興義市不同居群美花石斛的多糖含量比較研究

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴陽(yáng) 550025)

美花石斛(D.loddigesiiRolfe)，屬蘭科石斛屬植物，藥材名稱為環(huán)草石斛，以莖用，為貴州地道藥材。早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，是被《中華人民共和國(guó)藥典》(2000版)收載的石斛屬原植物之一[1-2]。具有滋陰清熱、生津益胃、潤(rùn)肺止咳、延年益壽等功效，用于熱病傷津、食少干嘔、病后虛弱、陰傷目暗、食欲不振、遺精、腰膝酸軟無(wú)力等癥[3]。貴州興義是我國(guó)著名的石斛主產(chǎn)地之一，其境內(nèi)豐富的石斛資源備受關(guān)注。其中美花石斛是分布最多、民間使用最廣、加工小黃草質(zhì)量最好的石斛品種，其開發(fā)利用前景良好[3]。

石斛多糖是評(píng)價(jià)石斛特別是用于開發(fā)保健類食品的藥食同源石斛品種品質(zhì)評(píng)價(jià)的重要參考指標(biāo)，盡管貴州省興義野生美花石斛居群眾多，但對(duì)其不同居群的品質(zhì)評(píng)價(jià)的研究未見報(bào)道。深入調(diào)查貴州省興義市不同野生美花石斛的分布特點(diǎn)，對(duì)其品質(zhì)展開客觀評(píng)價(jià)，對(duì)于美花石斛道地資源的開發(fā)和利用，篩選培育優(yōu)質(zhì)新品種，加快貴州省興義市美花石斛產(chǎn)業(yè)規(guī)模化發(fā)展，促進(jìn)貴州省區(qū)域經(jīng)濟(jì)發(fā)展有著重要的意義?；诖耍狙芯繉?duì)興義市10個(gè)不同野生居群的美花石斛多糖含量進(jìn)行了測(cè)定，以期為不同居群美花石斛的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

課題組于2013—2015年，野外實(shí)地調(diào)查了興義市境內(nèi)10個(gè)居群，分別是三江口、泥凼、巴結(jié)、萬(wàn)峰林、則戎、雄武、坡崗、豐都、岔江、清水河，各居群具體信息見表1，經(jīng)花期鑒定為美花石斛(DendrobiumloddigesiiRolfe)。

表1 興義市美花石斛天然居群來(lái)源

序號(hào)居群名稱居群大小海拔/m緯度經(jīng)度M1興義萬(wàn)峰林12118725°0′26″N104°55′23″EM2興義巴結(jié)1579324°51′54″N105°01′33″EM3興義豐都9115325°03′14″N104°56′48″EM4興義三江口1177624°46′24″N104°36′14″EM5興義清水河7132225°14′38″N104°50′06″EM6興義岔江5134125°03′43″N104°40′25″EM7興義坡崗6126525°05′21″N105°04′47″EM8興義雄武22142924°56′33″N104°41′02″EM9興義則戎3112224°58′59″N104°56′28″EM10興義泥凼6117624°49′32″N104°51′34″E

1.2 主要儀器與試劑

UV-5900型紫外可見分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(重慶四達(dá)儀器公司)，電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器公司)，數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司)，HS-10260 D超聲波清洗器。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)自成都瑞芬思生物科技有限公司，批號(hào)：S-023-1503)，濃硫酸、苯酚、無(wú)水乙醇均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.3 方 法

美花石斛對(duì)照品的制備、供試品的制備、苯酚硫酸法測(cè)定石斛多糖含量，參照文獻(xiàn)白音等[4]、李亞芳等[5]、王建等[6]的方法，并作適當(dāng)改進(jìn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖的濃度與吸光度的線性關(guān)系考察

以吸光度值為縱坐標(biāo)(y)，對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)(x)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=15.86x+0.002，(r=0.999 5)。表明葡萄糖濃度在12.0～42.0μg·mL-1范圍內(nèi)與其吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

精取葡萄糖對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，RSD為0.9%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一樣品顯色后分別在0，10，20，30，60，120 min測(cè)定其吸光度，同一樣品顯色后120 min內(nèi)測(cè)定吸收度的RSD為0.7%(n=6)，表明供試品在120 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取同一美花石斛藥材粉末6份，每份0.1 g，測(cè)定多糖含量，結(jié)果6份同一樣品粉末的多糖含量RSD為1.4%(n=6)，該方法的重現(xiàn)性較好。

2.5 加樣回收率測(cè)定實(shí)驗(yàn)

取美花石斛藥材粉末6份，每份0.05 g，加入定量的石斛總多糖，制備溶液并顯色，測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié)果見表2，多糖含量測(cè)定的平均回收率為99.50%，RSD為1.4%(n=6)，表明該方法準(zhǔn)確度高。

表2 回收率結(jié)果

編號(hào)稱樣量/g含量/mg加入量/mg測(cè)得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%10.05029.869.6419.3498.3420.05009.829.6419.2297.5130.05029.869.6419.53100.3199.501.440.05019.849.6419.4099.1750.05009.829.6419.53100.7360.05029.869.6419.59100.93

2.6 樣品測(cè)定

對(duì)收集到的10批不同居群的美花石斛藥材進(jìn)行多糖含量測(cè)定，結(jié)果見表3，其中M 4(三江口居群)具有最高的石斛多糖含量，而M 3(豐都居群)的石斛多糖含量最低，不同居群的石斛多糖含量差異顯著。

表3 多糖含量測(cè)定結(jié)果

樣品編號(hào)平均含量/%RSD/%M429.30a1.2M124.48b1.4M223.30c0.7M923.04c1.9M821.62d0.7M520.82e1.1M716.23f0.8M1015.81fg1.4M615.38g0.5M314.29h1.8

注：表中小寫字母表示0.05水平顯著差異(n=3)。

3 討 論

多糖是藥用植物主要活性成分之一，是石斛質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要參考指標(biāo)。目前對(duì)石斛的質(zhì)量評(píng)價(jià)主要集中在不同產(chǎn)地上[7-9]，而對(duì)于興義境內(nèi)豐富的美花石斛居群的質(zhì)量評(píng)價(jià)卻未見報(bào)道。本次測(cè)定結(jié)果顯示，興義不同居群美花石斛的多糖含量差距較大，多糖含量最高的是興義三江口居群，達(dá)29.30%，最低的是興義豐都居群，為14.29%，多糖含量差距達(dá)到15.01%。李滿飛等[10]利用比色法測(cè)定了25種石斛的多糖含量，來(lái)自羅甸的美花石斛多糖含量達(dá)30.48%；黃民權(quán)等[11]利用硫酸蒽酮法測(cè)定了3種石斛的多糖含量，其中美花石斛的多糖含量為12.9%。白音等[4]對(duì)來(lái)自三省五產(chǎn)地的野生美花石斛的多糖含量測(cè)定結(jié)果表明，貴州興義的美花石斛多糖含量最高，達(dá)22.62%。本次對(duì)興義市不同居群美花石斛的測(cè)定結(jié)果為14.29%～29.30%，與前人的研究結(jié)果有一定的一致性。表明苯酚硫酸法較為準(zhǔn)確可靠，且操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，可用于美花石斛的多糖含量的測(cè)定。

一般認(rèn)為，石斛多糖含量的高低和石斛種質(zhì)資源本身的遺傳特性、生長(zhǎng)的地理環(huán)境、采收季節(jié)、生長(zhǎng)年限及多糖的提取工藝有較大的關(guān)聯(lián)[9]。在本次實(shí)驗(yàn)中,采樣時(shí)間集中在每年的10—12月，石斛的莖段取自兩年生[12]，提取檢測(cè)方法一致，最大限度地消除了條件不一致對(duì)石斛多糖含量檢測(cè)高低的影響。含量最高的三江口居群生長(zhǎng)于懸崖石壁間，大河之上，石面濕潤(rùn)，附生有苔蘚，陽(yáng)光照射為半陰半陽(yáng)。而含量較低的豐都居群生長(zhǎng)于楓香樹上中段，樹皮附生有苔蘚。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)采集的三江口居群的石斛莖干是紅色，而其它

居群多為綠色，這是否表明石斛多糖含量的高低與其莖干中花青素的含量有密切關(guān)系，這些都有待于進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

綜上所述，美花石斛在不同地區(qū)的不同生活環(huán)境中，多糖含量存在明顯差異，其中興義三江口區(qū)域和萬(wàn)峰林區(qū)域是美花石斛最適宜生長(zhǎng)區(qū)域，該區(qū)域的美花石斛具有較好的品質(zhì)，建議其為規(guī)?；N植的首選種源。