谷樹葉不同提取物對高脂血癥大鼠血脂及血管內(nèi)皮細(xì)胞Bax和Bcl-2表達(dá)的影響

楊 娜 劉豐林

谷樹葉是?？浦参飿?gòu)樹Broussonetiapapyrifera(L.)Vent.的干燥成熟樹葉，又稱谷黃葉、醬黃葉、穀樹葉等[1]，始載于《名醫(yī)別錄》，列為上品。全國大部分地區(qū)有分布，主產(chǎn)于河南、湖北、湖南、山西、甘肅等省[2]。谷樹葉味甘，無毒，具有清熱解毒、涼血止癢等功效[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，谷樹葉還具有抗真菌、抑制心房收縮和鈣拮抗等作用[4, 5]。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，從谷樹葉不同提取物調(diào)節(jié)血脂水平方面來探究谷樹葉不同提取物對高脂血癥大鼠血脂的影響，以及其對血管內(nèi)皮細(xì)胞Bax和Bcl-2的影響，為深入開發(fā)谷樹葉的臨床應(yīng)用提供可靠的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量(200±20) g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，合格證號為SCXK(京)2014-0016。在溫度為(23±2)℃、濕度為(50±10)%、12 h光照交替的環(huán)境中飼養(yǎng)。

1.2 試藥與儀器谷樹葉藥材購自中國藥材集團公司，谷樹葉水提浸膏、水提醇沉浸膏和醇提浸膏均由本實驗室自制；辛伐他汀(華潤雙鶴利民藥業(yè)(濟南)有限公司，批號151201)；膽固醇(TC)檢測試劑盒、三酰甘油(TG)檢測試劑盒、高密度脂蛋白(HDL-C)檢測試劑盒和低密度脂蛋白(LDL-C)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)。其他試劑為國產(chǎn)分析純。

1.3 模型的建立、分組及給藥大鼠正常水食適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，60只SD大鼠隨機均分為6組，即正常對照組、模型對照組、辛伐他汀(10 mg/kg)組與谷樹葉水提組、谷樹葉水提醇沉組、谷樹葉醇提組，每組10只。除正常組繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)外，其余各組給予高脂飼料喂養(yǎng)，并且按每天0.5 ml/100 g體質(zhì)量的劑量灌胃給予復(fù)合豬油。造模同時，各組分別給予相應(yīng)藥物灌胃，正常對照組和模型對照組給予同體積純凈水，1次/d，連續(xù)給藥8周。

1.4 TC、TG、HDL-C和LDL-C含量測定分別于給藥4周和給藥8周后，各組大鼠禁食不禁水12 h，眼眥取血，4 ℃下3000 r/min 離心10 min，分離血清，分別檢測大鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的含量[6]。

1.5 Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)水平檢測采用Western blot 法。將剝?nèi)〉闹鲃用}約100 mg，提取蛋白，并測蛋白含量。經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育和二抗孵育，用BIO-RAD GC-800光密度掃描儀對膠片進行掃描并保存[7, 8]。

2 結(jié)果

2.1 谷樹葉提取物對大鼠TC水平的影響與正常對照組比較，模型組大鼠TC升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，谷樹葉各提取物組大鼠TC降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。谷樹葉提取物對模型大鼠TC水平的影響見表1。

表1 谷樹葉提取物對大鼠TC的影響 (例，

注：與正常對照組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05

2.2 谷樹葉提取物對大鼠TG水平的影響與正常對照組比較，模型組大鼠TG升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，谷樹葉各提取物組大鼠TG呈現(xiàn)降低趨勢，但是差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。谷樹葉提取物對模型大鼠TG水平的影響見表2。

表2 谷樹葉提取物對大鼠TG的影響 (例，

注：與正常對照組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05

2.3 谷樹葉提取物對大鼠HDL-C和LDL-C水平的影響與正常對照組比較，模型組大鼠HDL-C降低，LDL-C水平升高；與模型組比較，谷樹葉各提取物組大鼠HDL-C升高，LDL-C水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。谷樹葉提取物對模型大鼠HDL-C和LDL-C水平的影響見表3。

表3 谷樹葉提取物對大鼠HDL-C和LDL-C的影響 (例，

注：與正常對照組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05

2.4 谷樹葉提取物對大鼠主動脈Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)的影響與空白對照組比較，模型組大鼠的Bax蛋白表達(dá)顯著上調(diào)、Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P< 0.01)。與模型組比較，谷樹葉各提取物組的Bax蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)、Bcl-2蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。見圖1。

1.空白對照組；2.模型組；3.辛伐他汀組；4.谷樹葉水提組；5.谷樹葉水提醇沉組；6.谷樹葉醇提組圖1 Western blot 檢測各組Bax、Bcl-2 的蛋白表達(dá)

3 討論

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對谷樹葉研究的逐步深入，谷樹葉越來越多的化學(xué)成分和藥理活性被發(fā)現(xiàn)。谷樹葉中的化學(xué)成分主要為香豆素和黃酮類化學(xué)成分，具有抗真菌、抗氧化、促進記憶和增強免疫等作用[5]。

高脂血癥是指由于脂肪代謝或運轉(zhuǎn)異常使血液中一種或幾種脂質(zhì)濃度超過正常范圍，是一種脂質(zhì)代謝紊亂性疾病。其發(fā)病機制復(fù)雜，主要分為原發(fā)性高脂血癥和繼發(fā)性高脂血癥，容易誘發(fā)心腦血管疾病，為代謝綜合征形成的重要因素之一，也是促進動脈粥樣硬化和危及人類健康的冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(CHD)的主要危險因素之一[9, 10]。在我國，高脂血癥目前已經(jīng)成為危害公眾健康的重要因素，并呈年輕化的趨勢。但是，降血脂化學(xué)藥長期服用毒副作用較大[11]。因此，尋找安全性好、毒性較低的降脂藥物已經(jīng)迫在眉睫，而中醫(yī)藥恰恰符合這種需求，因此研究開發(fā)新型降血脂中藥制劑是目前的重要任務(wù)，且具有重要的意義和廣闊的前景。

中藥降脂一直是中藥研究工作者研究的重點，通過實驗篩選，我們發(fā)現(xiàn)谷樹葉具有明顯的降低血脂作用。本研究采用本實驗室自制的不同谷樹葉提取物(谷樹葉水提物、谷樹葉水提醇沉物和谷樹葉物)探討其對高脂血癥大鼠血脂的影響。研究發(fā)現(xiàn)谷樹葉3種提取物均可降低TC和LDL-C水平(P<0.05)，升高HDL-C水平(P<0.05)，但對TG的影響不具有顯著性差異。其中，谷樹葉水提醇沉組的降血脂作用最強。證明谷樹葉具有一定的降低血脂的作用。

另外，通過研究發(fā)現(xiàn)谷樹葉提取物能夠通過調(diào)節(jié)凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表達(dá)來對抗高脂模型大鼠所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。Bax 與Bcl-2 調(diào)控細(xì)胞凋亡2種關(guān)鍵蛋白，二者調(diào)控細(xì)胞對凋亡的易感性，Bax表達(dá)增強則細(xì)胞死亡，Bcl-2作用與之相反。谷樹葉提取物可以顯著上調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)，顯著下調(diào)Bax蛋白表達(dá)，以此對抗高脂血癥所致的血管內(nèi)皮氧化損傷。本研究結(jié)果對于谷樹葉降脂產(chǎn)品的研制開發(fā)具有指導(dǎo)意義。