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    Masson染色在輔助診斷肝纖維化中應(yīng)用

    2019-07-01 14:00:28侯舒倩肖瑤
    中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥 2019年13期

    侯舒倩 肖瑤

    【摘要】 目的 探討Masson染色在肝纖維化診斷中的輔助作用。方法 89例慢性肝炎、肝硬化患者的石蠟包埋肝組織標(biāo)本, 連續(xù)切片并行HE染色及Masson染色, 染色完成后行單盲閱片, 根據(jù)染色結(jié)果分別對(duì)HE染色及Masson 染色的標(biāo)本進(jìn)行G-S分級(jí)分期, 并作出初步診斷。統(tǒng)計(jì)HE染色和Masson 染色的染色結(jié)果;比較HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況;比較HE染色和Masson 染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度。結(jié)果 標(biāo)本染色完成后, HE染色標(biāo)本胞漿均被染成紅色, 胞核均被染成紫色, 膠原纖維與肝細(xì)胞團(tuán)分界不清楚;Masson染色標(biāo)本膠原纖維被染成藍(lán)色, 包繞紅色的肝細(xì)胞團(tuán), 顏色對(duì)比明顯, 分界清楚。HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HE染色結(jié)果與臨床診斷相符78例, 不吻合11例;Masson 染色結(jié)果與臨床診斷相符86例, 其中3例臨床診斷為慢性肝炎-重度, 經(jīng)Masson染色確診為早期肝硬化;Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化的吻合程度高于HE染色, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 Masson 染色能更清楚地顯示肝纖維化病變中的膠原纖維, 提高早期肝硬化的檢出率, 具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

    【關(guān)鍵詞】 慢性肝炎、肝硬化;肝纖維化;HE染色;Masson染色;G-S分級(jí)分期

    肝纖維化作為一個(gè)病理過程, 常見于病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝等多種慢性疾病, 其本質(zhì)是肝臟持續(xù)性損傷, 導(dǎo)致以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)合成增多、肝星狀細(xì)胞被激活轉(zhuǎn)化為肌成纖維樣細(xì)胞和成纖維細(xì)胞[1]。肝纖維化是慢性肝病的重要病理特征, 如持續(xù)發(fā)展, 則會(huì)導(dǎo)致肝硬化的發(fā)生。傳統(tǒng)的HE染色使組織細(xì)胞的胞核均染成紫色, 胞漿均染成紅色, 沒有特異性, 不能明顯區(qū)分病變組織和正常組織, 特別是對(duì)病變?cè)缙诘妮p度纖維化組織分辨更為困難, 而Masson染色法是顯示膠原纖維的重要染色方法之一, 使膠原纖維呈綠色或藍(lán)色, 肌纖維呈紅色, 紅細(xì)胞呈橘紅色。本研究就Masson染色在輔助診斷肝纖維化中的臨床價(jià)值進(jìn)行探究, 取得了滿意的結(jié)果, 現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1. 1 材料來(lái)源 收集2017年8~12月本院89例慢性肝炎、肝硬化患者的石蠟包埋肝組織標(biāo)本作為研究對(duì)象, 連續(xù)切片并行HE染色及Masson 染色, 所有患者的病情確診均符合《中國(guó)慢性乙肝防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

    1. 2 試劑 Masson染色試劑盒由北京索萊寶科技有限公司提供, 主要包括:試劑A1:蘇木素染色液;試劑A2:三氯化鐵水溶液;試劑B:鹽酸乙醇分化液;試劑C:氨水水溶液;試劑D:麗春紅酸性品紅染色液;試劑E:乙酸水溶液;試劑F:磷鉬酸水溶液;試劑G:苯胺藍(lán)染色液。使用前取A1和A2等量混合, 即為試劑A。

    1. 3 Masson染色法 ①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水;②用試劑A染色10 min, 蒸餾水沖洗;③用試劑B分化1 min, 水洗;④用試劑C反藍(lán)1 min, 水洗1 min;⑤試劑D染色10 min, 用試劑E洗1 min;⑥用試劑F洗1 min, 再用試劑E洗1 min;⑦放入試劑G中染色2 min, 試劑E洗1 min;⑧95%酒精、無(wú)水乙醇脫水, 二甲苯透明, 中性樹膠封片。所有標(biāo)本同時(shí)做HE染色對(duì)照。

    1. 4 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)HE染色和Masson 染色的染色結(jié)果。比較HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況;比較HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度。采用單盲閱片方式分別對(duì)HE染色和Masson染色切片進(jìn)行G-S分級(jí)分期, 其中慢性肝炎根據(jù)炎性活動(dòng)度(G)可分為G0~4級(jí), 根據(jù)纖維化程度(S)可分為S0~4級(jí)[2]。根據(jù)G-S分級(jí)分期結(jié)果將病理診斷劃分為正常(G0, S0)、慢性肝炎-輕度(G1~2, S0~2)、慢性肝炎-中度(G3, S1~3)、慢性肝炎-重度(G4, S2)、早期肝硬化(G3, S4)和肝硬化[3]。

    1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2. 1 染色結(jié)果 標(biāo)本染色完成后, HE染色標(biāo)本胞漿均被染成紅色, 胞核均被染成紫色, 膠原纖維與肝細(xì)胞團(tuán)分界不清楚;Masson染色標(biāo)本膠原纖維被染成藍(lán)色, 包繞紅色的肝細(xì)胞團(tuán), 顏色對(duì)比明顯, 分界清楚。

    2. 2 HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較 HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2. 3 HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度比較 HE染色結(jié)果與臨床診斷相符78例, 不吻合11例;Masson染色結(jié)果與臨床診斷相符86例, 其中3例臨床診斷為慢性肝炎-重度, 經(jīng)Masson染色確診為早期肝硬化;Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化的吻合程度高于HE染色, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    3 討論

    肝纖維化的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜, 是由肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、枯否細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞因子等多方面因素的共同作用引起。其中, 肝星形細(xì)胞的激活和轉(zhuǎn)化是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)[4], 其結(jié)果是使細(xì)胞外基質(zhì)合成增多, 降解減少, 沉積于肝內(nèi)而引起纖維化。肝纖維化的主要病理特征為肝組織正常結(jié)構(gòu)遭到破壞, 肝細(xì)胞減少, 血管結(jié)構(gòu)紊亂, 至肝硬化階段可有假小葉的形成, 假小葉是指由廣泛增生的纖維組織分割原來(lái)的肝小葉并包繞成大小不等的圓形或類圓形的肝細(xì)胞團(tuán), 假小葉內(nèi)肝細(xì)胞排列紊亂, 可有變性、壞死及再生, 中央靜脈竇缺如, 偏位或兩個(gè)以上[5]。

    傳統(tǒng)的HE染色使各種組織的胞漿都染成紅色, 胞核都染成紫色, 缺乏特異性, 不利于區(qū)分病變組織和正常組織結(jié)構(gòu), 纖維化中晚期因病變較明顯尚可確切診斷, 但對(duì)早期纖維化的診斷還是有一定的困難。Masson染色法是指用兩種或三種陰離子染料混合, 顯示組織中纖維及炎性因子的染色方法, 其原理是利用不同組織對(duì)染料分子的滲透性不同及染料分子本身的大小來(lái)實(shí)現(xiàn), 小分子能進(jìn)入結(jié)構(gòu)比較致密, 滲透性比較低的組織, 而苯胺藍(lán)等大分子只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)較疏松, 滲透性高的組織, 從而使肌纖維呈紅色, 膠原纖維呈藍(lán) 色[6, 7]。鏡下可清晰看到圍繞在紅色肝細(xì)胞團(tuán)外的藍(lán)色膠原纖維, 而且, 纖維增生程度不同, 染色深淺也不同, 鮮明的顏色對(duì)比更有助于肝纖維化的診斷和分期。本研究也表明經(jīng)Masson染色后做出的病理G-S分級(jí)分期與患者的臨床分度基本一致, 且較HE染色更能顯示早期纖維化病變, 有助于輕度慢性肝炎和早期肝硬化的診斷, 提高早期隱匿性肝硬化的檢出率, 為臨床早期診斷及治療提供了重要依據(jù)[8-12]。

    綜上所述, Masson染色能夠更清楚地顯示肝纖維化中的膠原纖維, 提高早期纖維化病變的檢出率, 為臨床作出精確診斷及G-S分級(jí)分期提供可靠的依據(jù), 具有非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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    [收稿日期:2018-11-15]

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