吳南村 張群 劉春華 馬晨 吳學(xué)進(jìn)

摘要：建立了QuEChERS凈化結(jié)合氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定諾麗酵素原液中12種農(nóng)藥殘留的方法。樣品采用乙腈溶液提取，提取液中加入無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉脫水和緩沖，振蕩分層后吸取上層清液，再經(jīng)PSA凈化離心后上機(jī)。結(jié)果表明，50 mg PSA能夠滿足方法的凈化要求，12種農(nóng)藥均采用外標(biāo)法定量，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.005～0.960 mg/L線性良好;在0.012、0.080、0.400 mg/kg 3個(gè)添加水平下回收率為84.2%～113.0%，RSD均小于15%，大部分農(nóng)藥定量限為0.012 mg/kg。該方法前處理簡(jiǎn)單快速，準(zhǔn)確度和精密度符合檢測(cè)要求，可滿足諾麗酵素原液中的乙烯菌核利、腐霉利、聯(lián)苯菊酯等12種農(nóng)藥殘留的同時(shí)檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：諾麗酵素原液;農(nóng)藥;QuEChERS;氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

中圖分類號(hào)：O657.7+1? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）01-0096-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.01.023? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Simultaneous Determination of Fermentation Broth of Morinda Citrifolia using QuEChERS-Gas Chromatography-tandem Mass Spectrometry

WU Nan-cun1，2，ZHANG Qun1，2，LIU Chun-hua1，2，MA Chen1，2，WU Xue-jin1，2

（1. Analysis and Testing Center，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Haikou 571101，China;

2.Hainan Key Laboratory for Quality and Safety of Tropical Fruits and Vegetables，Haikou 571101，China）

Abstract： A method has been developed for the simultaneous determination of 12 pesticides residues in fermentation broth of Morinda citrifolia using QuEChERS-gas chromatography-tandem mass spectrometry. The residue of 12 pesticides were extracted from samples by acetonitrile，then the extracting solution was cleaned up with PSA. Finally，the pesticides was analysed by gas chromatography-mass spectrometry under MRM mode via electrospray ionization.All pesticides were quantified by external standard method. The matrix calibration curves of the pesticides were linear in the range of 0.005～0.960 mg/L. The average recoveries of target compounds at three spiked concentration levels of 0.012，0.08，0.40 mg/kg were in the range of 84.2%～113.0%， RSD were less than 15%， the limit of quantification of most pesticides were 0.012 mg/kg. The results demonstrated the method is simple， fast aaccurated and can be used for analysis of the multiclass of pesticide residues in fermentation broth of morinda citrifolia.

Key words： Morinda citrifolia; pesticides; QuEChERS; gas chromatography-tandem mass spectrometry

諾麗（Noni）是茜草科巴戟天屬的一種植物，學(xué)名海濱木巴戟（Morinda citrifolia Linn.），生長(zhǎng)于熱帶和亞熱帶地區(qū)，是玻利尼西亞土著民有名的藥用植物。研究表明諾麗果實(shí)含有黃酮化合物、環(huán)烯醚萜類化合物、氨基酸等對(duì)人體有益的成分[1-3]。國(guó)內(nèi)由諾麗果開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品越來(lái)越多，諾麗酵素由諾麗果發(fā)酵而成，是諾麗產(chǎn)品中最受歡迎的品種。目前中國(guó)海南、西沙、云南和臺(tái)灣等地均有諾麗的種植，海南和云南的種植已有一定的規(guī)模[4，5]，市場(chǎng)上也有諾麗產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)需求。

果樹(shù)種植中常用有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥，這些農(nóng)藥目前的檢測(cè)方法多為氣相色譜、氣相質(zhì)譜法[6-8]。其中氣相串聯(lián)質(zhì)譜法抗干擾能力強(qiáng)，且能夠更準(zhǔn)確的定量和定性，對(duì)實(shí)現(xiàn)多種農(nóng)藥的同時(shí)測(cè)定更有幫助。本研究以氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法為檢測(cè)手段，采用乙二胺基-N-丙基（PSA）為凈化吸附劑，優(yōu)化了各農(nóng)藥的碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)，開(kāi)發(fā)了一種簡(jiǎn)單高效的諾麗酵素原液中乙烯菌核利、腐霉利、聯(lián)苯菊酯等12種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。

1? 材料與方法

1.1? 儀器、試劑

Agilent7890A/7000A型氣相串極質(zhì)譜儀，安捷倫公司;梅特勒AB-204N型電子天平，梅特勒-托利多儀器上海有限公司;LXJ-ⅡB型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠;XW-80A型漩渦混合器，上海青浦滬西儀器廠;多管渦旋混合器，北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司。

五氯硝基苯、乙烯菌核利、腐霉利、甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、氯氟氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氯氰菊酯、氟胺氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等12種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品1 000 mg/L，農(nóng)業(yè)部天津環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心;乙腈為色譜純，F(xiàn)isher公司;無(wú)水硫酸鎂，廣州化學(xué)試劑廠;PSA、C18、石墨化炭黑，安捷倫公司。

1.2? 方法

1.2.1? 樣品前處理? 稱取10 g（精確到0.01 g）樣品至50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入15 mL乙腈，20 000 r/min渦旋提取2 min，再加入4 g MgSO₄、1 g NaCl、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉20 000 r/min渦旋提取2 min，然后4 000 r/min離心5 min，吸取上層有機(jī)相1 mL至含有50 mg PSA和120 mg MgSO₄的凈化劑離心管中，渦旋1 min，10 000 r/min離心5 min，吸取上層清液上機(jī)。

1.2.2? 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1）混合儲(chǔ)備液。12種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品采用丙酮等溶劑分別稀釋為100 mg/L單標(biāo)儲(chǔ)備液，用丙酮稀釋成多組4 mg/L混標(biāo)儲(chǔ)備液，于-18 ℃條件下避光保存。

2）基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照“1.2.1”步驟提取不含目標(biāo)化合物的空白樣品，以此為稀釋溶劑，根據(jù)需要配置成不同濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.3? 氣相質(zhì)譜條件

1）色譜條件。HP-5MS 30 m×0.32 mm×0.25 μm色譜柱，進(jìn)樣口溫度260 ℃，進(jìn)樣量1 μL，不分流進(jìn)樣，柱箱程序升溫為70 ℃保持1 min，以25 ℃/min升到150 ℃保持3 min，以15 ℃/min升到200 ℃保持3 min，以20 ℃/min升到280 ℃保持8 min。載氣為99.999%氦氣，流速1 mL/min，溶劑延遲4.0 min，碰撞氣為99.999%氮?dú)狻?/p>

2）質(zhì)譜條件。電子轟擊源（EI）70 eV，連接口溫度280 ℃，離子源溫度230 ℃，四極桿溫度150 ℃，碰撞氣流速為氮?dú)?.5 mL/min，氦氣2.25 mL/min。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

通過(guò)全掃描確定各農(nóng)藥保留時(shí)間和找出響應(yīng)好的離子為母離子，對(duì)母離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，確定碎片離子信息，并對(duì)離子對(duì)的最佳碰撞能量進(jìn)行優(yōu)化，最終得到幾對(duì)母離子、子離子及最優(yōu)碰撞能量。基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液TIC譜見(jiàn)圖1，化合物的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

2.2? 吸附劑及其用量的優(yōu)化

諾麗酵素原液含有大量的有機(jī)酸類、酯類物質(zhì)，PSA去除有機(jī)酸的效果較好，石墨化炭黑和C18結(jié)合能夠去除色素和酯類物質(zhì)，試驗(yàn)依照“1.2.1”前處理過(guò)程，對(duì)50 mg PSA和50 mg PSA+50 mg石墨化炭黑+50 mg C18兩種吸附劑組合進(jìn)行。結(jié)果表明，兩種組合下除五氯硝基苯外其他回收率均在70%～120%，其中五氯硝基苯在添加石墨化炭黑和C18后回收率下降明顯。諾麗酵素原液顯暗棕色，其乙腈提取液仍有一些色素，但50 mg PSA處理后的提取液澄清，且回收率滿足要求，故最終選取50 mg PSA。

2.3? 線性關(guān)系和定量限

以目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，各化合物的線性回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。方法中大部分化合物實(shí)際添加的最低濃度為0.012 mg/kg，該添加濃度下回收率滿足檢測(cè)要求，說(shuō)明大部分化合物的定量限能達(dá)到0.012 mg/kg，具體定量限見(jiàn)表2。

2.4? 準(zhǔn)確度和精密度

在樣品中添加目標(biāo)化合物后放置0.5 h，然后依照“1.2.1”進(jìn)行前處理，每個(gè)添加濃度做3個(gè)平行，對(duì)化合物的加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行考察并以此來(lái)衡量方法的準(zhǔn)確度和精密度?；厥章屎拖鄬?duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，表明該方法的回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差均滿足檢測(cè)要求。

3? 結(jié)論

本研究建立了乙腈提取，PSA凈化，氣相串聯(lián)質(zhì)譜MRM模式檢測(cè)諾麗酵素原液中乙烯菌核利、腐霉利、氯氰菊酯等12種農(nóng)藥殘留的方法，該方法操作簡(jiǎn)單，色譜和質(zhì)譜條件能有效完成各農(nóng)藥的定量和定性，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，方法準(zhǔn)確度和精密度均滿足分析要求，可延伸運(yùn)用于諾麗酵素原液、諾麗果汁的農(nóng)殘檢測(cè)，推動(dòng)該產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1] 周? 偏，蔡? 坤，梁叢穎，等.諾麗酵素在自然發(fā)酵過(guò)程中體外抗氧化活性變化及品質(zhì)研究[J].中國(guó)釀造，2018，37（1）：92-96.

[2] 晏永球，童應(yīng)鵬，陸? 雨，等.諾麗的化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J].中草藥，2017，48（9）：1888-1905.

[3] 李? 戈，張麗霞，牛迎鳳，等.不同來(lái)源地諾麗果質(zhì)量分析[J].中華中醫(yī)藥雜志，2016，31（9）：3766-3769.

[4] 龔? 敏，蘇? 奎，楊先會(huì)，等.諾麗鮮果與諾麗發(fā)酵汁化學(xué)成分研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22（2）：341-342.

[5] 李曉花，管燕紅，趙俊凌，等.不同產(chǎn)地諾麗干果的營(yíng)養(yǎng)成分比較分析[J].食品工業(yè)，2016，37（9）：292-295.

[6] 莫磊興，范業(yè)賡，梁? 俊，等.固相萃取與GC-μECD法測(cè)定香蕉中有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011， 42（6）：616-619.

[7] 吳? 帥，李湘南，王開(kāi)宇，等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定葡萄酒中33種農(nóng)藥殘留[J].食品工業(yè)科技，2015，36（17）：305-311.

[8] 吳鳳琪，沈金燦，吳衛(wèi)東，等.固相萃取-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定葡萄酒中75種農(nóng)藥殘留量[J].食品科技，2014，39（5）：268-274.