腸通對小鼠便秘的有效性研究

付滿玲 龐艷 楊樹娟 胡方園 楊升 周玉霞 胡月 劉珉甬

摘要：目的? 研究腸通對小鼠便秘的有效性。方法? 用復方地芬諾酯灌胃制備小鼠便秘模型100只，用0.9% NS灌胃制備空白組模型20只，分為腸通高劑量組（10 mg/只）、腸通中劑量組（5 mg/只）、腸通低劑量組（2.5 mg/只）、陽性對照組、模型組和空白組共6組，每組20只。腸通高劑量組、中劑量組、低劑量組用腸通與墨汁等體積混合進行灌胃，0.1 ml/只;陽性對照組將杜密克與墨汁等體積混合灌胃，67 mg/只，0.1 ml/只;模型組和空白組用墨汁灌胃，0.1 ml/只。灌胃25 min后，每組脫頸處死10只測定墨汁推進率，取小腸標本做病理檢查。每組存留的10只小鼠觀察灌胃后首粒排黑便時間、6 h內(nèi)排黑便粒數(shù)、糞便含水量、有無死亡。結(jié)果? ①腸通對便秘小鼠墨汁推進率的影響：各組小鼠小腸總長度比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;空白組墨汁推進長度、墨汁推進率均大于其余各組，腸通高、中、低劑量組均大于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。②腸通對便秘小鼠排便情況的影響：空白組首粒排便時間短于其余各組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;模型組6 h排便粒數(shù)、排便含水量均少于其余各組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。③各組小鼠均未死亡。④病理學：各組小腸絨毛排列整齊，結(jié)構(gòu)完整。結(jié)論? 腸通能有效治療小鼠便秘。

關(guān)鍵詞：便秘;腸通;杜密克;墨汁;通便

中圖分類號：R319? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.09.024

文章編號：1006-1959（2019）09-0074-04

Abstract：Objective? To study the effectiveness of Changtong on constipation in mice. Methods? A total of 100 mice constipation models were prepared by intragastric administration of compound diphenoxylate. 20 mice in the blank group were prepared by intragastric administration of 0.9% NS. They were divided into high-dose group （10 mg/mouse），Intestinal medium dose group （5 mg/mouse）， intestinal low dose group （2.5 mg/mouse）， positive control group， the model group and the blank group， 20 mice in each group. The high-dose group， the middle-dose group and the low-dose group were intragastrically administered with an equal volume of intestinal and ink， 0.1 ml/mouse; the positive control group was mixed with Dumilk and ink in the same volume， 67 mg/mouse. 0.1 ml/mouse; model group and blank group were intragastrically administered with 0.1 ml/mouse. After 25 minutes of gavage， 10 mice in each group were sacrificed to measure the ink propellation rate， and the small intestine specimens were taken for pathological examination. 10 mice in each group were observed for the first squatting time after gavage， the number of black stools in 6 h， the moisture content of the feces， and the presence or absence of death. Results? ①The effect of Changtong on the ink propelling rate of constipation mice： There was no significant difference in the total length of small intestine between the groups （P>0.05）; the ink propulsion length and ink propulsion rate of the blank group were larger than the other groups， The high， medium and low dose groups were larger than the model group，the difference was statistically significant （P<0.05）.②The effect of Changtong on the defecation of constipation mice： The first defecation time in the blank group was shorter than the other groups， the difference was statistically significant （P<0.05）; The number of defecation and defecation water content in the model group were lower than those in the other groups at 6 h，the difference was statistically significant （P<0.05）.③None of the mice in each group died. ④Pathology： The villi of the small intestines were arranged neatly and the structure was complete. Conclusion? Changtong can effectively treat constipation in mice.

Key words：Constipation;Intestinal pass;Dumilk;Ink;Laxative

老年性便秘是一種起病誘因極其復雜的疾病，涉及面廣，表現(xiàn)為一系列生理、心理和精神狀態(tài)的改變，發(fā)生率隨年齡增長而增加至15%～30%，各種原因?qū)е碌哪c傳導功能失?；蚰c內(nèi)津液不足都可引發(fā)便秘，而長期住院患者發(fā)病率高達80%以上，易引發(fā)腦血管破裂、心梗等并發(fā)癥，危及生命[1-4]。因此，防治老年性便秘具有十分重要的意義。藥食同源食品在國際上的重視程度越來越高[5]，腸通則是依據(jù)中醫(yī)“藥食同源”特性，結(jié)合現(xiàn)代腸道微生態(tài)研究進展，根據(jù)老年性便秘特點研制的食品。為了檢測腸通的有效性與安全性，本研發(fā)團隊開展了腸通對小鼠便秘的有效性研究，現(xiàn)報告如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗對象? 昆明小鼠（Kunming mice，KM小鼠），18～22 g，雌雄各半，共120只，由西南醫(yī)大學實驗動物中心提供SCXK（川）2013-17，通過了西南醫(yī)科大學動物實驗倫理審查，遵照動物福利進行實驗，飼養(yǎng)溫度20～25℃，濕度40%～70%。實驗中動物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進食。

1.1.2實驗藥物? 炭粉液[6]（首粒黑便指示劑）：加水400 ml將阿拉伯樹膠（邁瑞爾9000-01-5）100 g配成0.25%透明溶液，將活性炭粉（嵩山濾材活性炭廠）50 g加至上述溶液中煮沸3次，冷卻后加水至500 ml，于4℃冰箱保存，用前搖勻，并加入等量蒸餾水，制得炭粉液待用（0.01 ml/g）。復方地芬諾酯（康普藥業(yè)，1109027）混懸液：2片復方地芬諾酯片（2.5 mg/片）研磨成粉，加入2.5 ml水均勻混合。腸通（岷宏）：用0.9%NS以正常成人0.0025 mg/d為標準配置成不同濃度懸液。0.9%NS（四藥）。杜密克（荷蘭Abbott Biologicals， B.VH20120387）。

1.2方法

1.2.1造模及分組? ①造模：復方地芬諾酯法：小鼠100只禁食16 h后按10 mg/kg一次灌胃。用該模型模擬臨床非特異性便秘[7]，即造模后小鼠排便減少或難排便，與臨床癥狀及診斷基本相同。以小鼠出現(xiàn)豎毛、少動、蜷曲、蹲伏、不進食，大便干硬，排便次數(shù)減少，糞便顆粒明顯變細、變小為成功標志。NS灌胃法：小鼠20只用0.9%NS灌胃（用于空白組的造模）。造模30 min后進行分組。②分組（20只/組）：○a腸通組：高（10 mg/只）、中（5 mg/只）、低（2.5 mg/只）劑量組，相當于人體劑量的5、10、20倍，用腸通與墨汁等體積混合物進行灌胃，0.1 ml/只?！餬陽性對照組：杜密克與墨汁等體積混合灌胃，67 mg/只，0.1 ml/只?！餭模型組：墨汁灌胃，0.1 ml/只。④空白組：墨汁灌胃，0.1 ml/只。

1.2.2小腸推進實驗? 灌胃25 min后每組立即脫頸處死小鼠10只，計算墨汁推進率[8]：剪取上自幽門、下至回盲腸部的腸管為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進長度”[7];取小腸標本做病理學檢查。墨汁推進率（%）=墨汁推進長度（cm）/小腸總長度（cm）×100%。

1.3觀察指標? 觀察各組的墨汁推進率、首粒排黑便時間、6 h內(nèi)排黑便粒數(shù)、含水量[含水量=（濕重-干重）/濕重×100%]、有無死亡以及病理學。于小鼠幽門下15 cm空腸處剪取2 mm×3 mm腸壁，用4℃ 0.9% NS清洗后置于冷多聚甲醛-戊二醛固定液。

1.4數(shù)據(jù)處理? 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗。符合方差分析的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，非正態(tài)的數(shù)據(jù)采用Kruskal-Wallis H多組秩和檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1腸通對便秘小鼠墨汁推進率的影響? ①小腸總長度：各組小鼠小腸總長度比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。②墨汁推進長度：空白組墨汁推進長度均大于其余各組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;空白組墨汁推進長度大于腸通高劑量組，差異有統(tǒng)計學意義（t=5.81，P=0.00）;腸通高、中、低劑量組墨汁推進長度均大于模型組，差異具有統(tǒng)計學意義（t=6.75，8.90，9.08;P<0.05）。③墨汁推進率：空白組墨汁推進率均大于其余各組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;腸通高中低劑量組墨汁推進率有所上升，與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;腸通高、中、低劑量組墨汁推進率均大于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2小鼠排便實驗結(jié)果? ①首粒排便時間：與空白組比較，腸通高、中、低劑量組，陽性對照組，模型組的首粒排便時間均延長，差異具有統(tǒng)計學意義（t=7.22，7.13，6.66，7.36，9.29;P=0.00）。②6 h排便粒數(shù)：模型組6 h排便粒數(shù)少于其余各組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。③排便含水量：與模型組比較，腸通高、中、低劑量組，陽性對照組的排便含水量均升高，差異具有統(tǒng)計學意義（t=4.40，5.27，6.19，9.84;P=0.00），見表2。

2.3小鼠死亡情況? 各組小鼠均無死亡。

2.4組織病理學檢查? 各組小腸絨毛排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，見圖1。

3討論

便秘以排便困難為主要病癥，可引發(fā)痔瘡、肛裂等并發(fā)癥，且易誘發(fā)老年人心腦血管等慢性疾病的發(fā)生發(fā)展[9，10]。隨著生活水平的改善，便秘在老年人中發(fā)病率逐漸增高，其在中醫(yī)學被稱為“大便難”“不更衣”“脾約”“陽結(jié)”“陰結(jié)”等，病因有飲食不節(jié)、年老體弱、情緒失調(diào)、氣機郁滯等，與胃、腸、肝、腎、脾、肺功能失調(diào)相關(guān)，而老年性便秘從病因、發(fā)病機制及臨床癥狀上講，屬現(xiàn)代醫(yī)學中的功能性便秘[11]。西醫(yī)多采用服用西沙必利片、乳果糖口服液、導瀉劑等，雖有一定治療效果，但會引起一定毒副反應，如惡心、嘔吐、腹瀉、水電解質(zhì)紊亂等[12，13]。中醫(yī)多采用中藥內(nèi)服、針灸推拿、敷臍療法等[14，15]，治療方法多樣，療效確切，安全無毒副作用，中醫(yī)藥治療老年性便秘的優(yōu)勢明顯，經(jīng)濟適用，標本兼顧，越來越受到重視[16]。

腸通是依據(jù)我國《黃帝內(nèi)經(jīng)》基本理論組方而成，是在突出飲食調(diào)養(yǎng)及預防作用上開創(chuàng)的藥物與食物相結(jié)合的“藥食同源”功能性食品[17]，結(jié)合現(xiàn)代腸道微生態(tài)研究進展，根據(jù)老年性便秘特點研制的食品。腸通系自主研發(fā)的食品，已申報國家發(fā)明專利，其主要成分由A與B單體組方配成。A具有XOS生理活性，能有效減少老年便秘的發(fā)生。分析原因可能是A分子具有多個親水基團，可與水分子聚集成巨大分子，且粘度高，穩(wěn)定性好有關(guān)。在胃腸道中，A能吸水與水形成粘稠膠狀物，軟化食物殘渣而直接發(fā)生通便作用。A是由2～10個單糖分子通過糖苷鍵連接形成的低度聚合糖，它可有效促進生物體內(nèi)以雙歧桿菌為代表的腸道有益菌群的特異性增殖， 多項雙歧桿菌的純培養(yǎng)研究證實，XOS可被多種雙歧桿菌所代謝，產(chǎn)生一系列腸保健功能。B是中藥單體，有療效確切促進腸蠕動作用，二者組合，是一種較好的潤腸通便功能性食品，且無副作用。腸通對便秘小鼠墨汁推進長度、墨汁推進率、首粒排便時間、6 h排便粒數(shù)、排便含水量的影響差異有統(tǒng)計學意義，與模型組、空白組對照，腸通高中低劑量組能有效治療便秘小鼠，具有潤腸通便的作用。

本研究采用復方地芬諾酯灌胃制備小鼠便秘模型，腸通組與陽性對照組同用墨汁灌胃，以小鼠的墨汁推進率、首次排黑便時間、6 h排便粒數(shù)、糞便含水量等指標評價腸通的通便功能。采用墨汁灌胃測定排便時間是動物實驗的常用手段，常用于通便藥物的療效評價，對比結(jié)果具有可靠性、科學性。本研究的陽性對照組杜密克[18]是臨床常用的高滲性瀉藥，可保留大腸中的水及電解質(zhì)，增加糞便滲透性，軟化糞便幫助排泄，且不為人體吸收，無腸道刺激性，具有實驗價值。研究數(shù)據(jù)顯示腸通與陽性對照組比較，高中低劑量組均能達到藥物（杜密克）治療便秘的療效。杜密克雖在臨床常用，但歸根結(jié)底還是一種藥物治療，而腸通 “藥食同源”功能性食品，安全有效，價格低廉。

本研究采用復方地芬諾酯灌胃制備小鼠便秘模型，腸通組（腸通懸液）與陽性對照組（杜密克）同用墨汁灌胃，研究結(jié)果證明腸通可對抗復方地芬諾酯引起的腸抑制作用。便秘是消化系統(tǒng)常見病癥，影響人群多、涉及范圍廣，現(xiàn)臨床治療僅局限于“頭痛醫(yī)頭，腳痛醫(yī)腳”，療效不佳[19]，中醫(yī)藥治療老年性便秘治療依從性好、接受度高[20]，腸通是自主研發(fā)的新型食品，對于人體健康有重要作用[21]，因此研發(fā)出安全有效、服用方便的功能性食品尤為重要。

綜上所述，本次研究結(jié)果提示腸通能有效治療小鼠便秘，對防治老年性便秘有重要的意義。

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收稿日期：2019-2-27;修回日期：2019-3-10

編輯/楊倩

基金項目：四川省科技支撐計劃（編號：2016FZ0059）

作者簡介：付滿玲（1995.4-），女，四川瀘州人，碩士研究生，主要從事中藥化學與中藥制劑的研究

通訊作者：劉珉甬（1952.5-），女，四川瀘州人，本科，教授，主要從事功能性食品研發(fā)