老年結(jié)直腸癌組織中miR-182表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

蔣華鋒 沈毅 薛露

(1紹興市人民醫(yī)院肛腸外科，浙江 紹興 312000；2吉林大學(xué)第一醫(yī)院小兒血液科)

結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率較高，早期局限性結(jié)直腸癌的死亡率為7%～26%，發(fā)生轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌的死亡率則高達(dá)80%，因此早期診斷結(jié)直腸癌對降低結(jié)直腸癌的死亡率、改善預(yù)后具有重要價(jià)值〔1，2〕。微小RNA(miR)長18～22 nt，由內(nèi)源基因編碼的單鏈非編碼RNA，研究發(fā)現(xiàn)多種miR在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)失調(diào)，在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用〔3，4〕。miR-182在多種組織和細(xì)胞中表達(dá)，在組織器官的生長、分化、發(fā)育等過程中發(fā)揮重要作用〔5〕，miR-182在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮重要作用〔6〕。本文對老年結(jié)直腸癌組織中miR-182水平進(jìn)行研究，探討其在結(jié)直腸癌中的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1材料 組織標(biāo)本：選擇紹興市人民醫(yī)院2010年1月至2011年12月70歲以上老年結(jié)直腸癌患者120例結(jié)直腸癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本。120例患者均經(jīng)病理證實(shí)為結(jié)直腸癌，均為初次診斷為結(jié)直腸癌者，術(shù)前未行放化療等其他治療，首次進(jìn)行手術(shù)治療，均簽署知情同意書。120例患者年齡(75.86±3.72)歲；男78例，女42例；結(jié)腸癌67例，直腸癌53例；浸潤深度T1者31例，T2者26例，T3者34例，T4者29例；TNM分期Ⅰ期者27例，Ⅱ期41例，Ⅲ期者38例，Ⅳ期者14例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者43例；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者38例。入選患者術(shù)后均進(jìn)行正規(guī)隨訪，未正規(guī)隨訪或失訪者剔除，隨訪時(shí)間從手術(shù)結(jié)束后開始至患者死亡或隨訪截止日期2016年12月31日。本研究經(jīng)紹興市人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

1.2結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中miR-182水平測定 取患者新鮮結(jié)直腸癌組織和癌旁組織勻漿后提取總RNA，根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)測定組織中miR-182水平，PCR反應(yīng)條件為：95℃ 10 min；95℃ 20 s，62℃ 30 s，72℃ 30 s，共42個(gè)循環(huán)，以U6為內(nèi)參照。結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中miR-182水平以2-ΔΔCT表示。實(shí)時(shí)熒光定量PCR相關(guān)試劑及儀器購于美國Sigma公司。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)直腸癌組織中miR-182水平對結(jié)直腸癌的診斷價(jià)值采用受試者工作特征(ROC)曲線分析，結(jié)直腸癌組織中miR-182水平與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系采用Kaplan-Meier法。

2 結(jié) 果

2.1結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中miR-182水平比較 結(jié)直腸癌組織中miR-182水平(1.81±0.21)明顯高于癌旁組織(1.00±0.13，t=35.926，P=0.000)。

2.2結(jié)直腸癌組織中miR-182水平與臨床病理特征的關(guān)系 結(jié)直腸癌組織中miR-182水平與結(jié)直腸癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者結(jié)直腸癌組織中miR-182水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)；結(jié)直腸癌組織中miR-182水平與結(jié)直腸癌患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤浸潤深度、CEA水平無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1 結(jié)直腸癌組織中miR-182水平與臨床病例特點(diǎn)的關(guān)系

2.3結(jié)直腸癌組織中miR-182水平對結(jié)直腸癌的診斷價(jià)值 結(jié)直腸癌組織中miR-182水平診斷結(jié)直腸癌的ROC曲線下面積為0.812，95%CI為0.809～0.815，miR-182水平界值為1.623，靈敏度為86.34%，特異度為77.16%。

2.4結(jié)直腸癌組織中miR-182水平與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系 120例結(jié)直腸癌患者隨訪時(shí)間7.86～68.67個(gè)月，患者中位生存時(shí)間為28.71個(gè)月，結(jié)直腸癌組織中miR-182以1.623為界，miR-182低表達(dá)患者的生存率明顯高于高表達(dá)者(P=0.009)。

3 討 論

結(jié)直腸癌在不同地區(qū)的發(fā)病率不同，結(jié)直腸癌的發(fā)生和遺傳因素、環(huán)境和生活方式關(guān)系密切，結(jié)直腸癌的易感因素包括家族史、年齡、炎癥性腸病，食用大量紅色肉類、酒精過剩、肥胖、高脂肪飲食及吸煙等不良生活方式增加結(jié)直腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)〔7，8〕。結(jié)直腸癌經(jīng)歷了從基因突變引起腸道黏膜上皮細(xì)胞腺瘤到向結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)變的過程，該過程為連續(xù)完整的過程，通過篩查、化學(xué)預(yù)防、手術(shù)等手段可以干擾該自然過程，預(yù)防結(jié)直腸癌的發(fā)生〔9，10〕。結(jié)直腸癌的預(yù)后和結(jié)直腸癌診斷時(shí)的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，早期結(jié)直腸癌患者的生存率相對較高，而發(fā)生轉(zhuǎn)移患者的生存率明顯降低。由于結(jié)直腸癌早期癥狀不明顯，因此結(jié)直腸癌的早期篩查具有重要價(jià)值〔11，12〕。近年來新出現(xiàn)的內(nèi)窺鏡檢查等大大提高了結(jié)直腸癌的早期診斷率，但仍有大部分患者不能在早期診斷，往往發(fā)現(xiàn)時(shí)已為結(jié)直腸癌晚期，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后〔13，14〕?？紤]內(nèi)鏡檢查價(jià)格比較昂貴且為侵入性操作，因此開發(fā)非侵入性的比較準(zhǔn)確的結(jié)直腸癌的診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)標(biāo)志物具有重要價(jià)值。

miR在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、代謝、轉(zhuǎn)化、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等多種病理過程中發(fā)揮重要作用，參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程〔15，16〕。miR具有高度保守性，可通過和靶mRNA結(jié)合，導(dǎo)致靶基因降解或抑制靶基因翻譯，從而在基因轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控中發(fā)揮作用〔17，18〕。大量研究發(fā)現(xiàn)miR在結(jié)直腸癌中表達(dá)異常，參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程〔19〕；不少miR成為結(jié)直腸癌診斷、預(yù)測化療敏感性、預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物〔20，21〕。

miR-182在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，和惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移關(guān)系密切〔22〕。在不同惡性腫瘤中miR-182表達(dá)不同〔23〕，在黑素瘤、肝細(xì)胞癌、卵巢癌等惡性腫瘤中高表達(dá)，并可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長及轉(zhuǎn)移〔24，25〕；miR-182在肺癌和胃癌中低表達(dá)，可抑制腫瘤細(xì)胞的生長〔26，27〕。本文結(jié)果表明miR-182可能參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程，可用于預(yù)測結(jié)直腸癌的病情嚴(yán)重程度，有望成為結(jié)直腸癌診斷和預(yù)后判斷的潛在指標(biāo)。