蟠桃丸化裁方對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠主要安全性指標(biāo)的影響

郭曼萍，施偉麗，趙俊男，徐鳳芹，叢偉紅，陳可冀

蟠桃丸是清代宮廷御醫(yī)為乾隆皇帝特制的保健養(yǎng)生秘方，由人參、天冬、麥冬、枸杞子、地黃、當(dāng)歸、分心木等組成，20世紀(jì)80年代國(guó)醫(yī)大師陳可冀院士主持挖掘清代宮廷醫(yī)藥檔案時(shí)將其整理并用于大眾，成藥名為清宮壽桃丸。近代研究表明，蟠桃丸不僅有養(yǎng)生保健作用，在治療老年認(rèn)知障礙、高血壓病、冠心病、糖尿病、脂代謝異常、慢性腎功能不全、前列腺增生等方面也有較好效果[1-6]。

中醫(yī)藥在臨床中取得療效的同時(shí)，其安全性也越來(lái)越引起關(guān)注。目前，臨床上常借助常規(guī)血液學(xué)分析、血液生化檢測(cè)、尿樣分析和病理學(xué)檢查等來(lái)判斷中藥的安全性[7]，血液相關(guān)檢測(cè)中的溶血相關(guān)指標(biāo)、肝腎功能相關(guān)指標(biāo)、膽堿酯酶是常用的安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)。蟠桃丸化裁方是蟠桃丸的精簡(jiǎn)方，為陳可冀院士臨床上治療衰老、腎虛相關(guān)疾病的經(jīng)驗(yàn)方。根據(jù)臨床相關(guān)疾病的常見用藥時(shí)長(zhǎng)，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneous hypertensive rats，SHR)給予蟠桃丸化裁方11周后紅細(xì)胞、血紅蛋白、膽紅素、肝腎功能、膽堿酯酶、堿性磷酸酶等指標(biāo)的改變，探討其安全性，以期為臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要耗材及儀器 2 mL EDTA K3采血管，生產(chǎn)批號(hào)D160433W；5 mL血清促凝管(Z)，生產(chǎn)批號(hào)A16013WC，由西苑醫(yī)院提供；全自動(dòng)血液分析儀(日本東亞SYSMEX株式會(huì)Sysmex XE-5000)、全自動(dòng)生化分析儀(瑞士羅氏公司 Cobas8000)由西苑醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 12周齡SPF級(jí)WKY大鼠12只，SPF級(jí)SHR 60只，雌雄各半，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。SPF級(jí)動(dòng)物房適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后分為6組：對(duì)照組(WKY)、模型組(SHR)、厄貝沙坦+多奈哌齊組、多奈哌齊組、蟠桃丸化裁方低劑量組、蟠桃丸化裁方高劑量組，每組12只，雌雄各半。給予規(guī)律光照(晝夜各12 h)，自由飲食飲水，環(huán)境溫度(20±2)℃，相對(duì)濕度45%～70%。

1.3 藥物及給藥方法 厄貝沙坦片(安博維)，每片0.15 g，由賽諾菲(杭州)制藥有限公司提供，生產(chǎn)批號(hào)：J20130049；鹽酸多奈哌齊(安理申)，每片5 mg，由衛(wèi)材(中國(guó))藥業(yè)有限公司提供，生產(chǎn)批號(hào)：H20070181；蟠桃丸化裁方(組成：枸杞子、分心木等)，由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院制劑室提供。厄貝沙坦+多奈哌齊組按厄貝沙坦片15.50 mg/(kg·d)+鹽酸多奈哌齊0.52 mg/(kg·d)灌胃給藥，多奈哌齊組按鹽酸多奈哌齊0.52 mg/(kg·d)灌胃給藥，蟠桃丸化裁方低、高劑量組分別按蟠桃丸化裁方3.07 g/(kg·d)、6.14 g/(kg·d)灌胃給藥，模型組及正常對(duì)照組予等體積生理鹽水灌胃，給藥11周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 大鼠體重及一般情況觀察 各組大鼠每周測(cè)體重1次，觀察各組大鼠體重變化，每天給藥時(shí)觀察大鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)情況及毛色。

1.4.2 大鼠溶血相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后腹主動(dòng)脈采血，檢測(cè)血漿紅細(xì)胞數(shù)量、紅細(xì)胞比容、平均紅細(xì)胞體積、紅細(xì)胞分布寬度；血紅蛋白量、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度；血清直接、間接膽紅素及總膽紅素水平。

1.4.3 大鼠血清膽堿酯酶檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后腹主動(dòng)脈采血，檢測(cè)血清膽堿酯酶。

1.4.4 大鼠肝腎功能指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后腹主動(dòng)脈采血，檢測(cè)肝功能指標(biāo)：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-GT)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)；檢測(cè)腎功能指標(biāo)：血肌酐、尿酸、尿素、尿素氮。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般情況及體重觀察 對(duì)照組大鼠比較安靜，喜睡，膽小易驚，毛色發(fā)黃；模型組大鼠易受外界影響，活躍，毛色發(fā)白，給藥組與模型組比較未見明顯不同。分別統(tǒng)計(jì)雄性和雌性大鼠體重，發(fā)現(xiàn)雌鼠對(duì)照組體重較模型組顯著升高(P<0.01)，蟠桃丸化裁方高、低劑量組大鼠體重較模型組明顯升高(P<0.05或P<0.01)，詳見表1。雄鼠對(duì)照組體重與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；蟠桃丸化裁方高、低劑量組大鼠體重較模型組升高(P<0.05或P<0.01)。詳見表2。

表1 蟠桃丸化裁方對(duì)SHR雌鼠體重的影響(±s) g

與對(duì)照組比較，1)P<0.01；與模型組比較，2)P<0.05，3)P<0.01

表2 蟠桃丸化裁方對(duì)SHR雄鼠體重的影響(±s) g

與模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

2.2 蟠桃丸化裁方對(duì)溶血相關(guān)指標(biāo)的影響 紅細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)變化及膽紅素水平是間接反映溶血狀態(tài)的常用指標(biāo)。各組間紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞比容、紅細(xì)胞平均比容、紅細(xì)胞分布寬度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表3。與SHR模型組相比，蟠桃丸化裁方低劑量組平均血紅蛋白濃度明顯降低(P<0.05)，蟠桃丸化裁方高劑量組血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度均明顯降低(P<0.05或P<0.01)，西藥組血紅蛋白相關(guān)指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表4。與SHR模型組相比，蟠桃丸化裁方低劑量組間接膽紅素、直接膽紅素水平明顯降低(P<0.05或P<0.01)，蟠桃丸化裁方高劑量組、西藥組直接膽紅素水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表5。

組別只數(shù)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(×1012/L)紅細(xì)胞比容(L/L)紅細(xì)胞平均體積(fL)紅細(xì)胞分布寬度(%)對(duì)照組129.34±0.140.44±0.0147.55±1.5217.17±0.43模型組129.32±0.490.42±0.0145.98±0.7816.99±0.65厄貝沙坦+多奈哌齊組129.10±0.630.41±0.0245.39±1.6216.91±0.84多奈哌齊組128.96±0.600.42±0.0146.47±1.6517.08±1.04蟠桃丸化裁方低劑量組129.10±0.510.42±0.0146.16±1.6216.78±0.67蟠桃丸化裁方高劑量組128.92±0.550.42±0.0246.12±1.7016.55±1.05

組別只數(shù)血紅蛋白(g/L)平均血紅蛋白含量(pg)平均血紅蛋白濃度(g/L)對(duì)照組12154.67±4.2716.55±0.46348.67±4.63模型組12149.42±6.7216.04±0.19349.00±4.05厄貝沙坦+多奈哌齊組12144.18±7.2415.85±0.54349.45±4.52多奈哌齊組12144.82±6.6816.17±0.41348.18±4.92蟠桃丸化裁方低劑量組12144.64±3.2015.93±0.75344.73±5.371)蟠桃丸化裁方高劑量組12141.64±6.732)15.90±0.43344.73±5.641)

與模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

表5 蟠桃丸化裁方對(duì)大鼠膽紅素的影響(±s) μmol/L

與模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

2.3 蟠桃丸化裁方對(duì)SHR血清膽堿酯酶水平的影響 與對(duì)照組比較，SHR模型組血清膽堿酯酶水平明顯升高(P<0.01)。與SHR模型組相比，多奈哌齊組及蟠桃丸化裁方高、低劑量組血清膽堿酯酶水平明顯升高(P<0.01)；厄貝沙坦+多奈哌齊組血清膽堿酯酶水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表6。

2.4 蟠桃丸化裁方對(duì)SHR 肝功能的影響 與WKY對(duì)照組比較，SHR模型組AST、γ-GT水平明顯升高(P<0.01)；與SHR模型組相比，各給藥組ALT、AST、γ-GT水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表7。

2.5 蟠桃丸化裁方對(duì)SHR腎功能的影響 與對(duì)照組相比，SHR模型組尿酸水平明顯升高(P<0.05)；與SHR模型組比較，各用藥組尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，肌酐、尿酸水平有下降趨勢(shì)。詳見表8。

表6 蟠桃丸化裁方對(duì)SHR血清膽堿酯酶的影響(±s)U/L

與對(duì)照組比較，1)P<0.01；與模型組比較，2)P<0.01

表7 蟠桃丸化裁方對(duì)SHR肝功能的影響(±s) U/L

與對(duì)照組比較，1)P<0.01

組別只數(shù)尿素(mmol/L)尿素氮(mg/dL)肌酐(μmol/L)尿酸(μmol/L)對(duì)照組126.61±1.2618.52±3.5226.63±5.0761.50±23.96模型組127.18±1.3720.10±3.8227.08±3.4597.08±21.011)厄貝沙坦+多奈哌齊組126.25±0.5317.50±1.4927.67±2.1589.42±14.27多奈哌齊組126.78±0.8018.97±2.2626.00±2.0095.08±20.27蟠桃丸化裁方低劑量組127.86±0.6322.00±1.7826.82±2.1489.45±19.53蟠桃丸化裁方高劑量組126.94±0.8919.44±2.5026.17±4.0493.58±17.13

與對(duì)照組比較，1)P<0.05

3 討 論

中醫(yī)藥在當(dāng)今世界的醫(yī)療衛(wèi)生保健事業(yè)中扮演著不可或缺的角色，但是中藥的安全性問(wèn)題是客觀存在的，需要科學(xué)地進(jìn)行評(píng)價(jià)。蟠桃丸有補(bǔ)腎生精、益元強(qiáng)壯的功效，在高血壓病、老年性癡呆等心腦血管疾病的治療中取得較好的療效，其精簡(jiǎn)方——蟠桃丸化裁方是陳可冀院士的臨床經(jīng)驗(yàn)用方。研究表明，SHR可以作為篩選認(rèn)知功能紊亂治療藥物的動(dòng)物模型[8-11]。本實(shí)驗(yàn)以SHR為高血壓合并認(rèn)知障礙的動(dòng)物模型，給藥11周，觀察了蟠桃丸化裁方對(duì)SHR紅細(xì)胞、血紅蛋白、血清膽紅素3個(gè)溶血指標(biāo)的影響，同時(shí)檢測(cè)肝腎功能相關(guān)指標(biāo)及血清膽堿酯酶。

紅細(xì)胞完整性的損害，定義為溶血。紅細(xì)胞功能障礙與心血管疾病的嚴(yán)重并發(fā)癥相關(guān)，如高血壓、出血、中風(fēng)、心律失常和炎癥[12]。最近的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，紅細(xì)胞是具有額外功能的重要的組織間通信系統(tǒng)，紅細(xì)胞功能障礙與心血管疾病的一系列嚴(yán)重并發(fā)癥有關(guān)，如難以控制的高血壓[13]、出血并發(fā)癥[14]、室上性和室性心律失常以及炎癥反應(yīng)[15]。血紅蛋白對(duì)紅細(xì)胞的功能至關(guān)重要，其在血管內(nèi)溶血期間從細(xì)胞釋放到血漿中時(shí)，會(huì)產(chǎn)生一氧化氮的消耗、氧化應(yīng)激和血管功能障礙[12]。血清膽紅素主要是由體內(nèi)衰老的紅細(xì)胞發(fā)生裂解釋放出的血紅蛋白所產(chǎn)生，包括直接膽紅素和間接膽紅素兩種。紅細(xì)胞遭受較大破壞造成的溶血主要以間接膽紅素升高為主要特征[16-17]。肝臟受損時(shí)機(jī)體的總膽紅素及直接膽紅素濃度會(huì)出現(xiàn)明顯升高癥狀，常常能夠反映出較嚴(yán)重的肝細(xì)胞損害情況[18-20]。本實(shí)驗(yàn)中各組間紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞比容、紅細(xì)胞平均體積、紅細(xì)胞分布寬度等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與SHR模型組相比，蟠桃丸化裁方低劑量組平均血紅蛋白濃度、間接膽紅素、直接膽紅素顯著降低，高劑量組血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度均顯著降低，西藥組膽紅素、血紅蛋白等指標(biāo)無(wú)明顯差異。提示服用蟠桃丸化裁方未導(dǎo)致明顯的溶血反應(yīng)，血紅蛋白下降可能是蟠桃丸化裁方的藥效作用。

血清膽堿酯酶主要由肝細(xì)胞產(chǎn)生，是肝臟合成功能的靈敏指標(biāo)。凡是能夠引起肝臟合成功能下降的疾病，均可導(dǎo)致血清膽堿酯酶活力降低，其下降幅度與功能呈正相關(guān)[21]。研究表明，許多疾病中血清膽堿酯酶活性均有不同程度的下降[22]，如腎功能不全[23]、阿爾茲海默病[24]、血管性癡呆[25]、心力衰竭[26]、膿毒血癥[27]。在危重癥病人中，血清膽堿酯酶水平對(duì)判斷危重癥病人病情嚴(yán)重程度及預(yù)后有一定的意義[28]，可作為安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)中蟠桃丸化裁方組血清膽堿酯酶水平與SHR模型組比較顯著升高。提示服用蟠桃丸化裁方可上調(diào)血清膽堿酯酶水平。

另外，本實(shí)驗(yàn)中SHR雌鼠體重明顯低于其對(duì)照品系WKY組，雄鼠體重與WKY對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而蟠桃丸化裁方高、低劑量組雌雄大鼠體重較SHR對(duì)照組均明顯升高，這可能與服用蟠桃丸化裁方降低了SHR的自發(fā)性活動(dòng)水平有關(guān)[29]。藥物常見的不良反應(yīng)是對(duì)肝腎功能的影響。本實(shí)驗(yàn)中模型組AST、γ-GT、尿酸水平較對(duì)照組明顯升高，提示隨著血壓的升高，模型組肝腎功能出現(xiàn)損傷，而蟠桃丸化裁方組ALT、AST、γ-GT、尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平與模型組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且肌酐、尿酸水平有下降趨勢(shì)，提示常規(guī)服用蟠桃丸化裁方不會(huì)加重SHR的肝腎損害。

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提示，經(jīng)過(guò)11周的蟠桃丸化裁方灌胃給藥，SHR的肝腎功能未見明顯異常，未發(fā)生明顯溶血反應(yīng)，且血清膽堿酯酶水平上調(diào)，說(shuō)明蟠桃丸化裁方具有一定的安全性。本實(shí)驗(yàn)中使用蟠桃丸化裁方未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)事件，以上結(jié)果僅為蟠桃丸化裁方在高血壓合并認(rèn)知障礙的臨床應(yīng)用中提供參考。