Masson染色在輔助診斷肝纖維化中應(yīng)用

侯舒倩　肖瑤

【摘要】 目的 探討Masson染色在肝纖維化診斷中的輔助作用。方法 89例慢性肝炎、肝硬化患者的石蠟包埋肝組織標(biāo)本， 連續(xù)切片并行HE染色及Masson染色， 染色完成后行單盲閱片， 根據(jù)染色結(jié)果分別對HE染色及Masson 染色的標(biāo)本進(jìn)行G-S分級分期， 并作出初步診斷。統(tǒng)計HE染色和Masson 染色的染色結(jié)果;比較HE染色和Masson染色對慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況;比較HE染色和Masson 染色對慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度。結(jié)果 標(biāo)本染色完成后， HE染色標(biāo)本胞漿均被染成紅色， 胞核均被染成紫色， 膠原纖維與肝細(xì)胞團(tuán)分界不清楚;Masson染色標(biāo)本膠原纖維被染成藍(lán)色， 包繞紅色的肝細(xì)胞團(tuán)， 顏色對比明顯， 分界清楚。HE染色和Masson染色對慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。HE染色結(jié)果與臨床診斷相符78例， 不吻合11例;Masson 染色結(jié)果與臨床診斷相符86例， 其中3例臨床診斷為慢性肝炎-重度， 經(jīng)Masson染色確診為早期肝硬化;Masson染色對慢性肝炎、肝硬化的吻合程度高于HE染色， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 Masson 染色能更清楚地顯示肝纖維化病變中的膠原纖維， 提高早期肝硬化的檢出率， 具有重要的臨床應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】 慢性肝炎、肝硬化;肝纖維化;HE染色;Masson染色;G-S分級分期

肝纖維化作為一個病理過程， 常見于病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝等多種慢性疾病， 其本質(zhì)是肝臟持續(xù)性損傷， 導(dǎo)致以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)合成增多、肝星狀細(xì)胞被激活轉(zhuǎn)化為肌成纖維樣細(xì)胞和成纖維細(xì)胞[1]。肝纖維化是慢性肝病的重要病理特征， 如持續(xù)發(fā)展， 則會導(dǎo)致肝硬化的發(fā)生。傳統(tǒng)的HE染色使組織細(xì)胞的胞核均染成紫色， 胞漿均染成紅色， 沒有特異性， 不能明顯區(qū)分病變組織和正常組織， 特別是對病變早期的輕度纖維化組織分辨更為困難， 而Masson染色法是顯示膠原纖維的重要染色方法之一， 使膠原纖維呈綠色或藍(lán)色， 肌纖維呈紅色， 紅細(xì)胞呈橘紅色。本研究就Masson染色在輔助診斷肝纖維化中的臨床價值進(jìn)行探究， 取得了滿意的結(jié)果， 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料來源 收集2017年8～12月本院89例慢性肝炎、肝硬化患者的石蠟包埋肝組織標(biāo)本作為研究對象， 連續(xù)切片并行HE染色及Masson 染色， 所有患者的病情確診均符合《中國慢性乙肝防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1. 2 試劑 Masson染色試劑盒由北京索萊寶科技有限公司提供， 主要包括：試劑A1：蘇木素染色液;試劑A2：三氯化鐵水溶液;試劑B：鹽酸乙醇分化液;試劑C：氨水水溶液;試劑D：麗春紅酸性品紅染色液;試劑E：乙酸水溶液;試劑F：磷鉬酸水溶液;試劑G：苯胺藍(lán)染色液。使用前取A1和A2等量混合， 即為試劑A。

1. 3 Masson染色法 ①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水;②用試劑A染色10 min， 蒸餾水沖洗;③用試劑B分化1 min， 水洗;④用試劑C反藍(lán)1 min， 水洗1 min;⑤試劑D染色10 min， 用試劑E洗1 min;⑥用試劑F洗1 min， 再用試劑E洗1 min;⑦放入試劑G中染色2 min， 試劑E洗1 min;⑧95%酒精、無水乙醇脫水， 二甲苯透明， 中性樹膠封片。所有標(biāo)本同時做HE染色對照。

1. 4 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計HE染色和Masson 染色的染色結(jié)果。比較HE染色和Masson染色對慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況;比較HE染色和Masson染色對慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度。采用單盲閱片方式分別對HE染色和Masson染色切片進(jìn)行G-S分級分期， 其中慢性肝炎根據(jù)炎性活動度（G）可分為G0～4級， 根據(jù)纖維化程度（S）可分為S0～4級[2]。根據(jù)G-S分級分期結(jié)果將病理診斷劃分為正常（G0， S0）、慢性肝炎-輕度（G1～2， S0～2）、慢性肝炎-中度（G3， S1～3）、慢性肝炎-重度（G4， S2）、早期肝硬化（G3， S4）和肝硬化[3]。

1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 染色結(jié)果 標(biāo)本染色完成后， HE染色標(biāo)本胞漿均被染成紅色， 胞核均被染成紫色， 膠原纖維與肝細(xì)胞團(tuán)分界不清楚;Masson染色標(biāo)本膠原纖維被染成藍(lán)色， 包繞紅色的肝細(xì)胞團(tuán)， 顏色對比明顯， 分界清楚。

2. 2 HE染色和Masson染色對慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較 HE染色和Masson染色對慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 3 HE染色和Masson染色對慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度比較 HE染色結(jié)果與臨床診斷相符78例， 不吻合11例;Masson染色結(jié)果與臨床診斷相符86例， 其中3例臨床診斷為慢性肝炎-重度， 經(jīng)Masson染色確診為早期肝硬化;Masson染色對慢性肝炎、肝硬化的吻合程度高于HE染色， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

肝纖維化的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜， 是由肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、枯否細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞因子等多方面因素的共同作用引起。其中， 肝星形細(xì)胞的激活和轉(zhuǎn)化是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)[4]， 其結(jié)果是使細(xì)胞外基質(zhì)合成增多， 降解減少， 沉積于肝內(nèi)而引起纖維化。肝纖維化的主要病理特征為肝組織正常結(jié)構(gòu)遭到破壞， 肝細(xì)胞減少， 血管結(jié)構(gòu)紊亂， 至肝硬化階段可有假小葉的形成， 假小葉是指由廣泛增生的纖維組織分割原來的肝小葉并包繞成大小不等的圓形或類圓形的肝細(xì)胞團(tuán)， 假小葉內(nèi)肝細(xì)胞排列紊亂， 可有變性、壞死及再生， 中央靜脈竇缺如， 偏位或兩個以上[5]。

傳統(tǒng)的HE染色使各種組織的胞漿都染成紅色， 胞核都染成紫色， 缺乏特異性， 不利于區(qū)分病變組織和正常組織結(jié)構(gòu)， 纖維化中晚期因病變較明顯尚可確切診斷， 但對早期纖維化的診斷還是有一定的困難。Masson染色法是指用兩種或三種陰離子染料混合， 顯示組織中纖維及炎性因子的染色方法， 其原理是利用不同組織對染料分子的滲透性不同及染料分子本身的大小來實現(xiàn)， 小分子能進(jìn)入結(jié)構(gòu)比較致密， 滲透性比較低的組織， 而苯胺藍(lán)等大分子只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)較疏松， 滲透性高的組織， 從而使肌纖維呈紅色， 膠原纖維呈藍(lán) 色[6， 7]。鏡下可清晰看到圍繞在紅色肝細(xì)胞團(tuán)外的藍(lán)色膠原纖維， 而且， 纖維增生程度不同， 染色深淺也不同， 鮮明的顏色對比更有助于肝纖維化的診斷和分期。本研究也表明經(jīng)Masson染色后做出的病理G-S分級分期與患者的臨床分度基本一致， 且較HE染色更能顯示早期纖維化病變， 有助于輕度慢性肝炎和早期肝硬化的診斷， 提高早期隱匿性肝硬化的檢出率， 為臨床早期診斷及治療提供了重要依據(jù)[8-12]。

綜上所述， Masson染色能夠更清楚地顯示肝纖維化中的膠原纖維， 提高早期纖維化病變的檢出率， 為臨床作出精確診斷及G-S分級分期提供可靠的依據(jù)， 具有非常重要的臨床應(yīng)用價值。

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[收稿日期：2018-11-15]