基因多態(tài)性與卵巢癌患者化療療效及預(yù)后的關(guān)系

王瑛，于娟，陳鵬，張建好

鄭州市第一人民醫(yī)院1婦產(chǎn)科，2檢驗(yàn)科，鄭州 450000

3鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院介入科，鄭州 450000

病程較長(zhǎng)或者臨床分期較晚的卵巢癌患者，其遠(yuǎn)期生存情況較差[1-2]。紫杉醇脂質(zhì)體或紫杉醇注射液等藥物可以通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡、增加腫瘤細(xì)胞的壞死程度等促進(jìn)腫瘤的萎縮，并抑制遠(yuǎn)期轉(zhuǎn)移的發(fā)生?；蛩降母淖兡軌蛲ㄟ^影響藥物代謝的穩(wěn)定性，從而干預(yù)腫瘤細(xì)胞對(duì)于藥物的排泄等，進(jìn)而影響化療效果。Ephrin A型受體4（ephrin typeA receptor 4，EPHA4）基因多態(tài)性能夠通過影響基因表達(dá)蛋白的空間結(jié)構(gòu)、磷酸化修飾水平等，進(jìn)而改變卵巢癌細(xì)胞內(nèi)的紫杉醇等化療藥物的濃度，從而影響紫杉醇對(duì)卵巢癌患者的化療效果[3]。本研究通過探討EPHA4基因多態(tài)性與卵巢癌化療效果及患者預(yù)后的關(guān)系，旨在為卵巢癌的臨床治療提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年2月至2016年2月鄭州市第一人民醫(yī)院收治的146例卵巢癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診；②TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期；③同意接受以紫杉醇為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療方案；④預(yù)計(jì)生存期＞3個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他原發(fā)性腫瘤；②接受過其他化療，且化療結(jié)束時(shí)間＜3個(gè)月；③合并心、肝、腎等重要臟器功能不全?；颊叩哪挲g為45～62歲，平均年齡為（55.43±9.84）歲；產(chǎn)次≥2次者38例，產(chǎn)次為1次者87例，產(chǎn)次為0次者21例；漿液性腺癌89例，子宮內(nèi)膜樣癌57例；病灶直徑為1.00～2.95 cm，平均病灶直徑為（1.84±0.70）cm。全部患者及家屬均對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書，且本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的審核通過。

1.2 基因多態(tài)性的檢測(cè)

采用第二代基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)基因的多態(tài)性。采用30%丙烯酰胺溶液制備PAGE凝膠，將配好的PAGE凝膠溶液沿凹形玻璃平口處緩慢倒入至距平口7 mm處，倒入過程中避免氣泡產(chǎn)生；吸取1 μl的溴酚藍(lán)溶液，根據(jù)聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）產(chǎn)物分子量吸取適量的樣品，調(diào)節(jié)電壓至300 V，電泳90 min（電泳時(shí)間根據(jù)PCR產(chǎn)物分子量進(jìn)行適度調(diào)整）。采用染色劑進(jìn)行染色，提膠，顯影，拍照。Biomek NX自動(dòng)化工作站購自美國貝克曼庫爾特公司。EPHA4引物序列：上游引物為 5′-TTTGGCTCTGACCATTCTGT-3′；下游引物為5′-GTCCTCACCTGAGGGACCCC-3′。

1.3 化療方法

靜脈滴注75 mg/m2的紫杉醇注射液，第1天?；熯^程中持續(xù)性給予水化、補(bǔ)液、保肝、解毒等對(duì)癥治療，并觀察化療的不良反應(yīng)發(fā)生情況。每天保持液體的輸入量在3000 ml以上，維持尿量在1500 ml以上；出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)時(shí)，應(yīng)立即停止化療。21天為1個(gè)療程，總化療周期為6個(gè)療程。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及隨訪

根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[4]對(duì)患者的臨床療效進(jìn)行評(píng)價(jià)：完全緩解（CR），病灶完全消失超過1個(gè)月；部分緩解（PR），腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小達(dá)到50%以上，維持時(shí)間超過1個(gè)月；疾病穩(wěn)定（SD），腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小＜50%，或增大＜25%，維持時(shí)間超過1個(gè)月；疾病進(jìn)展（PD），患者出現(xiàn)新病灶或腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積增大≥25%。其中，治療緩解率=（CR+PR）例數(shù)/總例數(shù)×100%。對(duì)患者的生存情況進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為0～48個(gè)月，隨訪截至2019年2月；隨訪方式為電話隨訪。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。樣本代表性采用Hardy-Weinberg平衡定量檢驗(yàn)。生存曲線采用Kaplam-Meier法繪制，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EPHA 4基因rs17348202位點(diǎn)的基因型分布情況

EPHA4基因rs17348202位點(diǎn)有CC、CT和TT 3種基因型。146例卵巢癌患者中，CC基因型患者20例，CT基因型患者57例，TT基因型患者69例。經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，EPHA4基因rs17348202位點(diǎn)的各基因型分布符合遺傳平衡定律（χ2=2.105，P＞0.05）。

2.2 不同基因型卵巢癌患者臨床特征的比較

不同基因型卵巢癌患者的年齡、腫瘤直徑、病理類型比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

表1 不同基因型卵巢癌患者的臨床特征

2.3 不同基因型卵巢癌患者化療效果的比較

TT基因型患者的化療緩解率為68.12%（47/69），高于CC基因型40.00%（8/20）和CT基因型患者的 43.9%（25/57）（χ2=5.192、7.499，P＜0.05）；CC基因型和CT基因型患者的化療緩解率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.090，P＞0.05）。

2.4 不同基因型卵巢癌患者中位PFS的比較

隨訪截至2019年2月，TT基因型卵巢癌患者無刪失，CC基因型卵巢癌患者刪失7例，CT基因型卵巢癌患者刪失2例。TT基因型患者的中位無進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS）為36.12個(gè)月（95%CI：30.46～43.33），長(zhǎng)于CC基因型和CT基因型的21.98個(gè)月（95%CI：16.74～27.33）和21.59個(gè)月（95%CI：17.31～26.72），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=67.363、42.293，P＜0.05）。

3 討論

卵巢癌的發(fā)生主要考慮與卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞的持續(xù)性病變有關(guān)。卵巢癌本身容易早期發(fā)生淋巴結(jié)或者血行轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者出現(xiàn)盆腔淋巴結(jié)或者腹腔內(nèi)器官的轉(zhuǎn)移，從而增加患者的病死率[5-6]。以紫杉醇為基礎(chǔ)的靜脈化療藥物的應(yīng)用，在中晚期惡性腫瘤或者圍手術(shù)期的新型輔助化療等過程中均發(fā)揮了重要的作用。但是，一項(xiàng)包含了333例樣本量的回顧性研究顯示，在部分人群中，對(duì)紫杉醇化療藥物耐藥的比例仍然超過了15%以上[7]。特別是在既往具有相關(guān)化療病史或者存在潛在轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的人群中，紫杉醇耐藥的發(fā)生情況更為普遍。

紫杉醇化療耐藥的發(fā)生已越來越成為威脅卵巢癌患者遠(yuǎn)期生存預(yù)后的重要因素。紫杉醇耐藥的發(fā)生主要考慮與下列兩個(gè)方面的因素有關(guān)[8-10]：①卵巢癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇藥物的吸收作用下降，從而導(dǎo)致紫杉醇化療效果的不足；②紫杉醇受到卵巢癌患者局部腫瘤微環(huán)境的影響，其有效半衰期可明顯下降，同時(shí)藥物的代謝速度明顯加快，導(dǎo)致藥物的治療效果明顯下降。

EPHA4基因是影響下游腫瘤相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白的重要因素，EPHA4基因的異常表達(dá)能夠影響卵巢癌細(xì)胞膜上ATP泵的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)于紫杉醇藥物的排泄，導(dǎo)致耐藥的發(fā)生；EPHA4基因多態(tài)性的變化能夠在翻譯蛋白修飾或者蛋白羧基末端的磷酸化等過程中，加快紫杉醇化療藥物的分解速度[11-12]。

本研究中，通過對(duì)EPHA4相關(guān)基因多態(tài)性分布情況的分析發(fā)現(xiàn)，CT亞型、TT基因型的分布較多，所占的比例明顯高于CC基因亞型。同時(shí)，EPHA4基因rs17348202位點(diǎn)的基因型分布符合遺傳平衡定律，提示本研究中納入的病例具有明顯的代表性，排除了因資料選擇偏倚而導(dǎo)致的基因多態(tài)性研究結(jié)論的差異。在不同的年齡、病灶直徑、病理類型中，可以發(fā)現(xiàn)EPHA4基因rs17348202位點(diǎn)的基因型多態(tài)性表達(dá)的差異并不明顯，提示一般性的臨床特征并不會(huì)影響基因多態(tài)性的表達(dá)，基因多態(tài)性表達(dá)的差異主要考慮與自身性遺傳因素或者卵巢生發(fā)上皮的細(xì)胞來源等有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，TT基因型患者的化療緩解率為68.12%，高于CC基因型和CT基因型患者（P＜0.05），提示同一位點(diǎn)基因多態(tài)性的變化能夠顯著影響紫杉醇化療效果。從機(jī)制方法看，TT基因型患者化療效果的改善可能與下列幾個(gè)方面的因素有關(guān)：①TT基因型患者腫瘤微環(huán)境的惡化較為明顯，局部卵巢癌組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)或者炎性反應(yīng)較為劇烈，從而導(dǎo)致化療效果不佳；②TT基因型患者紫杉醇的藥物作用時(shí)間較短，同時(shí)，其ATP酶依賴性藥物的外排功能較為亢進(jìn)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物濃度的下降。有研究通過探討不同的基因位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)于卵巢癌化療效果的影響發(fā)現(xiàn)，TT基因亞型的改變能夠在發(fā)揮多種病理和生理性的作用中，促進(jìn)紫杉醇耐藥的發(fā)生[13-14]。

綜上所述，EPHA4基因rs17348202位點(diǎn)的多態(tài)性與卵巢癌紫杉醇化療療效有一定的關(guān)系，其對(duì)預(yù)測(cè)紫杉醇對(duì)卵巢癌的化療效果可能具有一定的參考價(jià)值。