武漢地區(qū)新生兒α-地中海貧血篩查及影響因素分析

周斌 熊乾 蔡文倩 沈姍姍 胡晞江

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢兒童醫(yī)院（武漢市婦幼保健院）（武漢430014）

地中海貧血是我國發(fā)病率較高的單基因遺傳病之一，其中α-地中海貧血是最常見的一種類型［1］，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，廣西、廣東、海南和福建等都是α-地中海貧血高發(fā)地區(qū)［2-3］。新生兒α-地中海貧血篩查敏感指標(biāo)是γ-珠蛋白形成的γ4（Hb Bart′s）的百分含量，其含量變異程度在一定程度可指示其基因類型，Hb Bart′s 含量不僅與攜帶的基因類型相關(guān)，可能還受其他因素影響［4，5］。目前我國中部地區(qū)對(duì)α-地中海貧血報(bào)道較少，其Hb Bart′s 水平對(duì)新生兒α-地中海貧血基因類型預(yù)測(cè)也很少涉及。

1 資料與方法

1.1 一 般資 料 2016年11月1 至2017年10月20日武漢市各助產(chǎn)機(jī)構(gòu)采集的新生兒濾紙干血斑標(biāo)本99 333 例，排除各種不合格標(biāo)本58 例，共收集合格標(biāo)本99 275 例。新生兒濾紙干血斑通過采集新生兒足跟血獲得，血斑直徑＞8 mm。產(chǎn)婦及新生兒人口學(xué)特征見表1。產(chǎn)婦平均年齡29.0 歲，大多數(shù)產(chǎn)婦孕周大于37 周，新生兒男296 例，女250例。Hb Bart′s 平均值為1.49%，Hb Bart′s 含量不成正態(tài)分布，且未找到合適的方法將其轉(zhuǎn)換成正態(tài)分布的變量，所以本研究中的統(tǒng)計(jì)方法均為非參數(shù)檢驗(yàn)。

表1 產(chǎn)婦及新生兒人口學(xué)特征Tab.1 Demographic characteristics of pregnant woman and newborns

1.2 方法

1.2.1 篩查方法 運(yùn)用Sebia 公司Capillarys 2 neonat fast 毛細(xì)管電泳儀系統(tǒng)，檢測(cè)新生兒濾紙干血斑中血紅蛋白A（Hb A）、抗堿血紅蛋白（Hb F）、血紅蛋白A2（Hb A2），γ 四聚體（Hb Bart′s）及其他常見的血紅蛋白變異體，Hb Bart′s 含量大于0 或Hb Bart′s 出峰區(qū)域檢出血紅蛋白即判斷為篩查陽性。

1.2.2 確診方法 采用LUMINEX MAGPIX 液相芯片懸浮技術(shù)，檢測(cè)中國人常見的3 種α 珠蛋白基因缺失突變［--（--SEA）、-α（3.7）、-α（4.2）］，3 種α 珠蛋白基因點(diǎn)突變（CS142、QS125、WS122）；一種或多種基因突變同時(shí)發(fā)生的新生兒即可確診為基因突變攜帶者或患者。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用描述性統(tǒng)計(jì)方法對(duì)研究對(duì)象的人口學(xué)特征，Hb Bart′s 水平分布特征進(jìn)行分析。采用非參數(shù)檢驗(yàn)來分析單個(gè)因素對(duì)Hb Bart′s 含量的影響。

2 結(jié)果

2.1 α-地貧篩查和基因檢測(cè)結(jié)果 在99 275 例新生兒濾紙干血斑標(biāo)本中，篩出含Hb Bart′s 新生兒1 263 例，篩查陽性率為1.27%，在篩查陽性新生兒中Hb Bart′s 含量最大值為14.5%，最小值為0.1%，均數(shù)1.4%；篩查陽性者召回1 233 例，召回率97.6%，召回新生兒中有671 例（男375 例，女296例）與新生兒疾病篩查系統(tǒng)進(jìn)行了全面信息匹配，使其基因檢測(cè)結(jié)果與新生兒篩查結(jié)果對(duì)應(yīng)，其余新生兒因家屬未提供產(chǎn)婦個(gè)人信息未能匹配新生兒篩查結(jié)果。671 例經(jīng)α-地中海貧血相關(guān)基因檢測(cè)，共檢出546 例新生兒有α-地中海貧血基因突變，其Hb Bart′s 含量最小值0.1%，最大值11.6%，男296 例，女250 例，α-地貧篩查陽性預(yù)測(cè)值為81.4%。隨機(jī)抽取100 例篩查陰性的標(biāo)本，經(jīng)α-地中海貧血相關(guān)基因檢測(cè)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)1 例-α3.7/αα，假陰性率1%。

在546 例α-地中海貧血基因突變新生兒中，檢出14種基因型，其中--SEA/αα，299 例，占54.8%；-α3.7/αα，150 例，占27.5%；-α4.2/αα，24 例，占4.4%；ααCS142/αα，18 例，占3.3%；ααQS125/αα，16 例，占2.9%；-α3.7/-α3.7，4 例，占0.7%；ααWS122/αα1 例，占0.2%；--SEA/-α3.7，2 例，占0.4%；其他基因型26 例，主要是α 復(fù)合β 地中海貧血，占4.8%；由此可知武漢地區(qū)新生兒α-地中海貧血基因突變主要以--SEA/αα和-α3.7/αα為主。

2.2 Hb Bart′s 含量的陽性預(yù)測(cè)值 召回的671例初篩陽性標(biāo)本中，有125 例經(jīng)基因檢測(cè)后無α-地中海貧血常見的6 種突變。按Hb Bart′s 含量分為4 組，0.1% ～0.5%組，0.6% ～1%組，1.1% ～2%組，≥2.1%組。其Hb Bart′s 含量在0.1～0.5%之間的新生兒未檢出6 種α-地中海貧血常見基因突變者96 例，檢出基因突變者230 例，陽性預(yù)測(cè)值71%；0.6% ～1.0%之間未檢出基因突變者10 例，檢出基因突變者45 例，陽性預(yù)測(cè)值為78%；1.1% ～2%之間檢出基因突變者89 例，未檢出基因突變者8 例，陽性預(yù)測(cè)值91.8%；≥2.1%以上的檢出基因突變者192例，未檢出基因突變者11例，陽性預(yù)測(cè)值94.6%；經(jīng)卡方檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同含量Hb Bart′s 組間在陽性預(yù)測(cè)值中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示Hb Bart′s 含量越高陽性預(yù)測(cè)值越高。見表2。

2.3 Hb Bart′s 含量的影響因素分析

2.3.1 基因類型對(duì)新生兒Hb Bart′s 含量的影響 在檢出的α-地中海貧血患兒中，不區(qū)分產(chǎn)婦年齡，孕周和新生兒性別時(shí)，比較不同基因突變類型新生兒檢出的Hb Bart′s 含量是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，由于ααWS122/αα，-α3.7/-α3.7，--SEA/-α3.7基因突變類型的例數(shù)較少，所以分析過程中僅包含--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα，和ααQS125/αα 這5種基因型。--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα，ααQS125/αα這5 種基因型對(duì)應(yīng)的Hb Bart′s 含量分別為2.50±0.97%，0.36±0.1%，0.36±0.18%，0.82±0.29%，0.45±0.22%，經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)，認(rèn)為不同基因突變型α-地中海貧血的新生兒Hb Bart′s 含量不同。見表3。

表2 Hb Bart′s 含量的分布Tab.2 Distribution of Hb Bart′s例（%）

表3 不同基因型地中海貧血患者Hb Bart′s（%）含量分析Tab.3 Analysis of Hb Bart′s(%)for thalassemia

2.3.2 新生兒性別、孕周對(duì)Hb Bart′s 含量的影響 在檢出的α-地中海貧血患兒中，男296 例，女250 例，檢出Hb Bart′s 含量的均值分別為1.55%和1.42%。經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)男性和女性新生兒α-地中海貧血患兒Hb Bart′s 含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在檢出的α-地中海貧血患兒中，根據(jù)孕周分為早產(chǎn)兒（孕周＜37 周）和正常孕周（孕周≥37周）組兩組，檢出Hb Bart′s 含量的均值分別為1.68%和1.61%。經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)早產(chǎn)兒和正常孕周新生兒Hb Bart′s 百分含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

3 討論

地中海貧血（thalassemia），又稱海洋性貧血和珠蛋白合成障礙性貧血，簡(jiǎn)稱地貧。它是一種單基因隱性遺傳病，也是全球分布最廣，累計(jì)人群最多的一種單基因病之一。地中海貧血有α、β、γ、δ四種類型，前兩種最常見，其診斷主要依靠基因檢測(cè)和血紅蛋白鑒定，目前毛細(xì)管血紅蛋白電泳是血紅蛋白成分分類主要手段之一［6-8］。

本研究是將新生兒濾紙干血斑全血進(jìn)行血紅蛋白毛細(xì)管電泳來篩查地中海貧血，研究結(jié)果顯示：99 275 例新生兒干血斑標(biāo)本中，檢出Hb Bart′s新生兒1 263 例，篩查陽性率為1.27%，召回1 233例，其中671 例能匹配地中海貧血篩查結(jié)果，此部分初篩陽性新生兒共檢出546 例α-地中海貧血基因突變新生兒，基因突變率81.3%，比廣東省臺(tái)山梁逸敏等［9］報(bào)道的通過毛細(xì)管電泳儀篩查陽性率87.80%的基因突變率略低，這是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)室考慮到湖北武漢地區(qū)重型和中間型α-地中海貧血基因突變患兒可能比廣東等高發(fā)區(qū)占比少，而輕型和靜止型占比相對(duì)較多，因此，在制定判讀標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，將Hb Bart′s 含量大于0 或Hb Bart′s 出峰區(qū)域檢出血紅蛋白均以α-地中海貧血初篩陽性結(jié)果報(bào)告，所以初篩陽性的標(biāo)本中可能包含部分異常血紅蛋白病患兒。另外81.3%的篩查符合率比部分使用HPLC 技術(shù)檢測(cè)α-地中海貧血的符合率要高［10］，說明毛細(xì)管電泳篩查新生兒α-地中海貧血效果好。武漢地區(qū)主要檢出--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα 和ααQS125/αα 五種基 因 突變型，分別 占54.8%，27.5%，4.4%，3.3%，2.9%。與貴州，云南，廣東，廣西等地區(qū)α-地中海貧血分布有少許差異［11-14］，本次未檢出中間型α-地中海貧血患兒可能是收集標(biāo)本例數(shù)較少而中間型α-地中海貧血患兒患兒發(fā)病率較低。

對(duì)671 例初篩陽性標(biāo)本的Hb Bart′s 分組，經(jīng)卡方檢驗(yàn)認(rèn)為不同含量Hb Bart′s 組間在陽性預(yù)測(cè)值中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Hb Bart′s 含量越高陽性預(yù)測(cè)值越高。這可能是因?yàn)樾律鷥害?地中海貧血初篩是通過濾紙干血片溶脫全血后再進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)前濾紙干血片已放置了3 ～10 d，溶脫的血紅蛋白標(biāo)本在保存過程中很可能發(fā)生不同降解，小的降解碎片可能導(dǎo)致基線不平，若發(fā)生在Hb Bart′s 出峰區(qū)域就容易被毛細(xì)血管電泳儀系統(tǒng)判續(xù)為Hb Bart′s，即少量降解片段通常導(dǎo)致較低百分含量假性Hb Bart′s，且不容易與真正Hb Bart′s 峰型相區(qū)別，導(dǎo)致假陽性發(fā)生。因此當(dāng)Hb Bart′s 含量越高其陽性預(yù)測(cè)值越高［15］。

由表3可見，不同基因突變型地中海貧血新生兒Hb Bart′s 含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明Hb Bart′s 含量隨著基因突變型不同發(fā)生變化。其中Hb Bart′s含量水平由高至低依次為三個(gè)α 基因缺陷的--SEA/-α3.7型，兩個(gè)α 基因缺失的--SEA/αα 基因型、一個(gè)α 基因突變的ααCS142/αα 和ααQS125/αα 基因型，一個(gè)α 基因缺失的-α4.2/αα 和-α3.7/αα，所以可根據(jù)Hb Bart′s 含量大致預(yù)測(cè)基因缺陷程度。檢測(cè)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)-α3.7/-α3.7基因突變型Hb Bart′s 含量變化跨度大，4 例-α3.7/-α3.7基因突變的新生兒，其含量分別為1.2%，11.2%，2.6%，1.7%，提示-α3.7/-α3.7基因突變型可能存在較大個(gè)體差異，還需要更多的數(shù)據(jù)和跟蹤觀察。在檢出的α-地中海貧血患兒中，根據(jù)孕周和性別分組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明孕周和性別對(duì)Hb Bart′s 含量沒有影響。

因此，通過新生兒Hb Bart′s 含量分析篩查α-地中海貧血具有簡(jiǎn)單、高效、準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，并且能實(shí)現(xiàn)早期初步判斷基因突變類型，值得廣泛推廣，孕周和性別不影響Hb Bart′s 含量，其主要受基因突變類型影響。