，2011，63：609-615.

[9] WU Y，HAN H，QIN J，et al. Effect of feeding frequency on growth，feed utilization，body composition and wastes output of juvenile golden pompano（Trachinotus ovatus） reared in net pens[J].Aquaculture research，2015，46：1436-1443.

[10] 馬恒甲，劉新軼，黃? 輝，等.三角魴（♀）×翹嘴紅鲌（♂）F1及其親本肌肉成分與必需氨基酸組成模式的比較分析[J].漁業(yè)研究，2016，38（4）：281-287.

[11] AOAC. Official methods of analysis.16th ed[C].Assoc Off Anal Chem，Arlington，VA，1995.

[12] 孫瑞健，張文兵，徐? 瑋，等.飼料蛋白質水平與投喂頻率對大黃魚生長、體組成及蛋白質代謝的影響[J].水生生物學報，2013， 37（2）：281-289.

[13] WANG Y，KONG L J，LI K，et al. Effects of feeding frequency and ration level on growth，feed utilization and nitrogen waste output of cuneate drum（Nibea miichthioides） reared in net pens[J].Aquaculture，2007，271：350-356.

[14] SILVA C R， GOMES L C，BRANDO F R. Effect of feeding rate and frequency on tambaqui（Colosmma macropomum） growth，production and feeding costs during the first growth phase in cages[J].Aquaculture，2007，264：135-139.

[15] OH S Y，MARAN B A V. Feeding frequency influences growth，feed consumption and body composition of juvenile rock bream（Oplegnathus fasciatus）[J].Aquaculture international，2015，23：175-184.

[16] WANG N，HAYWARD R S，NOLTIE D B. Effect of feeding frequency on food consumption，growth，size variation，and feeding pattern of age-0 hybrid sunfish[J].Aquaculture，1998，165（3）：261-267.

[17] 何利君，謝小軍，艾慶輝.飼喂頻率對南方鲇的攝食率、生長和飼料轉化效率的影響[J].水生生物學報，2003，27（4）：434-436.

[18] DWYER K S，BROWN J A，PARRISH C，et al. Feeding frequency affects food consumption，feeding pattern and growth of juvenile yellowtail flounder （Limanda ferruginea）[J].Aquaculture，2002，213（1-4）：279-292.

[19] 崔? 超，禹? 娜，龍麗娜，等.投飼頻率對俄羅斯鱘幼魚生長、消化酶活力和氨氮排泄的影響[J].海洋漁業(yè)，2014，36（1）：35-43.

[20] ZHAO S，HAN D，ZHU X，et al. Effects of feeding frequency and dietary protein levels on juvenile allogynogenetic gibel carp （Carassius auratus gibelio） var. CAS III：Growth，feed utilization and serum free essential amino acids dynamics[J].Aquaculture research，2016，47：290-303.

[21] XIE F，AI Q，MAI K，et al. The optimal feeding frequency of large yellow croaker（Pseudosciaena crocea，Richardson）larvae[J].Aquaculture，2011，311（1-4）：162-167.

[22] 王? 武，周錫勛，馬旭洲，等.投喂頻率對瓦氏黃顙魚幼魚生長及蛋白酶活力的影響[J].上海海洋大學學報，2007，16（3）：224-229.

[23] 宋? 國，彭士明，孫? 鵬，等.饑餓與再投喂及投喂頻率對條石鯛幼魚生長和消化酶活力的影響[J].中國水產科學，2011，18（6）：1269-1277.

[24] 孫曉鋒，馮? 健，陳江虹，等.投喂頻率對尼羅系吉富羅非魚幼魚胃排空、生長性能和體組成的影響[J].水產學報，2011，35（11）：1677-1683.

[25] SHEARER K D. Factors affecting the proximate composition of cultured fishes with emphasis on salmonids[J].Aquaculture， 1994，119（1）：63-88.

[26] CHO S H，LIM Y S，LEE J H，et al. Effects of feeding rate and feeding frequency on survival，growth，and body composition of Ayu post-larvae Plecoglossus altivelis[J].Journal of the world aquaculture society，2003，34（1）：85-91.

[27] TIAN H Y，ZHANG D D，LI X F，et al. Optimum feeding frequency of juvenile blunt snout bream Megalobrama amblycephala[J].Aquaculture，2015，437：60-66.

[28] LEE S M，PHAM M A. Effects of feeding frequency and feed type on the growth，feed utilization and body composition of juvenile olive flounder，Paralichthys olivaceus[J].Aquaculture research，2010，41（9）：e166-e171.

[29] RAHMAN M M，LEE S M. Effect of dietary lipid level and feeding frequency on the growth，feed utilization，and body composition of juvenile spotted seabass，Lateolabrax maculatus[J].Journal of the world aquaculture society，2017，48：634-642.

[30] 施永海，張根玉，張海明，等.配合飼料和活餌料喂養(yǎng)刀鱭肌肉營養(yǎng)品質分析與比較[J].動物營養(yǎng)學報，2014，26（2）：427-436.

收稿日期：2018-10-12

基金項目：浙江省公益技術研究項目（LGN19C190007）;臺州市科技計劃項目（1701ny05）;杭州市農業(yè)科學研究院青年科技人員培養(yǎng)基金項目（2017HNQN-02）

作者簡介：邱婷婷（1996-），女，福建莆田人，本科，主要從事水產養(yǎng)殖方面的研究工作，（電子信箱）1425204246@qq.com;通信作者，吳玉波（1985-），博士，主要從事水產養(yǎng)殖研究工作，（電話）15867032595（電子信箱）yubowu@126.com。