不同劑量配伍的三黃瀉心湯總蒽醌含量比較研究

魏江存 秦祖杰 歐和生 謝臻 陳勇 李金洲 陳子雋 韓倩

摘要：建立紫外分光光度法測定不同劑量配伍的瀉心湯中總蒽醌的含量。以大黃素為對照品，用濃度為1%的醋酸鎂甲醇溶液作為顯色劑，在512 nm波長處測定吸光度，計(jì)算不同劑量配伍的瀉心湯總蒽醌的含量，最后比較其差異。結(jié)果表明，不同劑量配伍的瀉心湯總蒽醌含量有差異，這可能與配伍后不同劑量的黃芩與黃連對大黃總蒽醌溶出率的影響有關(guān)，該方法可作為不同劑量配伍的中藥方劑質(zhì)量控制方法，為今后綜合開發(fā)和利用不同劑量配伍的中藥方劑提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：瀉心湯;劑量配伍;紫外分光光度法;總蒽醌

中圖分類號：O657.32? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）09-0098-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.09.022? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Abstract： To establish a UV spectrophotometric method for the determination of total anthraquinones in Xiexin decoction with different doses. The content of total anthraquinone in Xiexin soup at different doses was calculated by determining at 512 nm wavelength and the solution of magnesium acetate with a concentration of 1% as a colorant. The content of the total anthraquinone in Xiexin soup with different doses was calculated， and the difference was compared. This method reveals the change of total anthraquinone content in Xiexin soup with different dosage. The content of total anthraquinones in Xiexin soup with different doses is different， which may affect the dissolution rate of total anthraquinone with different doses of Scutellariz baicalensis and Coptis chinensis. This method can be used as the quality control method of traditional Chinese medicine prescription in different dosages， and the combination of different dosage of traditional Chinese medicine in the future.

Key words： Xiexin decoction; dose compatibility; ultraviolet spectrophotometry; total anthraquinone

中藥復(fù)方是中國中醫(yī)臨床治療的基礎(chǔ)，也是中醫(yī)理論的體現(xiàn)。本試驗(yàn)的三黃瀉心湯來自張仲景的《金匱要略》[1]，方劑中君藥大黃主要活性物質(zhì)成分為蒽酮類、番瀉苷類等[2]，黃芩主要活性成分有黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等黃酮類成分[3，4]，黃連主要活性成分物質(zhì)有小檗堿、黃連堿、巴馬汀等生物堿物質(zhì)[5-7]。三黃瀉心湯主要有抗菌[8-11]、抗細(xì)菌內(nèi)毒素[12]、降血糖[13]、保護(hù)胃黏膜[14]和瀉下[15]等藥理作用，還對心血管系統(tǒng)及血液系統(tǒng)有影響[16-20]，對腦缺血再灌注也有很好的抗損傷作用[21]。

常將大黃與其他藥物配伍使用，如大黃與黃芩、黃連、厚樸、枳實(shí)等中藥材配伍使用，從而改變其化學(xué)活性成分、降低肝毒性等[22，23]。研究發(fā)現(xiàn)，大黃和黃芩配伍時(shí)，蒽醌類成分溶出率增加，而與黃連配伍時(shí)，蒽醌類成分溶出率降低，三者合煎時(shí)，總蒽醌的溶出率增加。大黃、黃連、黃芩配伍組合成瀉心湯來降低大黃的毒性，并通過與不同劑量黃連、黃芩的配伍來改變蒽醌類成分的溶出率，從而進(jìn)一步篩選出不同劑量配伍的總蒽醌含量較高的劑量配伍比例，具有一定的科學(xué)意義。

1? 材料與方法

1.1? 藥材與試劑

大黃（批號：161008891、170307001）、黃連（批號：161106631）、黃芩（批號：161105141），3種藥材均購于廣州康美藥業(yè)股份有限公司;甲醇（色譜純，F(xiàn)isher）、醋酸鎂、氯仿購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;大黃素對照品（批號：170224），純度≥98%，購于上海融禾醫(yī)藥科技有限公司。

1.2? 儀器

島津UV1780型紫外;純水儀，法國密理博;電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;UV-1800 型紫外分光光度計(jì)，日本島津公司;全波長酶標(biāo)儀，美國BIOTEK-Epoch;ZH-B6型代謝籠，安徽正華有限公司;PYX-190H-B型育溫箱，廣東科力有限公司;離心機(jī)，德國Thermo Fisher;HWS12型水浴鍋，上海一恒公司;DZTW型電熱套，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司。

1.3? 方法

1.3.1? 對照品溶液的配制? 取大黃素對照品10.08 mg，置于25 mL容量瓶中，加1%醋酸鎂甲醇至刻度，搖勻，即得0.403 2 mg/mL。

1.3.2? 供試品的制備? 按照劑量配伍比例分別精密稱取4組瀉心湯藥材：①大黃∶黃芩∶黃連=1∶0.97∶0.028;②大黃∶黃芩∶黃連=1∶1.70∶0.096;③大黃∶黃芩∶黃連=1∶1.18∶0.61;④大黃∶黃芩∶黃連=1∶0.5∶0.5。

精密稱取適量藥材，加10倍量的純水浸泡30 min后加熱至微沸，持續(xù)微沸狀態(tài)煎煮20 min，過濾后13 000 r/min離心10 min，隨后取上清液5 mL，加8%鹽酸10 mL超聲3 min，再加20 mL氯仿超聲30 min，氯仿分層，酸液再用氯仿萃取3次，每次10 mL，合并氯仿溶液并揮干，殘?jiān)?%醋酸鎂甲醇溶液定容至50 mL，備用。

1.3.3? 波長的選擇? 精密取對照品溶液0.5 mL，置25 mL容量瓶，加1%醋酸鎂甲醇溶液至刻度，搖勻。以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白對照，按紫外-可見分光光度法，在400～800 nm波長范圍內(nèi)掃描（圖1）。結(jié)果表明， 大黃素在512 nm處有較大吸收，且該波長不易受到溶劑和雜質(zhì)的干擾，故選擇測定波長512 nm。

1.3.4? 測定? 以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白對照，于512 nm波長處測定其吸光度，計(jì)算總蒽醌的含量。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 方法學(xué)考察

2.1.1? 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制? 精密取大黃素對照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50和2.00 mL分別置10 mL容量瓶，加1%醋酸鎂溶液至刻度，于512 nm波長處測定吸光度[24]。以大黃素濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得線性方程y=10.092x+0.009 8，R2=0.999 1，即大黃素在0.010 1～0.080 6 mg/mL內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.1.2? 精密度試驗(yàn)? 以劑量①的比例稱取藥材，精密稱定，按照“1.3.2”方法制備樣品，以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白，于512 nm波長處連續(xù)6次測定吸光度，結(jié)果測得RSD為0.50%，表明該方法精密度良好。

2.1.3? 重復(fù)性試驗(yàn)? 按照“1.3.2”方法各制備6份供試品，以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白，在512 nm處測吸光度，計(jì)算瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③和劑量④水提取液的平均濃度分別為0.631 4、0.675 8、0.286 2和0.402 4 mg/mL;RSD分別為2.15%、1.46%、1.83%和1.27%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.4? 穩(wěn)定性試驗(yàn)? 按照劑量比例稱取藥材，精密稱定，按照“1.3.2”方法制備供試品，以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白，于512 nm處分別在0、10、20、30、40、50、60、80、100、120 min測定吸光度，計(jì)算瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③和劑量④的RSD分別為2.25%、0.91%、1.93%和 1.58%，表明樣品在2 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.5? 加樣回收率試驗(yàn)? 按“1.3.2”方法各制備6份供試品溶液，加入適量大黃素對照品溶液，以1%醋酸鎂甲醇溶液為空白，于512 nm處測定吸光度，計(jì)算瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③和劑量④的平均加樣回收率分別為101.63%、99.90%、98.39%、99.09%，RSD分別為1.22%、1.23%、2.72%和2.11%，表明該方法加樣回收率良好。

2.2? 樣品測定

精密稱取瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③、劑量④各3批，按“1.3.2”方法制備樣品溶液，在512 nm波長處重復(fù)測定3次吸光度，計(jì)算瀉心湯劑量①、劑量②、劑量③、劑量④的總蒽醌含量分別為0.626 8、0.685 6、0.288 7和0.399 5 mg/mL，RSD分別為1.14%、1.97%、1.73%和0.73%（表1）。

3? 討論

試驗(yàn)選用紫外分光光度法來測定不同劑量配伍瀉心湯的總蒽醌含量，由于蒽醌類成分來自大黃，為了便于比較黃芩和黃連的量對瀉心湯總蒽醌的影響，通過固定大黃的劑量不變，考察大黃與不同劑量的黃連、黃芩配伍對瀉心湯總蒽醌類溶出率變化的影響。試驗(yàn)過程中通過改變黃芩和黃連的劑量，觀察大黃總蒽醌含量在提取過程中是否受黃連、黃芩的影響及影響是否顯著。不同劑量配伍的三黃瀉心湯的總蒽醌含量各有差異，劑量①、劑量②的總蒽醌含量最高，其次是劑量④，最少是劑量③，適當(dāng)增加黃芩的量或減少黃連的量有助于提高大黃總蒽醌的溶出率，引起這種變化可能與不同劑量配伍后化學(xué)成分的轉(zhuǎn)移或轉(zhuǎn)化有關(guān)，因此，想要提高復(fù)方中某一有效成分的溶出率，需要控制好復(fù)方中各藥之間的比例，才有可能提高某一臨床療效，但是復(fù)方中藥之間存在著相當(dāng)復(fù)雜的協(xié)同療效和相互作用機(jī)制，要想完全了解最優(yōu)劑量配伍比例對某有效化學(xué)成分的溶出率影響以及劑量配伍對有效成分的溶出率的規(guī)律，還需要從不同視角多學(xué)科研究。

大黃與不同劑量藥材配伍后都會引起蒽醌類成分含量的改變，有研究報(bào)道大黃蒽醌類成分對肝腎存在潛在毒性[25]。大黃與不同劑量藥材配伍后蒽醌類成分含量升高有助于減輕大黃的毒性作用，從而增強(qiáng)大黃的瀉下作用，但兩者的相關(guān)性有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

在此基礎(chǔ)上，中藥復(fù)方的化學(xué)成分研究在復(fù)方配伍過程中是否有新成分的產(chǎn)生，是否由于新成分的產(chǎn)生才顯示出復(fù)方的獨(dú)特療效。復(fù)方配伍過程中各成分的含量變化規(guī)律，是否由于各化學(xué)成分的協(xié)同作用產(chǎn)生復(fù)方的獨(dú)特療效[26]。中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)極為復(fù)雜，包括黃酮類、有機(jī)酸、生物堿、無機(jī)元素、皂苷及蛋白質(zhì)、多糖等。近年來復(fù)方配伍的化學(xué)成分研究主要集中在配伍前后個(gè)別化學(xué)成分的定量分析、復(fù)方配伍后質(zhì)變研究以及配伍后多成分定量研究[27-30]。

參考文獻(xiàn)：

[1] 苗婷婷.三黃瀉心湯研究進(jìn)展[J].湖南中醫(yī)雜志，2016，32（3）：190-192.

[2] 魏江存，陳? 勇，謝? 臻，等.中藥大黃炮制品的化學(xué)成分及藥效研究進(jìn)展[J].中國藥房，2017，28（25）：3569-3574.

[3] 吉曉麗.黃芩的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)臨床研究，2017，9（9）：128-129.

[4] 施高翔，邵? 菁，汪天明，等.黃芩及其有效成分抗菌作用新進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2014，39（19）：3713-3718.

[5] 趙? 楠，李隆云，白志川.中藥材黃連的研究現(xiàn)狀與展望[J].重慶理工大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，29（1）：53-58.

[6] 馬紅梅，陳? 剛，裴月湖.黃連化學(xué)成分的分離鑒定及其藥理活性[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，30（10）：759-763，828.

[7] 曹俊輝.復(fù)方瀉心湯的物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用研究[D].廣東汕頭：汕頭大學(xué)，2009.

[8] 秦亞東，席先蓉，梁光義，等.高效液相色譜法測定瀉心湯不同煎液中黃芩苷的含量及體外抗菌作用比較[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17（12）：2387-2389.

[9] 張秀橋，劉焱文，林清華.三黃瀉心湯兩種湯劑體外抗菌實(shí)驗(yàn)研究[J].湖北中醫(yī)雜志，2007，29（7）：61-63.

[10] 陳芳園，閔仲生.三黃瀉心湯水提物對痤瘡丙酸桿菌體外抑制實(shí)驗(yàn)[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，31（1）：10-13.

[11] 肖永平，馮四林，邱連建，等.三黃瀉心湯中西醫(yī)結(jié)合根除幽門螺桿菌感染的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥業(yè)，2011，20（15）：6-8.

[12] 熊玉霞，孟憲麗，張? 藝，等.瀉心湯及其拆方抗內(nèi)毒素作用研究[J].中藥藥理與臨床，2007，23（1）：7-9.

[13] 耿慧春，楊? 波，李彥冰.三黃瀉心湯對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠影響的研究[J].中醫(yī)藥信息，2010，27（4）：57-59.

[14] 劉保林，宣園園，王曉虎，等.三黃瀉心湯治療上消化道出血的藥效學(xué)研究[J].中藥藥理與臨床，2003，19（3）：1-3.

[15] 陳? 勇，陳子雋，魏江存，等.不同劑量配伍的瀉心湯瀉下作用比較研究[J].井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2018，39（6）：82-85，110.

[16] 白? 羽，肖? 簫，薛瑩雪，等.三黃瀉心湯有效成分逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)急性腎損傷的機(jī)制研究[J].中國生化藥物雜志，2015，8（5）：1-2.

[17] 谿忠人，大野智子.大小柴胡湯、三黃瀉心湯與祛脂酸對類固醇激素大鼠改善作用的比較研究[J].國外醫(yī)學(xué)-中醫(yī)中藥分冊，1990，12（2）：24.

[18] 劉保林，陶? 玉.三黃瀉心腸及其組方對凝血系統(tǒng)的影響[J].中藥藥理與臨床，1996，5（2）：5-6.

[19] 劉保林，劉曉華.三黃瀉心湯治療上消化道出血的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥藥理與臨床，1998，14（1）：16-18.

[20] 李靜華，魏曉芬，郭玉成，等.三黃瀉心湯不同劑型的抗炎及瀉下作用研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17（8）：1439.

[21] 張? 祎，陳? 文，孟憲麗.三黃瀉心湯對全腦缺血再灌注大鼠氧化應(yīng)激及炎性損傷的保護(hù)作用[J].中藥藥理與臨床，2014， 30（4）：1-5.

[22] 魏江存，陳? 勇，庾延和，等.中藥復(fù)方安全性因素的研究分析[J].中國民族民間醫(yī)藥，2016，25（23）：115-118.

[23] 鄧麗紅，謝? 臻，陳? 勇，等.劑量配伍對瀉心湯蒽醌類成分溶出率變化規(guī)律研究[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2018，38（6）：590-594.

[24] 魏江存，陳? 勇，謝? 臻，等.紫外-可見分光光度法測定生大黃和醋大黃的總蒽醌含量[J].井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2017，38（6）：88-92.

[25] 王伽伯，馬永剛，張? 萍，等.炮制對大黃化學(xué)成分和肝腎毒性的影響及其典型相關(guān)分析[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009，44（8）：885-890.

[26] 劉建利.中藥復(fù)方療效的物質(zhì)基礎(chǔ)及其化學(xué)成分研究方法[J].中成藥，1992（10）：49.

[27] 何? 偉，秦? 林，司淑媛.川烏與防己配伍前后烏頭堿和粉防己堿煎出量的測定[J].中草藥，2002（7）：27-29.

[28] 魏江存，秦祖杰，謝? 臻，等.大黃不同炮制品對大承氣湯瀉下作用變化研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（12）：5392-5396.

[28] 彭? 偉，蔣燕萍，傅超美，等.四逆湯中甘草與其他藥味配伍藥效成分變化規(guī)律研究[J].中國中藥雜志，2015（1）：84-88.

[30] 陳建萍，譚炳炎，吳偉康，等.四逆湯中附子甘草配伍規(guī)律研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2001（3）：16-17.

收稿日期：2018-09-30

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81360524;81660701）;廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2016GXNSFAA380148）

作者簡介：魏江存（1989-），男，廣西賀州人，藥師，碩士，主要從事中藥、民族藥質(zhì)量分析及其藥效機(jī)制研究，（電話）18177479182（電子信箱）WJC2553@163.com;通信作者，陳? 勇（1961-），男，江西南昌人，教授，主要從事中藥及其制劑質(zhì)量分析研究，（電子信箱）cy6381@163.com。