噬菌體療法治療細(xì)菌性感染研究進(jìn)展綜述

洪若軒

摘 要： 細(xì)菌性感染具有很高的致殘及致死率，對(duì)患者的健康和生命造成了嚴(yán)重威脅。然而抗生素的濫用使得細(xì)菌耐藥已成為臨床感染治療的一大棘手問(wèn)題。隨著微生物學(xué)研究的不斷深入，科學(xué)界開(kāi)始重新審視和評(píng)估噬菌體及其附屬產(chǎn)物——內(nèi)溶素（Endolysin）的治療價(jià)值。據(jù)此，對(duì)活噬菌體制劑以及內(nèi)溶素治療的研究歷程、相關(guān)改造方法以及發(fā)展方向進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞： 噬菌體療法;細(xì)菌性感染;內(nèi)溶素

中圖分類(lèi)號(hào)： F24????? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A????? doi：10.19311/j.cnki.1672-3198.2019.13.039

細(xì)菌性感染由于病情發(fā)展迅速，因此具有很高的致殘及致死率，對(duì)患者的健康和生命造成了嚴(yán)重威脅。目前，臨床所應(yīng)用的體內(nèi)抗菌方法主要是抗生素，而抗生素的濫用會(huì)引發(fā)嚴(yán)重的不良反應(yīng)且會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌耐藥現(xiàn)象，該現(xiàn)象已成為醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的問(wèn)題之一。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，科學(xué)家們開(kāi)始尋找更有效的抑制耐藥細(xì)菌生長(zhǎng)的手段，噬菌體療法因此進(jìn)入了人們的視野。所謂噬菌體療法，是指利用活噬菌體或其分泌的一種水解酶——內(nèi)溶素（endolysins）裂解細(xì)菌以治療病原菌感染的一種治療手段。噬菌體療法不僅對(duì)耐藥病原菌展現(xiàn)了良好的殺菌作用，同時(shí)具有良好的生物安全性，因而具有對(duì)抗細(xì)菌性感染的巨大潛力。

綜上所述，本文將針對(duì)噬菌體療法治療細(xì)菌性感染的研究進(jìn)行綜述，展望其未來(lái)。

1 活噬菌體制劑的臨床應(yīng)用可行性

早在20世紀(jì)20年代，科學(xué)家便利用活噬菌體制劑進(jìn)行抗細(xì)菌感染的研究與臨床實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)它具有諸多優(yōu)勢(shì)。首先，噬菌體的宿主特異性強(qiáng)，即噬菌體僅針對(duì)與之對(duì)應(yīng)的病原菌，不會(huì)破壞其他菌群;其次，噬菌體制劑治療效率高，即噬菌體在感染區(qū)域的以指數(shù)型速度進(jìn)行增殖，因此制劑使用量低;最后，噬菌體制劑具有良好的生物安全性，由于噬菌體具有自限性，無(wú)法脫離細(xì)菌宿主而生存，因此一旦宿主消失，噬菌體便自行降解并排出體外，不會(huì)在體內(nèi)滯留。從這些優(yōu)勢(shì)可以看出噬菌體療法具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

1.1 活噬菌體臨床前研究

近幾年來(lái)，多重耐藥菌種類(lèi)不斷增加，“超級(jí)細(xì)菌”不斷出現(xiàn)。令人擔(dān)憂(yōu)的是，研發(fā)新型抗生素的速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生抗性的速度，因此開(kāi)發(fā)新型的抗菌“藥物”迫在眉睫。而噬菌體因?yàn)閷?duì)其宿主菌的特異性良好，不易產(chǎn)生耐藥性，使其在應(yīng)對(duì)“超級(jí)細(xì)菌”感染中發(fā)揮了巨大作用，進(jìn)入了研究者的視野。

革蘭陽(yáng)性菌耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）以其高致病性和多重耐藥性成為人類(lèi)健康的巨大威脅。Kishor等人構(gòu)建SA感染兔模型，利用耐甲氧西林對(duì)SA進(jìn)行髓內(nèi)注射，使其感染兔骨髓，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。他發(fā)現(xiàn)利用抗生素治療時(shí)，SA引起的骨髓炎在所有（100%）病例中都無(wú)法治愈。原因是細(xì)菌生物膜的形成使抗生素活性顯著降低，無(wú)法對(duì)細(xì)菌有效殺傷。而利用噬菌體療法，其在宿主細(xì)菌中產(chǎn)生的內(nèi)溶素會(huì)降解宿主細(xì)菌生物膜，從而提高了治療效率。

此外，革蘭氏陰性菌作為醫(yī)內(nèi)感染的主要病原菌類(lèi)之一，對(duì)病人健康帶來(lái)了極大的威脅，亟需有效的抗菌手段。至今，部分研究表明活噬菌體制劑對(duì)動(dòng)物革蘭氏陰性菌感染同樣有效，療效高于普通抗生素。如黃光濤研究了噬菌體在多耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌（drug resistant Acinetobacter Baumannii，AB）創(chuàng)面局部感染治療中的應(yīng)用。在局部感染治療中，噬菌體Abp1能夠清除細(xì)菌、促使創(chuàng)面愈合。在全身感染治療中，噬菌體可以明顯提高小鼠存活率，整個(gè) 7 天的治療過(guò)程中噬菌體治療組未出現(xiàn)小鼠死亡，而陰性對(duì)照組存活率僅有7.1%。這說(shuō)明噬菌體在抑制革蘭氏陰性菌感染方面亦具有一定效果。

1.2 活噬菌體臨床應(yīng)用

隨著噬菌體療法在動(dòng)物感染模型中療效顯著，人們將目光投向噬菌體療法的有效性，這是其臨床應(yīng)用的前提。而一些科學(xué)研究也傳來(lái)了振奮人心的消息。如Wright等使用“噬菌體雞尾酒”（由6種噬菌體組成）療法在治療因耐藥性銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）引起的慢性中耳炎患者的研究表明，噬菌體治療后患者體內(nèi)致病菌的數(shù)量顯著降低，病情得到改善，約25%的患者幾乎完全康復(fù)。

噬菌體療法的安全性也是其應(yīng)用于臨床的必要條件，在一項(xiàng)由美國(guó)食品藥品管理局（ Food and Drug Administration， FDA）批準(zhǔn)進(jìn)行的Ⅰ期臨床試驗(yàn)中，研究人員利用噬菌體療法抑制由PA、SA和大腸埃希菌（Escherichia coli，E.coli）造成的慢性下肢靜脈潰瘍。在對(duì)這39例患者持續(xù)24周的治療中，研究人員未發(fā)現(xiàn)任何生物安全問(wèn)題。另外，研究表明口服噬菌體亦具有良好的安全性，患者得到了有效治愈的同時(shí)，腸道正常菌群生長(zhǎng)并未受到影響。

活噬菌體制劑在治療人類(lèi)病原菌感染方面具有巨大發(fā)展前景，但也存在宿主譜過(guò)窄、耐藥性、噬菌體應(yīng)用種類(lèi)少、法律及倫理等問(wèn)題。因此，活噬菌體制劑若要廣泛應(yīng)用于臨床，仍有許多問(wèn)題需要進(jìn)一步探索和解決。

2 內(nèi)溶素抑制細(xì)菌性感染的應(yīng)用

隨著對(duì)噬菌體制劑的研究日益深入以及噬菌體克隆、純化技術(shù)的成熟日益進(jìn)步，噬菌體自身編碼的細(xì)胞壁水解蛋白酶——內(nèi)溶素（Endolysin）作為一種活噬菌體衍生物，其抑菌能力被科學(xué)家廣泛發(fā)掘。內(nèi)溶素本身是噬菌體感染細(xì)菌后在裂解后期產(chǎn)生的一種裂解酶。它具有來(lái)源廣泛、不易產(chǎn)生耐藥性、較高的種屬特異性等明顯優(yōu)勢(shì)。正因?yàn)槿绱?，科學(xué)家將內(nèi)溶素看作抑制細(xì)菌性感染的利器。

2.1 內(nèi)溶素可用于抑制細(xì)菌性感染

自從1959年，F(xiàn)reimer等人首次證實(shí)噬菌體裂解酶具有殺菌能力以來(lái)，對(duì)內(nèi)溶素治療細(xì)菌性感染可行性的研究不斷涌現(xiàn)。目前為止，已有大量體外研究表明，內(nèi)溶素對(duì)多株腸球菌、SA、炭疽桿菌、豬鏈球菌、釀膿鏈球菌等革蘭陽(yáng)性病原菌具有良好的殺菌作用。肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae，SP）是引起兒童急性中耳炎、鼻竇炎、成人和老年人獲得性肺炎 （community-acquired pneumonia，CAP）的重要病原體，而CAP對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)等常用抗生素的耐藥性已演變?yōu)橥{人類(lèi)健康的全球性問(wèn)題， Stoffels等人利用轉(zhuǎn)基因萊茵衣藻分泌的抗SP內(nèi)溶素進(jìn)行裂解實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，僅使用微量?jī)?nèi)溶素便可對(duì)SP進(jìn)行有效殺滅，而利用傳統(tǒng)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的治療過(guò)程中，有85%的SP產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。這表明內(nèi)溶素具有抑制革蘭氏陽(yáng)性菌感染的能力。

內(nèi)溶素除了能夠有效抑制細(xì)菌感染外，也具有良好的生物安全性。Witzenrath利用純化內(nèi)溶素Cpl-1治療患有肺炎球菌肺炎的小鼠。結(jié)果表明，使用內(nèi)溶素治療的小鼠均痊愈，且未產(chǎn)生任何消極反應(yīng)。而Totte等用亦內(nèi)溶素Staphefekt成功治愈了3名慢性或復(fù)發(fā)性SA皮膚病患者，未出現(xiàn)不良反應(yīng)。這些結(jié)果表明內(nèi)溶素具有良好的生物安全性。

2.2 內(nèi)溶素的設(shè)計(jì)改造

人們從內(nèi)溶素存在的兩大問(wèn)題入手，對(duì)其進(jìn)行目的性改造。由于革蘭氏陰性菌具有外膜，因此，當(dāng)單獨(dú)把內(nèi)溶素作為抗菌藥物時(shí)，卻對(duì)有外膜的陰性菌沒(méi)有作用。而內(nèi)溶素的C端結(jié)合域具有較強(qiáng)的疏水性和重復(fù)的跨膜區(qū)，導(dǎo)致內(nèi)溶素的水溶性差。為了克服這些缺點(diǎn)同時(shí)提高內(nèi)溶素的裂解活性和宿主譜，科學(xué)家用分子生物學(xué)的方法對(duì)天然內(nèi)溶素進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，使其成為優(yōu)良的抗菌試劑。

2.2.1 針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌內(nèi)溶素的設(shè)計(jì)改造

研究人員將多種內(nèi)溶素進(jìn)行融合以提高抗菌活性，如Becker等人將LysK-溶葡萄球菌素與SA噬菌體溶菌酶進(jìn)行融合，生成三效融合酶PGH，使對(duì)MRSA的裂解能力提高了42-585倍。Rodriguez Rubio將SA噬菌體內(nèi)溶素與幾種葡萄球菌溶素組成融合蛋白，提高了對(duì)葡萄球菌的裂解能力。Hamed為了改善內(nèi)溶素的裂解能力和水溶性，合成了一種嵌合CHAP-酰胺酶。該酶在保持強(qiáng)裂解能力的同時(shí)具有良好的水溶性;拓寬內(nèi)溶素宿主譜方面，Dong通過(guò)將不同的內(nèi)溶素催化域與結(jié)合域結(jié)合組成嵌合酶，以達(dá)到同時(shí)抑制多種菌生長(zhǎng)的能力。

2.2.2 革蘭氏陰性菌內(nèi)溶素的設(shè)計(jì)改造

由于革蘭氏陰性菌沒(méi)有內(nèi)溶素在裂解細(xì)菌時(shí)借助的穴蛋白，阻擋裂解酶與細(xì)菌細(xì)胞壁進(jìn)行結(jié)合，使內(nèi)溶素?zé)o法對(duì)革蘭陰性菌有效殺滅。因此，如何在體外直接裂解革蘭陰性菌是內(nèi)溶素應(yīng)用的又一重大挑戰(zhàn)。大量研究者為解決這一問(wèn)題進(jìn)行了大量的研究。如Lukacik等人針對(duì)應(yīng)用于革蘭陰性菌的內(nèi)溶素進(jìn)行修飾改造，將細(xì)菌毒素FyuA上能特異識(shí)別鼠疫耶爾森氏菌細(xì)胞膜上離子通道的序列與T4內(nèi)溶素融合，所得到的重組蛋白能借助離子通道通過(guò)鼠疫耶爾森氏菌的細(xì)胞膜，導(dǎo)致耶爾森氏菌的死亡，而且對(duì)E.coli也有明顯的殺滅效果。Larpin等人利用基因工程技術(shù)對(duì)大腸桿菌進(jìn)行改造，使其合成一種由C末端陽(yáng)離子肽和N-末端N-乙酰胞壁質(zhì)酶結(jié)構(gòu)域組成新型內(nèi)溶素PlyE146，同時(shí)表現(xiàn)出了對(duì)PA和鮑曼不動(dòng)桿菌的高效抗菌活性，有望成為抗生素的有效替代品。Briers等將能夠滲透細(xì)菌外膜抗菌肽SMAP.29融合在裂解酶 KZ144的N端，組合成融合蛋白SMAP29KZ144，這些融合蛋白通過(guò)E.coli表達(dá)純化后，能夠在其N(xiāo)端外膜滲透劑的幫助下通過(guò)細(xì)胞膜抵達(dá)細(xì)胞壁上的肽聚糖靶點(diǎn)，切割肽聚糖鏈鍵殺滅革蘭陰性菌PA，而且沿用這種思路設(shè)計(jì)的系列抗菌肽裂解酶對(duì)PA的體內(nèi)殺滅效果已經(jīng)在線蟲(chóng)感染模型中得到了證實(shí)。另外，Zampara等人利用一種工程內(nèi)溶素的新型方法——Innolysins構(gòu)建出12種能夠參與大腸桿菌中的鐵富集運(yùn)輸?shù)氖删w受體FhuA不可逆結(jié)合的內(nèi)溶素，從而達(dá)到抗菌作用。其中，Innolysin#6不僅能夠裂解大腸桿菌，也顯現(xiàn)出了對(duì)其他具有FhuA同源物的革蘭氏陰性菌的抗菌活性。

綜上所述，相比于傳統(tǒng)抗生素，噬菌體內(nèi)溶素作為一種新型的抗菌制劑具有諸多優(yōu)點(diǎn)，因噬菌體為蛋白質(zhì)，易純化，因此在工業(yè)化生產(chǎn)方面亦具有潛在優(yōu)勢(shì)。

3 總結(jié)與展望

隨著對(duì)噬菌體制劑和內(nèi)溶素研究的不斷深入，活噬菌體制劑療法與內(nèi)溶素療法已展現(xiàn)出抗生素所不具有的優(yōu)點(diǎn)，而且有些單一噬菌體與抗生素聯(lián)用具有更強(qiáng)的能力。例如，Dalmasso等發(fā)現(xiàn)，環(huán)丙沙星與APCEc03噬菌體聯(lián)用的殺菌效果優(yōu)于噬菌體雞尾酒或混用抗生素的雞尾酒制劑，環(huán)丙沙星刺激了噬菌體活性，提高了其裂解細(xì)菌的能力。而Gilmer等人的研究也表明，內(nèi)溶素與抗生素能產(chǎn)生協(xié)同作用。因此，研究不同抗生素與新型噬菌體及內(nèi)溶素聯(lián)用可為臨床治療細(xì)菌性感染提供更好的保障。另外，還有研究表明，噬菌體與部分動(dòng)物細(xì)胞在體內(nèi)以共生態(tài)的形式存在，即噬菌體為宿主提供粘膜區(qū)域的抗菌保護(hù)，宿主為噬菌體提供穩(wěn)定寄主來(lái)源。這也由此產(chǎn)生了假說(shuō)，即包括人類(lèi)在內(nèi)部分動(dòng)物的體細(xì)胞將噬菌體作為一種抗菌手段。若有更多研究證實(shí)此觀點(diǎn)，則可以說(shuō)明沒(méi)有任何一種治療細(xì)菌性感染的手段比利用活噬菌體及其衍生物治療更加行之有效，這也顯示出活噬菌體及其衍生物療法具有廣闊前景。

然而，目前噬菌體療法并未得到廣泛利用。其中一個(gè)問(wèn)題便是噬菌體及其衍生物的安全性。雖然噬菌體在人體內(nèi)作為無(wú)處不在的共生體這一事實(shí)可間接顯示噬菌體療法的安全性，但是尚需要進(jìn)一步的臨床研究來(lái)進(jìn)一步證明。除此以外，還有一個(gè)備受關(guān)注的問(wèn)題，即細(xì)菌對(duì)噬菌體的耐藥性。在細(xì)菌與噬菌體共同進(jìn)化的過(guò)程中，細(xì)菌演化出了一系列對(duì)抗噬菌體感染的機(jī)制，如改變表面噬菌體吸附受體，利用多糖遮掩受體，利用限制性?xún)?nèi)切酶修飾噬菌體DNA等。而噬菌體也可利用反防御機(jī)制抵抗噬菌體的耐藥性。這種共同進(jìn)化受到環(huán)境，變異等多方面的影響，直接影響噬菌體的抗菌效果。

因此，未來(lái)的研究方向應(yīng)放在證明噬菌體的安全性上，并關(guān)注噬菌體療法在復(fù)雜環(huán)境中的進(jìn)化結(jié)果，提供有關(guān)如何限制細(xì)菌對(duì)噬菌體抗性進(jìn)化的依據(jù)。相信未來(lái)會(huì)有更多關(guān)于噬菌體治療的研究涌現(xiàn)，解決目前存在的問(wèn)題。相信活噬菌體及其衍生療法在諸多科研人員的研究推動(dòng)下，終將會(huì)成為抑制病原性菌株感染的有力手段。

參考文獻(xiàn)

[1] 李晶，葛鵬，趙曉強(qiáng)，等.降鈣素原與C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)細(xì)菌性感染的應(yīng)用研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2016，26（1）：40-42.

[2]肖華鳳.抗生素的藥物不良反應(yīng)[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2008，（17）：80-81.

[3]Luo Tingting，Wang Rui，Gu Chuanjia，He Ping，Hua Yunfen： Phage therapy and its limiting factors[J].Journal of Microbes and Infections，2017，12（2）：120-125.

[4]Rybniker J;Plum G;Robinson N;Small PL;Hartmann P.I-dentification of three cytotoxic early proteins of mycobacteri-ophage L5 leading to growth inhibition in Mycobacteriumsmegmatis[J].Microbiology，2008，（154）：2304-2314.

[5]Rolf Lood，Benjamin Y.Winer，Adam J.Pelzek，Roberto Diez-Martinez，Mya Thandar，Chad W.Euler，Raymond Schuch and Vincent A.Fischetti：Novel phage lysins capable of killing the multidrug resistant Gram-negative bacterium Acinetobacter baumannii in a mouse sepsis model[J].Antimicrobial agents and Chemotherapy，2015，（59）：1983-1991.

[6]Gal Ofir e tal.DISARM is a widespread bacterial defence system with broad anti-phage activities[J].Nature Microbiology，2018：90-98.

[7]kishor C，Mishra RR，Saraf sk，Kumar M，Srivastav AK，Nath G：Phage therapy of staphylococcal chronic osteomyelitis in experimental animal model[J].indian J Med Res，2016，143（1）：87-94.

[8]4.Lazzarini L，de Lalla F，Mader JT.Long bone osteomyelitis[J].Curr Infect Dis Rep，2002，（4）：439-45.

[9]Lazzarini L，Lipsky BA，Mader JT.Antibiotic treatment of osteomyelitis： what have we learned from 30 years of clinical trials[J].Int J Infect Dis，2005，（9）：127-38.

[10]Song CT;Hwee J;Song C;Tan BK;Chong SJ.Burns infection profile of Singapore：prevalence of multidrug-resistant Acinetobacter baumannii and the role of blood cultures[J].Burns Trauma，2016，（4）.

[11]Daniel Pletzer，Sarah C.Mansour，Kelli Wuerth，Negin Rahanjam，Robert E.W.Hancock： New Mouse Model for Chronic Infections by Gram-Negative Bacteria Enabling the Study of Anti-Infective Efficacy and Host-Microbe Interactions[J].Antimicrobial agents and Chemotherapy，2017，8（1）：1-16.

[12]Rana Rahmani，Gholamreza Zarrini，F(xiàn)arzam Sheikhzadeh，and Naser Aghamohammadzadeh：Effective Phages as Green Antimicrobial Agents Against Antibiotic-Resistant Hospital Escherichia coli[J].Jundishapur J Microbiol，2015，8（2）.

[13]黃光濤：噬菌體在燒傷泛耐藥細(xì)菌感染治療中的應(yīng)用研究[D].重慶：第三軍醫(yī)大學(xué)，2017：1-130.

[14]Wright A，Hawkins C H，Anggard E E，et al.A controlled clinical trial of a therapeutic bacteriophage preparation in chronic otitis due to antibiotic-resistant Pseudomonas aeruginosa; A preliminary report of efficacy[J].Clin Otolaryngol，2009，34（4）：349-357.

[15]Rhoads DD，Wolcott RD，Kuskowski MA，Wolcott BM，Ward LS，Sulakvelidze A.Bacteriophage therapy of venous leg ulcers in humans： results of a phase I safet y trial [J].J Wound Care，2009，18（6）：237-243.

[16]Sarker S A，Berger B，Deng Y，et al.Oral application of Escherichia coli bacteriophage： safety tests in healthy and diarrheal children from Bangladesh[J].Microbiome，2017，19（1）： 237-250.

[17]劉偉，王學(xué)琴，董世雷，朱立穎，王欣： 噬菌體及其內(nèi)溶素的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，22（5）：702-708

[18]Freimer EH，Krause RM，McCart y M.Studies of L forms and protoplasts of group A streptococci.I.Isolation，growth，and bacteriologic characteristics [J].J Exp Med，1959，110（6）：853-874.

[19]Swift S M，Rowley D T，Young C，et al.The endolysin from the Enterococcus faecalis bacteriophage VD13 and conditions stimulating its lytic activity[J].FEMS Microbiol Lett，2016，363（19）：216.

[20]Gutierrez D，F(xiàn)ernandez L，Rodriguez A，et al.Are phage lytic proteins the secret weapon to kill Staphylococcus aureus[J].mBio，2018，9（1）：01923-17.

[21]Schuch R，Nelson D，F(xiàn)ischetti V A.A bacteriolytic agent that detects and kills Bacillus anthracis[J].Nature，2002，418（6900）：884-889.

[22]Gilmer D B，Schmitz J E，Thandar M，et al.The phage lysin PlySs2 decolonizes Streptococcus suis from murine intranasal mucosa[J].PloS One，2017，12（1）：0169180.

[23]Shen Y，Barros M，Vennemann T，et al.A bacteriophage endolysin that eliminates intracellular streptococci[J].Elife，2016，（5）：13152.

[24]劉民，馬秋月：肺炎鏈球菌相關(guān)疾病流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2018，34（11）：1449-1452.

[25]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)，中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì).兒童肺炎鏈球菌性疾 病防治技術(shù)指南（2009年版）[J].中華兒科雜志，2010，48（2）：104-111.

[26]Stoffels L，Taunt H N，Charalambous B，et al.Synthesis of bacteriophage lytic proteins against Streptococcus pneumoniae in the chloroplast of Chlamydomonas reinhardtii[J].Plant Biotechnol J，2017，15（9）：1130-1140.

[27]J Sutcliffe，A Tait-Kamradt，L Wondrack： Streptococcus pneumoniae and Streptococcus pyogenes resistant to macrolides but sensitive to clindamycin： a common resistance pattern mediated by an efflux system[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1996，40（8）：1817-1824.

[28]Witzenrath，Martin MD; Schmeck，Bernd MD; Doehn，Jan M.MD; Tschernig，Thomas MD; Zahlten，Janine DVM; Loeffler，Jutta M.MD; Zemlin，Maren DVM; Müller，Holger MD; Gutbier，Birgitt DVM; Schütte，Hartwig MD; Hippenstiel，Stefan MD; Fischetti，Vincent A.PhD; Suttorp，Norbert MD; Rosseau，Simone MD：Systemic use of the endolysin Cpl-1 rescues mice with fatal pneumococcal pneumonia[J].Critical Care Medicine，2009，37（2）：642-649.

[29]Totte J，van Doorn M B，Pasmans S G M A.Successful treatment of chronic Staphylococcus aureus-related dermatoses with the topical endolysin Staphefekt SA.100： A report of 3 cases[J].Case Rep Dermatol，2017，9（2）：19-25.

[30]Becker S C，Roach D R，Chauhan V S，et al.Triple-acting lytic enzyme treatment of drug-resistant and intracellular Staphylococcus aureus[J].Sci Rep，2016，（6）：25063.

[31]Rodriguez Rubio L，Mainez B，Rodriguez A，Enhanced staphylolytic Activity of the Staphylococcus au eus bacteriophage vB _SauSphi_lPLA88 HydH5 virion-associaed peptidoglycan hydrolase：fusions，deletions，and synergy with LysH5[J].Applied and Environmental Microbiolog y，2012，78（7）：22412248.

[32]Hamed Haddad Kashani，Hossein Fahimi，Yasaman Dasteh Goli and Rezvan Moniri，A Novel Chimeric Endolysin with Antibacterial Activity against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus[J].Front.Cell.Infect.Microbiol Biotechnology，2017，7（290）：1-12.

[33] Dong Q，Wang J，Yang H，eta 1.Construction of a chimeric lysin Ply187N-V12C with extended lyric activity against staphy— lococciand streptococci[J].Microbial Biotechnology，2015，8（2SI）：210220.

[34]Petra Lukacik，Travis J.Barnard，Paul W.Keller，Kaveri S.Chaturvedi，Nadir Seddiki，James W.Fairman，Nicholas Noinaj，Tara L.Kirby，Jeffrey P.Henderson，Alasdair C.Steven，B.Joseph Hinnebusch，and Susan K.Buchanan： Structural engineering of a phage lysin that targets Gram-negative pathogens[J].PNAS June 19，2012，109（25）：9857-9862.

[35]Yu Larpin，F(xiàn)rank Oechslin，Philippe Moreillon，Grégory Resch，José Manuel Entenza ，Stefano Mancini： In vitro characterization of PlyE146，a novel phage lysin that targets Gram-negative bacteria[J].PloS One，2018，13（2）：0192507.

[36]Yves Briers，Maarten Walmagh，Victor Van Puyenbroeck，Anneleen Cornelissen，William Cenens，Abram Aertsen，Hugo Oliveira，Joana Azeredo，Gunther Verween，Jean-Paul Pirnay，Stefan Miller，Guido Volckaert，Rob Lavigne： Engineered Endolysin-Based “Artilysins” To Combat Multidrug-Resistant Gram-Negative Pathogens[J].MBIO，2014，5（4），01379-14.

[37]Athina Zampara，Martine C.H.Srensen，Dennis Grimon，F(xiàn)abio Antenucci，View ORCID ProfileYves Briers，View ORCID ProfileLone Brndsted; Innolysins： A novel approach to engineer endolysins to kill Gram-negative bacteria[J].Biorxiv，2018，9（6）.

[38]Dalmasso M，Strain R，Neve H，F(xiàn)ranz CM，Cousin FJ，Ross RP，Hill C.Three new Escherichia coli phages from The human gut show promising potential for phage therapy [J].PLoS One，2016，11（6）：0156773.

[39]Gilmer D B，Schmitz J E，Thandar M，et al.The phage lysin PlySs2 decolonizes Streptococcus suis from murine intranasal mucosa[J].PloS One，2017，12（1）：0169180.

[40]Barr J J，Auro R，F(xiàn)urlan M，et al.Bacteriophage adhering to mucus provide a non-host-derived immunity[J].Proc Natl Acad Sci USA，2013，110（26）：10771-10776.

[41]Sharma S，Chatter j ee S，Datta S，Prasad R，Dubey D，Prasad RK，Vairale MG.Bacteriophages and its applications： an overview [J].Folia Microbiol，2017，62（1）：17-55.