高效液相色譜法測定天力通片中天麻素含量

王 欣 ，李 兵 ，唐 坤,

（1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.北京昌威科技有限公司，北京 100085）

天力通片是由天麻、人參等多味名貴藥材制成的保健食品，具有緩解疲勞功能，主要適宜于易疲勞者。天麻為天力通片的主要原料，研究表明天麻中所含的天麻素是緩解疲勞的活性成分[1-2]。本實驗建立了高效液相色譜法測定天力通片中活性成分天麻素含量的方法，并進行了方法學(xué)研究，為同類產(chǎn)品中天麻素的含量測定提供參考。

1 儀器與試藥

Waters 2690液相色譜儀（996 PDA檢測器，美國沃特世公司），賽多利斯SQP型十萬分之一電子天平（德國Sartorius），ELGA/超純水器（美國PURELAB Classic），KQ-700DE數(shù)控超聲波清洗器型號（昆山市超聲儀器公司）。

天麻素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110807-201608，含量：97.6 %）；乙腈（色譜純） ；磷酸（優(yōu)級純）；天力通片（批號：20170501，20170502，20170503，由北京昌威科技有限公司提供）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Waters Symmetry C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99），流動相臨用前以微孔濾膜過濾并經(jīng)超聲脫氣處理；流速：1.0 ml/min；檢測波長：220 nm；柱溫：25 ℃；進樣體積：10 μl。

系統(tǒng)適用性試驗：理論塔板數(shù)（以天麻素對照品溶液峰計算）不低于5000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取天麻素對照品10 mg，加流動相溶解并稀釋至20 ml，搖勻，制得每1 ml含天麻素0.5 mg對照品儲備液。精密量取儲備液1 ml，置入10 ml量瓶，加流動相稀釋至刻度，制得每1 ml含天麻素50 μg對照品溶液。

圖1 天麻素測定專屬性試驗HPLC圖譜

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品研成細(xì)粉（過三號篩），精密稱取過篩細(xì)粉2.00 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50 %稀乙醇50 ml，稱定重量，超聲處理（功率120 W，頻率40 kHz）30 min，放至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，濃縮至近干，加乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）混合溶液溶解，全部轉(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，用乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性 參照天力通片的配方和工藝，制備不含天麻的陰性樣品，按2.2.2項下的方法制成陰性樣品溶液。分別取對照品溶液、樣品溶液和陰性樣品溶液按2.1色譜條件分別進樣測定，結(jié)果見圖1。結(jié)果表明，樣品中其他成分對測定沒有干擾，方法具有較強的專屬性。

2.3.2 穩(wěn)定性 取同一供試品溶液，在0，2，4，6，8，10，12 h，按2.1項色譜條件進樣10 μl，測得天麻素峰面積RSD為0.56 %（n=7），結(jié)果表明，樣品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.3 線性 分別精密量取2.2.1項下天麻素對照品溶液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μl進樣，按2.1項下色譜條件，測定峰面積。以天麻素進樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程Y=569 027X-9382.1（r=0.9993），表明天麻素進樣量在0.1～0.6 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.4 精密度 取2.2.1項下濃度為50 μg/ml天麻素對照品溶液，在2.1項下色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積。連續(xù)6次進樣的峰面積RSD值為0.43 %。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性 取供試品，按2.2.2項下方法平行制備6份供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定。結(jié)果，樣品中天麻素平均含量為7.08 mg/g，RSD值為2.37 %（n=6），表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.6 檢測限和定量限 將2.2.1項下天麻素對照品溶液，按不同比列進行稀釋，進樣量10 μl，當(dāng)信噪比（S/N）為3:1時，天麻素對照品溶液濃度為0.25 μg/ml，檢測限為2.50 ng；當(dāng)信噪比（S/N）為10:1時，天麻素對照品溶液濃度為0.42 μg/ml，定量限為4.20 ng。

2.3.7 回收率 取已知天麻素含量（7.00 mg/g）的樣品6份，每份1.00 g，精密稱定，置錐形瓶中，分別加入對照品適量，按2.2.2項下供試品溶液的制備方法處理，進樣量10 μl，測定天麻素的回收率。結(jié)果經(jīng)加樣回收率試驗測定，樣品中天麻素的回收率范圍為96.39 %～100.40 %，平均值為98.70 %，RSD為1.36 %（表 1），結(jié)果回收率良好。

表1 天麻素加樣回收實驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品測定

按上述色譜條件，檢測3批天力通片樣品中天麻素的含量，結(jié)果3批樣品天麻素含量的平均值是6.92 mg/g，RSD值為0.928 %（表2）。結(jié)果表明，本產(chǎn)品天麻素的測定方法適用、可控、穩(wěn)定。

表2 3批樣品中天麻素的含量測定結(jié)果

3 討論

天麻為天力通片配方中主要原料，天麻素（gastrodin，對羥基苯甲醇-β-D-吡喃葡萄糖苷）是天麻的主要化學(xué)成分，也是天麻活性成分中含量最高的單體成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，天麻素能增強小鼠抗疲勞能力[3-4]，2015年版《中國藥典》將天麻素作為天麻質(zhì)量控制的主要功效成分指標(biāo)[5]，因此本文選擇天麻素作為天力通片的主要標(biāo)志性成分。

色譜條件的流動相參考2015年版《中國藥典》中天麻素含量測定所使用的流動相，但2015年版《中國藥典》所使用的流動相為乙腈-0.05 %磷酸溶液（3:97），對本產(chǎn)品中天麻素峰和相鄰色譜峰之間的分離效果不太理想。根據(jù)文獻報道，天麻素含量測定的流動相有：乙腈-0.03 %磷酸溶液（1:99)[6]、乙腈-0.05 %磷酸溶液（3:97）[5]、乙腈-0.05 %磷酸溶液（2:98）[7]，經(jīng)本實驗摸索比較后得出乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）時，峰形好，基線穩(wěn)定，分離效果最佳。因此以乙腈-0.05 %磷酸溶液（1:99）作為天力通片測定天麻素的最佳流動相。

方法學(xué)考察結(jié)果表明， 本實驗建立的HPLC法可準(zhǔn)確測出天力通片中天麻素的含量，此方法操作簡便、重現(xiàn)性好、專屬性強，因此可作為天力通片及其同類產(chǎn)品中天麻素含量測定方法學(xué)研究提供參考。