氣相色譜法測(cè)定香味劑中桉油精肉桂醛百里香酚及香芹酚的含量

羅成江,周 煒,侯 軒,周芷錦,陳 勇,施杏芬,周志強(qiáng)

(浙江省獸藥飼料監(jiān)察所,浙江 杭州 311199)

香味劑是目前應(yīng)用最為廣泛的調(diào)味劑之一。畜牧養(yǎng)殖中常應(yīng)用于哺乳幼畜補(bǔ)充料、斷奶開食飼料、產(chǎn)奶牛飼料和魚、蝦餌料中,以改善飼料氣味,誘導(dǎo)動(dòng)物采食[1]。桉油精為一種味似樟腦的無(wú)色液體,屬單萜類化合物,主要存在于桉葉、迷迭香、番石榴等植物揮發(fā)油中,具有抗菌、抗炎、殺蟲、鎮(zhèn)痛、促進(jìn)透皮吸收等作用。桉油精可作為皮膚滲透增強(qiáng)劑、鼻血管收縮劑、鎮(zhèn)咳劑、消毒劑、殺蟲劑、芳香劑等應(yīng)用于醫(yī)藥、工業(yè)、香料行業(yè)中[2]。香芹酚和百里香酚對(duì)各種細(xì)菌、病毒以及螨類等微生物有一定的抑制作用,被廣泛應(yīng)用于飼料添加以及一些口腔衛(wèi)生品和洗滌物品,為目前應(yīng)用最為廣泛的重要香料之一[3]。肉桂醛又名桂皮醛,β-苯丙烯醛,3-苯基-2-丙烯醛,具有強(qiáng)烈的肉桂香氣,肉桂醛具有殺菌消毒防腐,抗病毒、抗腫瘤,加強(qiáng)胃腸道運(yùn)動(dòng)等功效,能促進(jìn)和改善動(dòng)物生長(zhǎng)性能,增進(jìn)飼養(yǎng)動(dòng)物食欲,能提高飼料消化利用率以及動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量,同時(shí)飼料中添加肉桂醛能有效防止飼料變質(zhì)腐敗,延長(zhǎng)保質(zhì)期[4]。目前關(guān)于桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚的研究較多[5-7],但尚無(wú)飼料香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚同時(shí)檢測(cè)的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究建立了同時(shí)測(cè)定飼料香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚含量的氣相色譜法,本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠、選擇性好,為香味劑的檢測(cè)提供了技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器 氣相色譜儀配FID檢測(cè)器(安捷倫科技有限公司6890N);電子天平(瑞士METTLER公司,XS205DU,十萬(wàn)分之一)。KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與材料 桉油精對(duì)照品為中國(guó)食品藥品檢定研究院產(chǎn)品,批號(hào)為110788-201506,純度為98.4%;肉桂醛對(duì)照品為 D.E公司產(chǎn)品,批號(hào)為106718,純度為98.9%;百里香酚對(duì)照品為中國(guó)食品藥品檢定研究院產(chǎn)品,批號(hào)為100508-201603,純度為99.9%;香芹酚對(duì)照品為ChromaDex公司產(chǎn)品,批號(hào)為00003230-REG,純度為98.6%;桉油、肉桂醛、百里香酚及香芹酚原料由浙江某公司提供;無(wú)水乙醇為分析純。

1.3 氣相色譜條件 氣相色譜條件：檢測(cè)器：FID;毛細(xì)管色譜柱：DB-WAX(30 m×0.53 mm×1.00 μm);載氣：N2;流速：5.0 mL/min;分流比：10∶1;進(jìn)樣口溫度：250℃;檢測(cè)器溫度：250℃;升溫程序：初溫70℃,以 5℃/min速率升溫至120℃,再以20℃/min速率升溫至220℃,保持5 min;進(jìn)樣量：1 μL。

1.4 溶液的配制

1.4.1 對(duì)照品溶液的配制 分別精密稱取桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚對(duì)照品10 mg于25 mL容量瓶中,用無(wú)水乙醇溶解并定容至刻度,搖勻,即為對(duì)照品溶液。

1.4.2 供試品溶液的配制 準(zhǔn)確稱取1 g樣品置于100 mL容量瓶中,加適量無(wú)水乙醇,超聲助溶20 min,冷卻至室溫,用無(wú)水乙醇定容至刻度,搖勻,濾過,即為供試品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜圖 對(duì)照溶液、添加回收和空白樣品的色譜圖見圖1。由色譜圖可見桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚得到了完全分離,峰形對(duì)稱,無(wú)雜質(zhì)峰干擾。

2.2 線性關(guān)系考察 配制濃度為1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、 20 μg/mL、 100 μg/mL、 400 μg/mL、2000 μg/mL的香芹酚、百里香酚、肉桂醛及桉油精系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,從低濃度到高濃度依次進(jìn)樣,按上述色譜條件分析,以峰面積為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,求得回歸方程,結(jié)果見表1。

2.3 檢測(cè)限 按上述色譜條件,將對(duì)照品溶液逐步稀釋,同時(shí)記錄色譜圖(圖2),以10倍信噪比濃度為定量限,該方法的定量限為100 mg/kg。

圖1 色譜圖

表1 4種藥物的線性結(jié)果

圖2 色譜圖

2.4 回收率和精密度試驗(yàn) 根據(jù)香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚添加達(dá)到一定藥效和市場(chǎng)臨床使用劑量,共添加3個(gè)含量,分別為2%、10%和20%。由于添加量較大,采用原料添加。以發(fā)酵豆粕為空白樣品,準(zhǔn)確稱取1 g發(fā)酵豆粕置于100 mL容量瓶中,添加適量香芹酚、百里香酚、肉桂醛及桉油原料,混合均勻,按上述方法測(cè)定,進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)?；厥章式Y(jié)果見表2,從回收率結(jié)果可以看出桉油精平均回收率為97.6%～98.3%,RSD為0.5% ～0.7%;肉桂醛平均回收率為97.8%～98.7%,RSD為0.4% ～1.0%;百里香酚平均回收率為97.4% ～98.8%,RSD為0.4% ～0.6%;香芹酚平均回收率為97.4%～98.8%,RSD為0.5%～0.8%。說明本方法對(duì)香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚的含量測(cè)定回收率高,精密度好。

表2 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表 (n=5)

2.5 耐用性試驗(yàn) 從色譜柱、柱溫、進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度考察方法的耐用性。分別改變初始柱溫為60℃、70℃、80℃,進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度為230℃、250℃、270℃,色譜峰出峰順序無(wú)變化,保留時(shí)間稍有變化;使用不同型號(hào)的色譜柱,如Agilent DBWAX(30 m ×0.53 mm ×1.00 μm);Agilent DB-624(30 m ×0.53 mm ×3.00 μm)等,結(jié)果表明,桉油、肉桂醛、百里香酚及香芹酚能很好地分離且保留時(shí)間合理。本方法的耐用性較好。

2.6 樣品測(cè)定 取浙江某企業(yè)飼料添加劑(香味劑)(批號(hào)為20170513)1.0 g,置100 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。分別精密量取供試品溶液和桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚混合對(duì)照品溶液(400 μg/mL)1 μL,注入氣相色譜儀,記錄色譜圖,平行測(cè)定3次,計(jì)算平均含量。結(jié)果表明,供試品溶液桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚色譜峰分別與桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚對(duì)照品混合溶液色譜峰保留時(shí)間一致;此批香味劑中桉油、肉桂醛、百里香酚及香芹酚平均含量分別為5.1%、8.2%、8.5%、8.6%,RSD 分別為 0.5%、0.4%、0.3%、0.6%。

3 結(jié)論

由以上結(jié)果可以看出,該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好,適用于香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚的含量測(cè)定。