油茶種子角鯊烯檢測(cè)方法的建立與不同種質(zhì)含量分析

摘要：本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）的方法測(cè)定油茶種子中角鯊烯含量。樣品經(jīng)液氮研磨后，利用正己烷提取脂溶性成分，再經(jīng)甲酯化反應(yīng)后用正己烷定容，氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品在50～300 ug/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，R2=0.9944，不同種質(zhì)油茶種子角鯊烯含量差異明顯（100～800 ug/g）。采用GC-MS法前處理方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，測(cè)定的不同油茶種質(zhì)種子中的角鯊烯含量，為開發(fā)木本油料新利用方向以及高角鯊烯油茶品種的選育提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：油茶;種子;氣相色譜聯(lián)用質(zhì)譜;角鯊烯

中圖分類號(hào)： TS227 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： ?A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI編號(hào)： ? 10.14025/j.cnki.jlny.2019.06.016

角鯊烯是一種脂質(zhì)三萜類化物，可溶解于異丙醇、石油醚、丙酮，不溶于水，在常壓下330 ℃分解[1]。角鯊烯作為所有固醇類物質(zhì)的全合成前體，具有抗氧化、調(diào)節(jié)膽固醇代謝、降血糖、細(xì)胞保護(hù)、抗腫瘤等生物活性[2]。由于其良好的生物活性，在食品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，但角鯊烯的來(lái)源較為單一，目前主要是從深海鯊魚甘油中提取。隨著人們環(huán)保意識(shí)和對(duì)野生動(dòng)物保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，尋找合適的角鯊烯替代來(lái)源變得十分迫切。目前發(fā)現(xiàn)角鯊烯的替代來(lái)源主要以植物為主，油料作物如橄欖油、茶油、棕櫚油等油脂中含有一定濃度的角鯊烯。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可應(yīng)用于油茶種子和油脂中角鯊烯的日常分析，旨在發(fā)現(xiàn)角鯊烯含量較高的油茶品種，為開發(fā)木本油料新利用方向及高角鯊烯含量品種的選育提供方法依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 油茶材料

采自貴州省銅仁玉屏侗族自治縣油茶產(chǎn)業(yè)示范園種質(zhì)圃。

1.1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與藥品 ?氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（Clarus680型 美國(guó)PerkinElmer）。

1.1.2 試藥 角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品：99.5%，中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精確稱取角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品，正己烷定容，配置成50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml、200ug/ml、250ug/ml、300ug/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.2.2 樣品前處理 精確取油茶籽0.5g，液氮研磨至粉末狀，加入200μl正己烷和500μl氫氧化鉀-甲醇（1 mol/L）溶液，震蕩3～5min，密封后放入60℃水浴30min，待冷卻后加入1ml三氟化硼甲醇溶液，60℃水浴30min，取出小瓶，待液體冷卻后加入1ml飽和氯化鈉和1ml正己烷，劇烈震蕩1min。待靜置分層后取上層液體入新的離心管中，加入1/10無(wú)水硫酸鈉，震蕩干燥，最后將提取液用正己烷定容至5ml，過(guò)膜0.22μm濾膜待測(cè)。

1.2.3 GC-MS條件 采用EI離子源，氣相色譜柱DB-23（60 m×0.25mm×0.25μm），進(jìn)口溫度：230℃，傳輸線溫度215℃;升溫條件：起始溫度50℃，10min升至200℃，維持200℃ 28min后，2min升至220℃，并保持3min。

2 結(jié)果與分析

2.1 角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品GC-MS標(biāo)準(zhǔn)曲線

以標(biāo)準(zhǔn)溶液為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如圖1所示，當(dāng)角鯊烯濃度為50 ～300 μg/mL范圍內(nèi)，其線性回歸方程Y=533.57x-3523.7，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9944。

2.2 實(shí)際樣品測(cè)定

采用1.2.2所示樣品前處理方式與1.2.3所示的色譜條件進(jìn)行實(shí)際樣品測(cè)定，通過(guò)分析角鯊烯含量測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，42個(gè)不同品系油茶種子含量差異明顯，樣品MY027、MY062、MY101中角鯊烯的含量明顯高于其他檢測(cè)樣品，分別高達(dá)772.57μg/g，728.70μg/g，700.35μg/g，平均可達(dá)733.4μg/g，樣品MY090、MY083、MY097、MY068、MY086、MY089、MY082的角鯊烯含量在500～650μg/g，平均可達(dá)561.61 μg/g，標(biāo)準(zhǔn)差比都在7%內(nèi)，精密度好，數(shù)據(jù)可信度高。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了正己烷提取——甲酯化反應(yīng)——?dú)赓|(zhì)聯(lián)用測(cè)定多種樣品中角鯊烯含量的外標(biāo)法定量的測(cè)試方法，本方法較為簡(jiǎn)單、定量準(zhǔn)確、精密度高。利用此法對(duì)42種油茶種子樣品的角鯊烯含量進(jìn)行檢測(cè)，可以準(zhǔn)確得出樣品中的角鯊烯含量，明確體現(xiàn)出角鯊烯含量較高的品種，為油茶高角鯊烯品種的選育提供依據(jù)，并為木本油料的開發(fā)提供了新的利用方向。

參考文獻(xiàn)

[1]吳梧桐.生物制藥工藝學(xué)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 1993.

[2]張光杰，楊利玲，等.角鯊烯開發(fā)及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].糧食與油脂， 2017，12（30）：7-10.

作者簡(jiǎn)介：劉文浩，大專學(xué)歷，工程師，研究方向：森林培育、木本油料種質(zhì)資源選育。