精準(zhǔn)檢測，科學(xué)防控
——訪北京愛德士元亨生物科技有限公司

文/唐彩琰，何 閃(《國外畜牧學(xué)-豬與禽》編輯部)

圖1 在愛德士展位現(xiàn)場采訪

問：愛德士的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)產(chǎn)品有哪些優(yōu)勢及獨到之處？

徐先生：美國愛德士生物科技公司(以下稱愛德士)成立于1984年。大家對愛德士品牌的認(rèn)知始于酶聯(lián)免疫法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)系列產(chǎn)品，其實我們早在1993年就有了PCR診斷產(chǎn)品面世，并于2007年研發(fā)了熒光定量PCR系列產(chǎn)品。愛德士產(chǎn)品無論在研發(fā)設(shè)計還是在產(chǎn)品質(zhì)控方面始終如一地執(zhí)行行業(yè)最高標(biāo)準(zhǔn)和最嚴(yán)格的質(zhì)控體系。我們除了給客戶提供性能優(yōu)異的PCR產(chǎn)品之外，同時也提供PCR實驗室問題解決方案，幫助客戶建立實驗室質(zhì)控體系。首先，愛德士現(xiàn)有的熒光定量PCR體系擁有獨特的內(nèi)參系統(tǒng)，可以監(jiān)控取樣環(huán)節(jié)、樣本運輸/保存、樣本前處理及核酸提取、PCR體系配置、儀器及程序設(shè)定等各個環(huán)節(jié)；若任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題導(dǎo)致假陰性的結(jié)果(尤其是針對非洲豬瘟的檢測，對豬場來說往往是致命的)，愛德士的內(nèi)參系統(tǒng)均能指示出來。其次，我們引入兩個特殊試劑：陽性對照追蹤檢測混合液和細(xì)菌DNA檢測混合液，讓PCR實驗室全方面的污染監(jiān)測成為現(xiàn)實，避免環(huán)境污染帶來的樣品假陽性結(jié)果；另外，愛德士PCR產(chǎn)品實現(xiàn)了通用試劑及通用擴增程序，簡化了實驗室的操作，減輕了試劑污染壓力，并實現(xiàn)了實驗室的高通量檢測。

問：目前市場上檢測非洲豬瘟病毒的熒光定量PCR產(chǎn)品品牌眾多，愛德士的非洲豬瘟(African Swine Fever，ASF)熒光定量PCR產(chǎn)品性能如何？

徐先生：關(guān)于熒光定量PCR產(chǎn)品的性能評估指標(biāo)通常來說包括產(chǎn)品的分析敏感性和特異性、診斷敏感性和特異性、重復(fù)性及穩(wěn)定性等幾大方面。我們的非洲豬瘟PCR產(chǎn)品在這些方面均進(jìn)行了相關(guān)測試及驗證，其中包括兼容性(覆蓋目前已知的24個基因型)、最低檢出限(單拷貝，1～10拷貝/反應(yīng))、PCR擴增效率(效率100.7%；相關(guān)系數(shù)0.999 6；斜率-3.306 4)、混樣檢測能力(最多可達(dá)20份)、分析特異性(與其他豬病病原體如豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬圓環(huán)病毒和豬細(xì)小病毒等無任何交叉)診斷特異性(100%，n=227)；另外，該產(chǎn)品的重復(fù)性、穩(wěn)定性和容忍度等都非常優(yōu)異。同時愛德士非洲豬瘟PCR產(chǎn)品成功通過了非洲豬瘟歐盟參考實驗室(西班牙馬德里動物衛(wèi)生中心)的驗證，驗證報告提到愛德士的非洲豬瘟產(chǎn)品能夠得到可信的檢測結(jié)果(性能表現(xiàn)優(yōu)于參考方法國際獸醫(yī)局[(Office International Des Epizooties，OIE)和通用探針庫(Universal Probe Library，UPL)-PCR]。另外在中國非洲豬瘟防控中，愛德士的產(chǎn)品經(jīng)歷了實踐的檢驗，獲得了眾多客戶的認(rèn)可與信賴。

問：對于PCR實驗室的污染問題，愛德士有哪些好的建議？

徐先生：因為PCR方法尤其是熒光定量PCR的高敏感性，目前PCR實驗室污染非常普遍。要想避免PCR污染，我們需要對PCR實驗室的分區(qū)、人流、物流控制及操作過程等方面制定標(biāo)準(zhǔn)化流程；同時，我們要注意實驗室環(huán)境的定期污染監(jiān)測，查找實驗室漏洞，避免環(huán)境污染累計效應(yīng)給實驗室?guī)淼臑?zāi)難性后果。如果實驗室已經(jīng)出現(xiàn)了污染，我們要及時排查污染源，進(jìn)行有效的污染清除，避免干擾檢測結(jié)果，導(dǎo)致結(jié)果的不準(zhǔn)確。

問：在非洲豬瘟防控體系中，愛德士可以提供哪些服務(wù)？

徐先生：在實驗室層面，前期我們可以幫助客戶設(shè)計與規(guī)劃實驗室，制定儀器耗材選用標(biāo)準(zhǔn)，建立實驗室質(zhì)量管理與控制標(biāo)準(zhǔn)；協(xié)助建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程(Standard Operating Procedure，SOP)并在實驗室人員標(biāo)準(zhǔn)化操作、培訓(xùn)、考核等方面提供技術(shù)支持。在現(xiàn)場層面，我們可以根據(jù)豬場情況，有針對性地提供因地制宜的解決方案：如建立非洲豬瘟陰性豬場監(jiān)測體系，為正在發(fā)生問題的豬場提供精準(zhǔn)清除方案以及具體的復(fù)養(yǎng)方案等等。

問：面對非洲豬瘟的傳播風(fēng)險，在飼料環(huán)節(jié)如何進(jìn)行整體評估？

李先生：飼料廠執(zhí)行類似于豬場的非洲豬瘟生物安全策略有利于飼料的安全。具體來說，一是精簡飼料配方，停用豬源性原料，可以通過膨化、預(yù)烘干和高溫制粒等手段降低風(fēng)險，同時對大宗原料的來源加以控制，減少使用高風(fēng)險飼料。二是對原料和成品料定期評估，采樣過程中要注意樣本的交叉污染，同時為了監(jiān)控整個實驗過程，建議在檢測飼料樣本過程中增加內(nèi)部陽性對照(Internal Positive Control，IPC)。三是監(jiān)控成品料在包裝、運輸環(huán)節(jié)的污染問題。

問：豬場如何做到最早發(fā)現(xiàn)ASF感染風(fēng)險？

李先生：首先，我們建議豬場建立實時監(jiān)控體系：側(cè)重監(jiān)控豬場內(nèi)外部環(huán)境、監(jiān)控高風(fēng)險區(qū)域并及時排查可疑病例，以便在病毒進(jìn)入豬場的第一時間就能夠發(fā)現(xiàn)；其次，根據(jù)病毒的傳播特性，一般經(jīng)口鼻感染的豬感染病毒出現(xiàn)在口鼻處的時間早于血液2 d～3 d，我們可以通過愛德士的非洲豬瘟熒光定量PCR方法最早發(fā)現(xiàn)感染，為豬場及時處置爭取最寶貴的時間。

問：在精準(zhǔn)清除的過程中如何做到“精準(zhǔn)”？

李先生：首先需要正確采樣：選擇合適的樣本，保證樣本確實有效；如果采樣過程中操作不正確(如鼻腔拭子采樣出現(xiàn)漏采或交叉污染)，就會失去最早發(fā)現(xiàn)感染和最早進(jìn)行科學(xué)處置的時機。其次需要足夠的樣本數(shù)量：發(fā)病豬群所用的棟舍及相鄰棟舍建議全部采樣，其余豬群大比例采樣篩查，及早確認(rèn)發(fā)病范圍和數(shù)量。再次是科學(xué)的混樣：由于檢測目的不一樣，我們會選取不同的樣本來進(jìn)行檢測，但ASF病毒在不同的樣本中出現(xiàn)的時間和病毒載量差異性很大，這時需要根據(jù)所選試劑盒的敏感度和樣本所含病毒拷貝數(shù)決定最佳的混樣比例。

問：陰性豬場如何建立非洲豬瘟的風(fēng)險監(jiān)測體系？

李先生：在沒有疫苗免疫前，我們需要提升針對非洲豬瘟的生物安全措施。同時，我們要建立一套行之有效的監(jiān)控體系。豬場應(yīng)該按照自身布局特點對整個區(qū)域進(jìn)行劃分，不同區(qū)域、不同風(fēng)險等級應(yīng)有不同的監(jiān)測重點。豬場可以參照生產(chǎn)區(qū)、配套區(qū)、流通環(huán)節(jié)及外部環(huán)境建立監(jiān)控體系，針對不同的環(huán)節(jié)，對人、車和物等加以控制及檢測。并且，豬場應(yīng)通過前期病原監(jiān)測、信息搜集和場地條件等評估豬群的暴露風(fēng)險等級，再基于暴露風(fēng)險等級，制定不同的生物安全及管理策略，備齊物資，設(shè)定有目標(biāo)、可執(zhí)行的預(yù)案，并通過員工培訓(xùn)、設(shè)施改進(jìn)和流程優(yōu)化等方式，嚴(yán)格執(zhí)行預(yù)設(shè)方案，設(shè)立合理的執(zhí)行情況檢查制度，根據(jù)現(xiàn)場執(zhí)行情況、周邊疫情發(fā)展情況和病原監(jiān)測結(jié)果等匯總反饋，動態(tài)了解自身現(xiàn)狀，不斷提升自己，實現(xiàn)安全保障。

編后按：北京愛德士元亨生物科技有限公司成立15年以來，始終為客戶提供最優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、最專業(yè)的技術(shù)支持及最完善的售后服務(wù)。愛德士在動物健康領(lǐng)域、水質(zhì)檢測和牛奶檢測等方面是全球翹楚(圖2)。

圖2 愛德士團(tuán)隊