新疆紫草中總萘醌提取方法的比較

楊東方

（山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西太原030031）

紫草（Arnebia euchroma）為我國(guó)傳統(tǒng)常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，列為中品，多用于濕疹、水火燙傷、麻疹不透等癥[2]。臨床上常用于治療皮膚病、慢性腎炎、燒燙傷、靜脈炎等[3]?！吨袊?guó)藥典》2015 年版規(guī)定，紫草為新疆紫草（Arnebia euchroma（Royle）Johnst）或內(nèi)蒙紫草（Arnebia. guttata Bunge）的干燥根[4]，其中，以新疆紫草質(zhì)量較優(yōu)[5]。研究表明，新疆紫草含有多種活性成分，主要包括萘醌類、生物堿、黃酮類、有機(jī)酸及多糖等[6-11]；具有廣泛的抗病毒作用、抗氧化活性、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤活性[12-14]；以紫草素為代表的萘醌類成分為其主要活性成分[15]。

目前，紫草中總萘醌類成分的提取方法有超臨界CO2萃取法、超聲提取法、溶劑浸提法、減壓蒸餾法等。但是各種方法之間的提取效率、有效成分的穩(wěn)定性等方面存在差異。

為了篩選新疆紫草中總萘醌類化合物較為理想的提取方法，本研究對(duì)回流提取法、滲漉提取法、超聲提取法進(jìn)行了比較研究。

1 材料和方法

1.1 儀器

UV-1800 紫外- 可見(jiàn)分光光度儀（日本島津公司），AY120 電子分析天平（日本島津公司），HH-S4數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療器械廠），KQ-5200DE型超聲波清洗器（昆山舒美超聲儀器有限公司）；電熱恒溫干燥箱、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、恒溫水浴鍋（上海百典儀器有限公司）。

1.2 試劑與藥品

供試新疆紫草購(gòu)自山西省藥材公司，并經(jīng)鑒定為Arnebia euchroma（Royel）Johnst。左旋紫草素對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，其余所用試劑均為分析純。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 新疆紫草粗粉制備 取新疆紫草藥材于60 ℃烘箱中干燥至恒質(zhì)量，粉碎后，過(guò)篩（2 mm）備用。

1.3.2 提取方法

1.3.2.1 回流提取法 稱取粗粉50.00 g，60 ℃分別加8 倍和6 倍95%乙醇回流2 次，時(shí)間分別為2，1 h，合并提取液，回收乙醇至浸膏狀，冷凍干燥，得干膏備用。

1.3.2.2 滲漉提取法 稱取粗粉50.00 g，加8 倍量95%乙醇浸泡過(guò)夜，以1 mL/min 流速進(jìn)行滲漉，回收乙醇至浸膏狀，冷凍干燥，得干膏，備用。

1.3.2.3 超聲提取法 稱取粗粉50.00 g，分別加8 倍和6 倍95%乙醇超聲2 次，每次30 min，合并提取液，回收乙醇至浸膏狀，冷凍干燥，得干膏備用。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密稱取左旋紫草素對(duì)照品2.5 mg，置于50 mL 容量瓶中，無(wú)水乙醇溶解定容，即得質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL 的對(duì)照品溶液。

分別精密量取對(duì)照品液1，2，3，4，5 mL 置于10 mL 容量瓶中，無(wú)水乙醇定容。采用紫外- 可見(jiàn)分光光度法，在516 nm 處測(cè)定吸光度。

1.3.4 樣品含量的測(cè)定 精密稱量不同提取方法獲得的干膏0.05 g，置50 mL 容量瓶中，無(wú)水乙醇定容，溶解過(guò)濾。量取濾液5 mL，置25 mL 容量瓶中，無(wú)水乙醇定容，搖勻，即得樣品供試液。精密吸取上述樣品供試液1 mL，在線性關(guān)系下測(cè)定吸光度，并計(jì)算出樣品中總萘醌的含量。

1.3.5 精密度試驗(yàn) 選擇總萘醌類得率最高的方法，同時(shí)制取5 份樣品溶液，連續(xù)測(cè)定其吸光度，計(jì)算RSD，考量其精密度。

1.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 選擇總萘醌類得率最高的方法，精密量取樣品溶液1 mL，每隔30 min 重復(fù)測(cè)定總萘醌含量，連續(xù)5 h，計(jì)算RSD，考察其不同時(shí)間點(diǎn)的穩(wěn)定性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，左旋紫草素對(duì)照品（C）質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A＝25.092 4C－0.004 1，r＝0.999 6，在5～25 mg/L 質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，二者的線性關(guān)系良好。

2.2 不同提取方法總浸膏得率及總萘醌含量比較

由表1 可知，在3 種方法中，總萘醌含量從大到小依次為超聲提取法、回流提取法、滲漉提取法。

表1 不同提取方法總浸膏得率及總萘醌含量測(cè)定結(jié)果%

2.3 精密度試驗(yàn)分析

采用超聲提取法提取5 份樣品溶液，以吸光度計(jì)算，RSD 為2.61%，說(shuō)明精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)分析

采用超聲提取法，每隔30 min 連續(xù)5 h 重復(fù)測(cè)定總萘醌含量，其RSD 為1.86%，說(shuō)明提取液在5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3 結(jié)論與討論

紫草中總萘醌類成分脂溶性強(qiáng)，易溶于石油醚、氯仿等有機(jī)溶劑，可溶于乙醇，微溶于水[16]。在測(cè)試過(guò)程發(fā)現(xiàn)，回流提取法在提取過(guò)程中，有效成分損失較大。這與萘醌類成分不穩(wěn)定，對(duì)光、熱等敏感，其穩(wěn)定性受溫度影響較大有關(guān)[17]。

滲漉提取法的總浸膏得率最高，超聲提取法的總萘醌含量最高。采用滲漉提取法，雖然總萘醌類成分不是最高，但總浸膏得率較高。綜合比較，滲漉法作為紫草中總萘醌類成分初始提取方法，可以有效節(jié)約能源，且具有設(shè)備要求低、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，較適用于工業(yè)化量產(chǎn)。

相對(duì)于傳統(tǒng)的提取方法，超聲提取法獲得的總萘醌類成分含量最高，研究表明，超聲波法無(wú)需加熱、加壓，可以縮短提取時(shí)間，降低成本，提高生產(chǎn)效率，但對(duì)設(shè)備要求較高[18]。目前，雖然滲漉提取法在工業(yè)化中使用較為普遍，但由于超聲提取法在減少有機(jī)溶劑使用、降低環(huán)境污染等方面的優(yōu)勢(shì)，決定其在未來(lái)工業(yè)化方面具有廣闊的應(yīng)用前景。因此，超聲法提取紫草有效成分的工藝條件值得進(jìn)一步研究。