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    異氟烷和異丙酚對前列腺癌細胞HIF-1α通路的調控

    2019-07-01 02:50:06林詩發(fā)
    中國老年學雜志 2019年12期
    關鍵詞:麻醉劑異丙酚氟烷

    林詩發(fā)

    (??谑械谌嗣襻t(yī)院麻醉科,海南 ???570000)

    惡性腫瘤是一種嚴重威脅人類健康的疾病,死亡率僅次于心腦血管疾病〔1〕。目前手術仍然是大多數實體瘤的主要治療手段,但治療效果不佳,復發(fā)率高。臨床實踐表明:與單獨使用全身麻醉劑相比,配伍局部麻醉劑可改善各種癌癥患者術后情況〔2〕。一個涉及225例前列腺切除術的研究表明:與單純全身麻醉劑相比,配伍硬膜外麻醉劑復發(fā)率降低57%〔3〕。全身麻醉劑具有特異性細胞信號傳導的作用,如吸入麻醉劑氙氣可上調轉錄因子——缺氧誘導因子(HIF)-1α,這類藥物對缺氧損傷的器官具有細胞保護作用〔4〕。相反,靜脈麻醉劑——異丙酚已被證明具有相反的作用,可抑制HIF-1α蛋白合成〔5~7〕。HIF-1α是腫瘤生長過程中的關鍵調節(jié)器,已成為潛在的治療靶標,可激活下游的基因,促進細胞增殖、血管生成和轉移,癌細胞利用隨后的表型反應,不僅可在惡劣的環(huán)境中促進自身存活,而且比周圍的健康細胞更有競爭優(yōu)勢〔8~10〕。本研究使用成熟的前列腺癌PC3細胞系,通過觀察麻醉劑誘導活化的HIF-1α對前列腺癌細胞生長、遷移和侵襲過程的影響,比較吸入麻醉劑異氟烷與靜脈麻醉劑異丙酚單獨和組合使用的區(qū)別。

    1 材料和方法

    1.1材料

    1.1.1細胞系 人前列腺癌PC3細胞系購于American Type Culture Collection (ATCC,Manassas,VA,USA)。

    1.1.2試劑 RPMI1640培養(yǎng)基、DMEM高糖培養(yǎng)基(美國HyClone實驗室),胎牛血清(FBS,英國ThermoScientific公司)、二甲基亞砜(DMSO)脂肪乳(天津博迪化工有限公司),HIF-1α siRNA(英國Qiagen公司),其他試劑購于上海碧云天生物技術有限公司。

    1.2方法

    1.2.1細胞培養(yǎng) 將人前列腺癌PC3細胞系(源自晚期雄激素非依賴性骨轉移的前列腺癌)接種到RPMI1640培養(yǎng)基(含10%熱滅活的FBS、2 mmol/L L-谷氨酰胺、100 U/ml青霉素/鏈霉素)中,在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。培養(yǎng)基每48 h更換一次。

    異氟烷處理:將PC3細胞以1×106個/ml的密度接種于30 mm2培養(yǎng)皿上,24 h后細胞融合達到80%時使用。用含有血清的新鮮RPMI1640培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基,置于鼓風培養(yǎng)箱中培養(yǎng),并使用校準流量計和蒸發(fā)器輸送所需的異氟烷(0.5%~2.0%)組分(含21%O2和5%CO2的氮氣),在37℃下用所需濃度的異氟烷處理細胞2 h。取出細胞,用全培養(yǎng)基代替無血清培養(yǎng)基,培養(yǎng)皿再次放回到37℃、含有5%CO2的標準培養(yǎng)箱中進一步分析;空白對照組細胞置于37℃、含有21%O2和5%CO2的氮氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在異氟烷處理后的0~24 h內不同時間點分析細胞。

    異丙酚處理:異丙酚制劑分別溶于10%的脂肪乳、DMSO中。將PC3細胞以1×106個/ml的密度接種在30 mm2培養(yǎng)皿上。

    在異丙酚形成脂質體時,異丙酚用PC3培養(yǎng)基稀釋至0.4 mg/ml。實驗前,異丙酚母液用PC3無血清培養(yǎng)基稀釋至所需濃度(0.5~10.0 μg/ml)。脂肪乳對照組:20%的脂肪乳用細胞培養(yǎng)基稀釋到使用時的最高濃度10 μg/ml;DMSO對照組:在培育細胞前,異丙酚用PC3無血清培養(yǎng)基稀釋至臨床常用濃度(1.0~4.0 μg/ml)。DMSO對照組與4.0 μg/ml異丙酚中DMSO的量(0.05%)相對應。將含有異丙酚的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞2 h。用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌細胞并再次使用PC3細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)。

    異氟烷和異丙酚配伍處理時,細胞先用含異丙酚(溶在脂肪乳或DMSO中,濃度為0~10 μg/ml)的培養(yǎng)基處理,然后用2.0%異氟烷處理2 h。隨后,異丙酚培養(yǎng)基用PC3細胞培養(yǎng)基替換,培養(yǎng)24 h后收集細胞。

    1.2.2氯化鈷(CoCl2)介導的HIF-1α誘導培養(yǎng) 將CoCl2粉末溶解在dH2O中制備1 mmol/L CoCl2母液,母液用含異丙酚的無血清PC3細胞培養(yǎng)基(0~4 μg/ml的脂肪乳)進一步稀釋至100 μmol/L。處理前,將PC3細胞以1×106/ml的密度接種在30 mm2培養(yǎng)皿上,用含異丙酚的CoCl2培養(yǎng)基替換完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)6 h。處理后立即收取細胞進行免疫印跡試驗。

    1.2.3缺氧HIF-1α誘導培養(yǎng) 將細胞置于鼓風培養(yǎng)箱中,在37℃、含1%O2和5%CO2的氮氣中培養(yǎng)18 h。立即收取細胞用于Western印跡試驗。

    1.2.4siRNA靶向沉默HIF-1α 根據siRNA設計原則,設計HIF-1α基因siRNA序列如下:正義鏈5′-GAAGAACUAUGAACAUAAATT-3′,反義鏈5′-UUUAUGUUCAUAGUUCUUCCT-3′;非siRNA靶向沉默的非特異性基因作為陰性對照,基因序列由上海吉瑪制藥技術有限公司合成,使用脂質體RNAi MAX(表達載體)進行轉染。PC3細胞培養(yǎng)濃度為0.4×106個/ml,并用siRNA靶向沉默的人類HIF-1α基因或20 nmol/L的脂質體siRNA懸液緩沖劑處理。將處理后的細胞在5%CO2、37℃下培養(yǎng)6 h。PBS洗滌細胞,使用異氟烷、異丙酚、多西他賽(DTX)進行處理后加入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。

    1.2.5化療劑處理PC3細胞 治療前列腺癌的抗有絲分裂化療劑——DTX與異氟烷和異丙酚聯合應用處理PC3細胞。使用異氟烷、異氟烷和異丙酚聯合處理PC3細胞24 h;異氟烷處理siRNA預處理的PC3細胞24 h。將含1 mmol/L DTX的PC3培養(yǎng)基母液稀釋至10~100 μmol/L,替代原培養(yǎng)基培養(yǎng)上述細胞24 h。

    1.2.6PI3K和MEK抑制劑處理PC3細胞 將PC3細胞(1×106個/ml)接種在30 mm2培養(yǎng)皿中,用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)選擇性抑制劑LY294002或絲裂原活化蛋白(MAPK)/細胞外調節(jié)激酶(ERK)選擇性抑制劑U0126處理,在5%CO2、37℃的孵育箱中培養(yǎng)16 h。將異氟烷、異丙酚溶于無菌DMSO中,制備濃度為10 mmol/L的母液,用無血清培養(yǎng)基稀釋至50 μmol/L。麻醉劑處理后立即收取細胞用于免疫印跡試驗。

    1.2.7免疫印跡試驗 用冰冷的PBS洗滌上述對照或處理的PC3細胞,并在細胞裂解緩沖液〔含20 mmol/L Tris-HCl(pH7.5),150 mmol/L NaCl,1 mmol/L Na2-EDTA,2 mmol/L EGTA,1%Triton,2.5 mmol/L Na4P2O7,1 mmol/L β-甘油磷酸鹽,1 mmol/L Na3VO4,1 μg/ml亮抑酶肽,1 mmol/L苯基甲磺酰氟和1 mmol/L二硫蘇糖醇〕中用刮刀裂解細胞。樣品在4℃下13 000 r/min離心30 min,收集上清液。使用Bradford法測定總蛋白濃度,每個樣品蛋白提取物的含量為40 μg。將蛋白提取物以1∶3的比例加入十二烷基硫酸鈉(SDS)樣品緩沖液中,95℃加熱10 min,在凝膠(NuPAGE 4-12%Bis-Tris)上進行電泳,轉移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜,將蛋白條帶放入TBST溶液(含5%的脫脂奶粉)中,室溫搖床振蕩1 h,4℃密閉12 h。按照marker分子量指示剪出所需蛋白的條帶,以0.1 ml/cm2的標準加入含有一抗(鼠抗HIF-1α、兔抗Bcl-2、兔抗HIF-1β、兔抗磷酸化Akt、小鼠抗磷酸-ERK)的封閉液,室溫孵育3 h。用TBST溶液振蕩漂洗5次,每次8 min。隨后加入二抗〔辣根過氧化物酶(HRP)標記的鼠抗或兔抗〕常溫孵育1 h。內參抗體為α-微管蛋白(Tubulin)。印跡用TBST洗滌3次,每次5 min,Tris緩沖鹽溶液(TBS)洗滌1次,然后使用增強化學發(fā)光(ECL)試劑盒檢測。采用SyngeneGeneSnap軟件的圖像處理器采集蛋白質條帶,蛋白質表達水平與使用GeneTools測量的條帶強度相對應。數據分析選取α-微管蛋白與對照組蛋白表達水平的比值。

    1.2.8免疫細胞化學試驗 將PC3細胞在4%多聚甲醛中固定10 min,PBS漂洗2次,每次5 min,用含0.1%Triton X-100的PBS(PBS-T)透化10 min,PBS洗滌2次,每次5 min。室溫下使用10%正常山羊血清密閉培養(yǎng)1 h。在4℃下,將細胞與任意一種抗體〔兔抗HIF-1α、兔抗血管內皮生長因子(VEGF)、鼠抗Ki-67、鼠抗細胞色素C、小鼠細胞周期蛋白D抗體、小鼠細胞周期蛋白E抗體〕密閉培養(yǎng)12 h。PBS漂洗3次,將細胞與含驢抗兔IgG的PBS-T中孵育2 h。用PBS沖洗,在4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的Vectorshield熒光培養(yǎng)基中蓋片培養(yǎng)。對于雙重標記,本研究使用以下抗體組合:HIF-1α/VEGF、HIF-1α/Ki-67、HIF-1α/細胞周期蛋白D和HIF-1α/細胞周期蛋白E。PC3細胞先與第一主抗體孵育過夜,隨后依次為第一次級抗體、第二主抗體、第二次級抗體。使用AxioCam數碼相機(安裝在有Zeiss KS-300軟件的Olympus BX60顯微鏡上)獲得10張高倍視野(HPF)圖。HIF-1α、HIF-1α/VEGF、HIF-1α/Ki-67和細胞色素C染色用于定性分析;對于Ki-67染色,隨機選擇8個有代表性的區(qū)域,使用ImageJ1.35軟件測量Ki-67陽性細胞的平均像素強度。

    1.2.9細胞活力測定 使用染料3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物(MTT)評估細胞活力。在基本培養(yǎng)基加入Elele L-谷氨酰胺(MEM)稀釋MTT至0.5 mg/ml。在5%CO2、37℃的孵育箱中培養(yǎng)2 h。吸去上清,加入1 ml DMSO溶解甲臜,振蕩20 min。將樣品轉移到96孔板中,使用Mrx酶標儀 在595 nm波長處測定吸光度值,并計算抑制率。

    1.2.10劃痕實驗 當細胞鋪滿24孔板后,用無菌槍頭(20 μl)制造沒有貼壁細胞的均勻劃痕,PBS洗2遍以除去游離及破碎細胞,加入無血清DMEM,在倒置顯微鏡下攝片并標記此時攝片位置。繼續(xù)培養(yǎng)24 h后,在相同的位置再次攝片。用ImageJ 1.35軟件分析拍攝照片的劃痕距離。傷口愈合定量為剩余無細胞區(qū)域平均百分比與初始傷口的面積之比〔11〕。

    1.3統(tǒng)計分析 使用SPSS22.0軟件進行單因素方差分析,然后用GraphPad Prism進行Student-Newman-Keuls后分析測試。

    2 結 果

    2.1臨床常用濃度的異氟烷持續(xù)誘導HIF-1α表達和易位 為了區(qū)分異氟烷對HIF-1α蛋白水平的影響,將PC3細胞用0.5%~2.0%異氟烷處理2 h后,分別在0、2、4、8和24 h收取細胞,并使用免疫印跡和免疫細胞化學進行分析。結果表明:異氟烷可誘導HIF-1α蛋白水平顯著增加并具有時間依賴性(表1)和劑量依賴性(表2);2.0%異氟烷可引發(fā)HIF-1α蛋白水平顯著上調,處理后4~8 h基本持平,在處理24 h后出現最大值(表2)。此外,用1.5%異氟烷和2.0%異氟烷處理結果表明:異氟烷誘導的HIF-1α表達活化具有劑量依賴性(表2)。然而異氟烷處理后的HIF-1β蛋白質水平與處理時間(表1)和劑量(表2)基本無關。異氟烷處理24 h后,觀察到HIF-1α從細胞質進入細胞核的明顯易位(與空白對照相比),并作為轉錄調節(jié)因子啟動下游基因表達,見圖1。

    表1 不同時間處理異氟烷對HIF-1α、HIF-1β表達活力的影響

    表2 異氟烷相對濃度對HIF-1α、HIF-1β表達活力的影響

    圖1 異氟烷對HIF表達的影響(×200)

    2.2異丙酚抑制由各種興奮劑誘導的HIF-1α活化 以臨床常用濃度的異丙酚(≤4 μg/ml)和HIF-1α誘導劑:缺氧、CoCl2或異氟烷進行共干預實驗。處理次數取決于進行的實驗。在共干預實驗(異丙酚和缺氧或CoCl2)之后立即收取細胞;異丙酚單獨處理后在不同的時間點收取細胞(0~24 h);異丙酚和異氟烷共處理后24 h立即收取細胞。為了排除異丙酚載體的影響,這些實驗及初始對照使用DMSO和脂肪乳為對照組。與空白對照相比,缺氧可顯著增加HIF-1α蛋白水平(表3);缺氧和異丙酚以劑量依賴性方式共處理可消除效應(表4)。CoCl2和異丙酚共處理細胞可觀察到與缺氧和異丙酚共處理相似的結果。CoCl2誘導HIF-1α活化(表4),且異丙酚抵消該作用(表4)。最重要的是,異丙酚以劑量依賴的方式消除2%異氟烷誘導的HIF-1α表達,不管是用脂肪乳(表4)還是用DMSO(表3)。

    2.3異丙酚和特異性HIF-1α抑制異氟烷誘導的VEGF上調和細胞增殖 將經siRNA預處理的PC3細胞用2%異氟烷單獨處理2 h,再麻醉處理24 h后收取細胞;將未經siRNA預處理的PC3細胞分別用2%異氟烷及2%異氟烷與4 μg/ml異丙酚聯合處理2 h,再麻醉處理24 h后收取細胞。三組細胞最后通過免疫細胞化學方法測定HIF-1α/VEGF和HIF-1α /Ki-67水平。4 μg/ml的異丙酚可有效阻斷異氟烷誘導的HIF-1α、VEGF(圖2A)和Ki-67(圖2B)的相關表達,其表達有助于血管生成及標記活性細胞增殖。特異性HIF-1α PC3細胞也觀察到類似的抑制效果,其選擇性阻斷異氟烷誘導的HIF-1α表達(圖2A)。HIF-1α抑制可使VEGF(圖2A)和Ki-67水平(圖2B)均降低。

    表3 缺氧和異氟烷處理對HIF-1α表達活性的影響

    表4 CoCl2和異氟烷處理對HIF-1α表達活性的影響

    圖2 異氟烷單獨使用、異氟烷與異丙酚聯用及siRNA經異氟烷處理的PC3細胞對HIF-1α/VEGF和HIF-1α/Ki-67表達的影響(×200)

    2.4異氟烷促進細胞周期進程和細胞增殖,而異丙酚和特異性HIF-1α抑制周期進程和細胞增殖 異氟烷處理后的PC3細胞中細胞周期蛋白D和細胞周期蛋白E的表達增加;與用異氟烷處理相比,用異丙酚或特異性HIF-1α處理抵消了這些作用。細胞活力從異氟烷處理的1.4倍(相對于空白)降低至異氟烷與異丙酚聯合處理的1.10倍。見圖3。

    圖3 異氟烷單獨使用、異氟烷與異丙酚聯用及siRNA經異氟烷處理的PC3細胞對HIF-1α、細胞周期蛋白D和細胞周期蛋白E表達的影響(×200)

    2.5異丙酚和特異性HIF-1α可逆轉異氟烷誘導PC3細胞對化療劑DTX的抑制作用 首先將未處理的PC3細胞暴露于異氟烷和異丙酚二者聯合組及異氟烷組,將經siRNA預處理的PC3細胞暴露于異氟烷組,隨后將上述三組細胞及未經處理的PC3細胞用DTX處理24 h后立即用于免疫細胞分析和免疫印跡。與單獨使用DTX處理后活躍分裂細胞為(26%±2%)相比,異氟烷組的PC3細胞中抑制有絲分裂效果較差,其活躍分裂細胞為(60%±5%);聯合組活躍分裂細胞為(18%±1%);經siRNA預處理的異氟烷組活躍分裂細胞為(28%±2%)。MTT結果顯示:空白組與DMSO組細胞活力分別為(1.05±0.08)、(1.01±0.05)。與單獨使用DTX 處理的PC3細胞的細胞活力為(0.13±0.01)相比,異氟烷組具有更高的增殖速率為(0.47±0.05);其余兩組變化不大,聯合組細胞活力為(0.18±0.03),經siRNA預處理的異氟烷組細胞活力為(0.14±0.03)。細胞色素C濃度結果顯示:除DTX對照組外,異氟烷組細胞色素C濃度較低。Bcl-2蛋白結果顯示:異氟烷組Bcl-2蛋白過度表達;其余3組均抑制Bcl-2蛋白表達,其中空白組為1.06±0.04,DTX對照組為0.47±0.06,聯合組為0.35±0.02,經siRNA預處理的異氟烷組表達程度最低,為0.27±0.03。見圖4。

    圖4 異氟烷單獨使用、異氟烷與異丙酚聯用及siRNA經異氟烷處理的PC3細胞經過DTX處理,對Ki-67、細胞色素C和Bcl-2蛋白表達影響(×200)

    2.6磷酸化Akt而非ERK在異氟烷或異丙酚誘導的HIF-1α表達改變中發(fā)揮重要作用 圖5可見,將PC3細胞用LY294002或U0126過夜處理,再分別用異氟烷、異氟烷和異丙酚聯合處理2 h。24 h后,收取細胞用于免疫印跡和HIF-1α、p-Akt和p-ERK研究。研究表明:磷酸化激酶Akt,在異氟烷誘導的HIF-1α過表達中起主導作用;與異氟烷單獨處理相比,LY294002異氟烷聯合組及異氟烷聯用異丙酚組顯著減少HIF-1α過表達;相比之下,與單獨使用異氟烷組相比,U0126聯合異氟烷組未影響HIF-1α表達。

    圖5 異氟烷、異丙酚對HIF-1α、p-Akt和p-ERK表達的影響

    異氟烷組與空白對照相比顯示更高含量的p-Akt;LY294002異氟烷聯合組及異氟烷聯用異丙酚組顯著減少p-Akt表達。單獨使用異氟烷有增加p-ERK的趨勢;異氟烷和異丙酚聯合組及異氟烷和U0126聯合組顯著降低p-ERK表達。為了區(qū)分異氟烷和異丙酚處理對p-Akt的作用,將PC3細胞用單獨2%異氟烷或4 μg/ml 異丙酚分別處理2 h。隨后的0,2,4,8和24 h收取蛋白樣品。結果表明:異氟烷誘導p-Akt具有時間依賴性;異丙酚處理后0、2 h,p-Akt顯著降低,然后恢復到正常水平,這可能是因為存在正反饋機制。從這些發(fā)現可以推測異丙酚通過拮抗Akt磷酸化阻止異氟烷誘導的HIF-1α過表達,這種抑制也可能由于ERK磷酸化減少而減少。

    2.7異丙酚和HIF-1α特異性siRNA可逆轉異氟烷增強的PC3細胞遷移和侵襲 劃痕實數據顯示:與對照組制造劃痕24 h后相比,異氟烷組顯著加速了空隙閉合,異丙酚或特異性HIF-1α可抑制這些效應(圖6)。

    圖6 異氟烷、異丙酚、特異性HIF-1α對細胞空隙閉合的影響(×200)

    3 討 論

    本研究結果顯示,吸入型麻醉劑異氟烷對人工培養(yǎng)的前列腺癌PC3細胞以不依賴氧的方式激活HIF-1α表達,增強了癌細胞增殖、遷移及耐藥性。而單獨使用靜脈麻醉劑異丙酚對PC3細胞HIF-1α表達沒有影響,且能夠抑制化學因素或異氟烷誘導的HIF-1α過表達。

    HIF-1α與癌癥激活和疾病發(fā)展密切相關〔12〕。已經在多種人類癌癥中發(fā)現其水平升高與腫瘤生長、血管形成、轉移和愈后相關〔13〕。由于轉錄因子直接調控數百個基因表達,HIFs調節(jié)血管生成、代謝重新編程、增殖、轉移和侵入等腫瘤發(fā)生的關鍵步驟,因此該治療靶標備受關注。

    本研究表明:HIF-1α從細胞質轉移到細胞核發(fā)揮其作為轉錄因子的作用,其下游基因的表達也隨之上升,包括VEGF和Ki-67,異氟烷處理后這兩種蛋白顯著增加。異氟烷為廣泛使用的揮發(fā)性麻醉劑,對HIF-1α的激活使腫瘤細胞增長和轉移。因此,全身麻醉劑異氟烷可能增加前列腺癌復發(fā)的風險。

    腫瘤細胞的快速和不可控性生長導致血液供應不足,腫瘤內嚴重缺氧,使HIF-1α水平上調。HIF-1α可以激活參與蛋白合成的PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK途徑。通過激活胰島素、胰島素樣生長因子、表皮生長因子和白細胞介素-2等生長因子和細胞因子,增加HIF-1α蛋白的合成速率。為了確定異氟烷可通過PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK途徑誘導HIF-1α上調,我們使用PI3K抑制劑LY294002或者MAPK/ERK1/2抑制劑U0126處理PC3細胞,再經過異氟烷處理,發(fā)現 PI3K抑制劑抑制了HIF-1α上調,而MEK 1/2抑制劑沒有顯著效果。還發(fā)現使用LY294002處理可消除異氟烷處理后的p-Akt水平升高。因此,多細胞效應包括HIF-1α、Akt和異氟烷提供的級聯反應最終會促進癌細胞存活和生長,并使抗癌耐藥性增加。

    HIFs與化學抗性相關。HIF-1α調節(jié)多藥耐藥蛋白家族ABCB1和ABCG2兩種基因轉錄,其對各種細胞毒性藥物如紫杉烷、多柔比星和長春堿具有耐藥性〔14〕。筆者發(fā)現,異氟烷處理的PC3細胞對DTX的響應顯著降低是由于細胞增殖率升高、活躍細胞的比例增加、細胞損傷標記細胞色素C及抗凋亡蛋白Bcl-2的過表達減少所導致。當引入HIF-1α特異性siRNA時,該抗性減弱,表明這種效應是通過異氟烷對HIF-1α上調造成的。

    異丙酚由于藥代動力學性質良好廣泛應用于臨床實踐。據報道,異丙酚通過抑制肌動蛋白應激纖維的形成和HeLa人宮頸癌細胞病灶的黏附來減弱人類癌細胞的侵襲能力,同時抑制骨肉瘤鼠模型中的肺癌細胞轉移,并增強小鼠和人類毒性T細胞的活性〔15,16〕。

    本研究數據表明,異丙酚抑制異氟烷、CoCl2、缺氧引起的HIF-1α上調;抑制異氟烷處理引起的VEGF和Ki-67升高;抑制異氟烷誘導產生的對PTX的抗藥性。這些發(fā)現進一步表明異丙酚具有抑制癌細胞增殖、生長的性質。異丙酚和異氟烷聯合治療減少Akt的磷酸化并抑制HIF-1α上調,可能是異丙酚通過抑制PI3K途徑和HIF-1α的生成而產生抗腫瘤作用;此外,異氟烷也可誘導p-Akt過表達,說明異氟烷可以通過引起p-AKT過表達進一步引起腫瘤惡化,但這需要進一步研究。

    總之,在前列腺癌細胞中異氟烷通過PI3K/AKT/mTOR途徑上調HIF-1α,引起標記物和血管生成;同時,癌細胞活性和抗藥性增加。異丙酚聯合異氟烷通過拮抗Akt磷酸化可抑制上述效應。未來的工作應該研究常見組合麻醉劑在多種腫瘤模型中的作用。

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