腎移植供受者KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因配型情況及其對移植效果的影響

周敏捷，王靜，鐘超

(南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣州510515)

人類白細(xì)胞抗原(HLA)作為人體組織細(xì)胞的遺傳標(biāo)志，在抗原識別、遞呈、免疫應(yīng)答與調(diào)控、破壞外來抗原靶細(xì)胞等方面發(fā)揮重要作用。腎臟移植術(shù)前供受者HLA配型已是腎移植術(shù)前必要檢測項(xiàng)目，良好的HLA配型對腎移植受者長期存活有重要意義。除此之外，是否還有其他的一些配型因素影響腎移植受者長期存活呢？研究發(fā)現(xiàn)，人類自然殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIR)與自身免疫性疾病、病毒感染及移植等有重要的關(guān)系。在臨床上，KIR基因的類型和數(shù)目會(huì)直接影響多種自身免疫性疾病的發(fā)展、HIV等病毒感染、造血干細(xì)胞移植、骨髓移植、實(shí)體器官移植的存活[1～6]。隨著研究的進(jìn)展，KIR與腎移植的關(guān)系已成為移植領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。在歐美國家，骨髓移植中均已將KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因列為組織配型中的一個(gè)獨(dú)立分析參數(shù)[7]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因錯(cuò)配對術(shù)后發(fā)生急性排斥反應(yīng)(AR)受者的移植腎功能恢復(fù)有益[8]。我們繼續(xù)對之前的腎移植受者進(jìn)行長期跟蹤隨訪，以了解KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因錯(cuò)配對移植腎受者長期存活的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2007年1月～2012年6月在我院接受腎移植手術(shù)，出院時(shí)移植腎功能已恢復(fù)正常的受者223例。受者中男156例、女67例，平均年齡41.1歲；原發(fā)病為慢性腎小球腎炎168例，先天性多囊腎29例，糖尿病腎病21例，不詳5例。223例受者移植前均接受規(guī)律血液透析2個(gè)月以上，移植前血肌酐(Scr)平均為1 028 μmol/L。受者的ABO血型與供者相容，術(shù)前淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)為陰性，術(shù)后基礎(chǔ)免疫抑制方案均為他克莫司、嗎替麥考酚酯、潑尼松三聯(lián)抗排斥治療。

1.2 腎移植供受者KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因配型情況判斷方法 采用序列特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng)方法(PCR-SSP) 檢測KIR基因型，并計(jì)算基因頻率和基因表現(xiàn)型頻率。①KIR基因：參考官方網(wǎng)站http://www.Ebi.ac.uk/ipd/kir/genes.html，根據(jù)胞外決定簇?cái)?shù)目、胞質(zhì)區(qū)長短和免疫受體酪氨酸抑制基序命名KIR基因，分為KIR家族抑制型基因(KIR-L)和KIR家族活化型基因(KIR-S)。KIR-L包括KIR2DLl、2DL2、 2DL3、2DIA、2DL5、3DL1、3DL2和3DL3，KIRS包括KIR2DS1、2DS2、2DS3、2DS4、2DS5和3DS1。②KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因[9，10]：KIR配體HLA-Bw4I80相關(guān)基因的共同特點(diǎn)是第80位氨基酸殘基均為異亮氨酸(Ile)，編碼此類蛋白的基因包括A9、A23、A24、A25、A32；B5、B13、B17、B27、B37、B38、B44、B47、B49、B51、B52、B53、B57、B58、B59、B63、B77；B7、B8、B14、B22、B35、B39、B40、B41、B42、B45、B46、B48、B50、B54、B55、B56、B60、B61、B62、B64、B65、B67、B70、B71、B72、B73、B75、B76、B78，共51個(gè)血清學(xué)分型。供受者間KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因相同歸為相合，有錯(cuò)配歸為錯(cuò)配。

1.3 腎移植近遠(yuǎn)期效果觀察方法 術(shù)后對腎移植受者隨訪5年，定期復(fù)查Scr，選取術(shù)后1年及5年兩個(gè)節(jié)點(diǎn)進(jìn)行觀察。隨訪內(nèi)容包括：①早期腎功能恢復(fù)情況：包括移植腎AR及功能延遲恢復(fù)(DGF)發(fā)生例數(shù)。AR判斷標(biāo)準(zhǔn)：患者臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、血壓升高、尿量減少、移植腎區(qū)脹痛、體質(zhì)量增加、尿蛋白和Scr升高；彩色多普勒超聲檢查顯示腎血管阻力指數(shù)升高；移植腎組織活檢病理符合AR病理表現(xiàn)。DGF判斷標(biāo)準(zhǔn)：腎移植術(shù)后7 d內(nèi)Scr未恢復(fù)正常并行血液透析治療。②1年移植腎功能情況：分為移植腎功能正常(Scr<133 μmol/L)、移植腎功能下降(Scr>133 μmol/L)和移植腎功能喪失(Scr>707 μmol/L)3種，移植腎功能正常、下降均為移植腎存活。③5年移植腎功能情況：判斷標(biāo)準(zhǔn)同1年移植腎功能情況。

2 結(jié)果

2.1 腎移植供受者KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因配型結(jié)果 223對供受者中，KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因配型相合55對(24.67%)、錯(cuò)配168對(75.33%)，錯(cuò)配是相合的3倍。

2.2 KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因錯(cuò)配對腎移植效果的影響 223例納入研究的受者，除3例死亡外，均隨訪滿5年。

2.2.1 近期效果 KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因配型相合的腎移植受者術(shù)后AR發(fā)生率16.36%(9/55)、DGF發(fā)生率0，錯(cuò)配的腎移植受者術(shù)后AR發(fā)生率21.43%(36/168)、DGF發(fā)生率9.52%(16/168)，錯(cuò)配者腎移植受者術(shù)后DGF發(fā)生率高于相合者(P<0.05)。

2.2.2 遠(yuǎn)期效果 KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因配型相合的腎移植受者術(shù)后1年移植腎存活率100%、5年移植腎存活率96.36%、5年受者存活率98.18%(1/55)，錯(cuò)配者中1年移植腎存活率99.40%、5年移植腎存活率91.07%、5年受者存活率98.81%(2/168)，錯(cuò)配者腎移植受者術(shù)后5年移植腎存活率低于相合者(P<0.05)。見表1。

表1 KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因不同配型情況腎移植受者術(shù)后1、5年腎功能情況比較(例)

注：與KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因錯(cuò)配腎移植受者比較，*P<0.05。

3 討論

腎移植術(shù)后急慢性排斥反應(yīng)發(fā)生率非常高，發(fā)生機(jī)制不明確，是影響移植腎存活率的重要因素。因此，腎移植術(shù)前供受者移植配型選擇是一關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前，臨床腎移植術(shù)前配型主要以HLA相容程度作為金標(biāo)準(zhǔn)。HLA是目前已知的具有最復(fù)雜多態(tài)性的人類基因系統(tǒng)，移植腎的存活率很大程度上取決于供受者之間HLA配型相合程度的高低。

但是，近年來隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床研究的不斷進(jìn)展，NK細(xì)胞已逐漸被認(rèn)為是繼T淋巴細(xì)胞之后與移植物排斥反應(yīng)關(guān)系最密切的細(xì)胞，其活性依賴于HLA通過與KIR結(jié)合后釋放的活化或抑制信號。KIR主要表達(dá)于NK細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞表面，而NK細(xì)胞主要分布于外周血、淋巴結(jié)和骨髓中。NK細(xì)胞受體根據(jù)結(jié)構(gòu)的不同分為2類，第1類是免疫球蛋白超家族，第2類是C2型凝集素樣家族，其中前者包括KIR和白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體。KIR基因簇位于染色體19q.13.4區(qū)域，共有16個(gè)KIR基因座。KIR有兩種類型，即抑制型和活化型。3DS1、2DS1～5編碼活化型受體，而3DL1-3、2DL1～3、2DL5編碼抑制型受體，2DL4既編碼抑制型受體又可編碼活化型受體，還有假基因2DP1和3DP1不編碼蛋白[11]。在人體內(nèi)，HLA作為KIR的配體，KIR與靶細(xì)胞表面MHC-Ⅰ類分子的配體就好比是螺絲與螺母的關(guān)系，結(jié)合后抑制或活化免疫細(xì)胞毒活性，在控制免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮非常重要的作用[12]。近年來，人們逐漸認(rèn)識到KIR基因與移植排斥及移植腎功能密切相關(guān)[13]，如KIR配體不合與移植死亡率增加相關(guān)，尤其是抑制型KIR分子與相應(yīng)HLA-Ⅰ配體錯(cuò)配影響移植腎的存活率。

我們在前期研究中曾報(bào)道，腎移植供受者之間KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因錯(cuò)配概率達(dá)76.09%，雖然KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因錯(cuò)配不會(huì)增加腎移植術(shù)后AR的發(fā)生概率，但可以幫助發(fā)生AR的受者順利逆轉(zhuǎn)AR。因此，當(dāng)時(shí)我們提出在腎移植供受者之間并不需要所有的基因都相合，在供受者之間某些基因是需要錯(cuò)配的，只有這些特定位點(diǎn)的基因錯(cuò)配才會(huì)對移植后的恢復(fù)及人腎長期存活有益[8]。但是，本次研究我們發(fā)現(xiàn)錯(cuò)配組的DGF發(fā)生率達(dá)到9.52%，而相合組的DGF發(fā)生率為0，提示KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因錯(cuò)配會(huì)增加腎移植術(shù)后DGF發(fā)生率。經(jīng)過對當(dāng)時(shí)納入研究的受者進(jìn)行長期跟蹤隨訪后，我們發(fā)現(xiàn)錯(cuò)配組與相合組的1年移植腎存活率相近，但5年移植腎存活率兩組發(fā)生較大差異，相合組5年移植腎存活率為96.36%，高于錯(cuò)配組的91.07%，二者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。我們相信隨著時(shí)間的推移，這種差異會(huì)越來越大。

在移植腎長期存活的研究中，KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因配型與移植腎長期存活的關(guān)系國內(nèi)研究較少。通過本研究的結(jié)果表明，KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因錯(cuò)配會(huì)增加腎移植術(shù)后DGF發(fā)生概率，同時(shí)顯著影響腎移植受者的長期存活率；隨著長期的術(shù)后隨訪會(huì)發(fā)現(xiàn)，這種趨勢將更加明顯。因此，我們建議今后在腎移植術(shù)前配型中可適當(dāng)參考KIR配體HLA-Bw4 I80相關(guān)基因配型情況選擇供體，從而減少術(shù)后并發(fā)癥，并顯著提高腎移植術(shù)后長期存活率。