焦蒼術(shù)中藥炮制規(guī)范項(xiàng)目的測(cè)定研究*

程 華謝 冬李 健畢建洪洪志堅(jiān)

(合肥師范學(xué)院 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，安徽 合肥 230061)

0 引言

隨著屠呦呦的研究成果獲得諾貝爾獎(jiǎng)之后，中藥吸引著大量研究者的注意，在世界舞臺(tái)上扮演著越來(lái)越重要的作用.為充分發(fā)揮中藥飲片的藥效，保證藥品生產(chǎn)加工階段的質(zhì)量，我國(guó)需要對(duì)中藥行業(yè)的認(rèn)知和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范進(jìn)行完善，加強(qiáng)對(duì)中藥飲片炮制規(guī)范的研究，使得中藥產(chǎn)業(yè)實(shí)現(xiàn)跨越式發(fā)展.而蒼術(shù)是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，具有燥濕健脾，祛風(fēng)散寒，明目等功效，本文將對(duì)焦蒼術(shù)中藥炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，以期為大力發(fā)展蒼術(shù)的炮制產(chǎn)品提供數(shù)據(jù)支撐.

蒼術(shù)為多年生的草本植物，根莖單生或者簇生，莖枝具有疏被蛛絲狀毛，根狀莖呈平臥或者斜升狀，根莖粗長(zhǎng)或者通常呈現(xiàn)疙瘩狀，一般生多數(shù)等粗等長(zhǎng)或者近似等長(zhǎng)的不定根.[1]蒼術(shù)通常生長(zhǎng)在稀疏柞樺林和灌木林帶山坡草地，灌叢及林間草叢當(dāng)中，為稀見(jiàn)伴生植物.按照生長(zhǎng)地理位置的不同可分類(lèi)為茅蒼術(shù)，北蒼術(shù)和關(guān)蒼術(shù).常分布于黑龍江，遼寧，內(nèi)蒙古，河北，山西，吉林，江蘇，湖北省房縣等地.其中江蘇是茅蒼術(shù)的主要產(chǎn)區(qū)，被稱(chēng)為主要的地道蒼術(shù)產(chǎn)區(qū)，通常供應(yīng)全國(guó).[2-4]

蒼術(shù)具有燥濕健脾，祛風(fēng)濕的功效，它主治脘腹脹滿(mǎn)，濕阻中焦，夜盲，泄瀉，水腫，腳氣痿蹙，風(fēng)寒感冒，風(fēng)濕痹痛，眼目昏澀等病癥.其主要具有調(diào)整胃腸運(yùn)動(dòng)的作用，同時(shí)由于它能夠抑制胃酸的分泌和增強(qiáng)胃黏膜保護(hù)作用，從而達(dá)到抗?jié)兊哪康?蒼術(shù)也可以調(diào)節(jié)血糖(一般降低血糖)，它還具有抑菌和保肝的作用，同時(shí)具有較強(qiáng)的抗缺氧能力.蒼術(shù)在大劑量使用時(shí)會(huì)抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有鎮(zhèn)靜的作用.[5-9]

蒼術(shù)在炮制前，需要對(duì)其進(jìn)行一般的處理.首先取其原藥材，除去雜質(zhì)，并且用水浸泡，洗凈，潤(rùn)透，然后切厚片，干燥.最后篩去碎屑，進(jìn)行炮制.目前市場(chǎng)上主要的幾種蒼術(shù)中藥炮制品是按以下方法制成的：[10-12](1)制蒼術(shù)：取蒼術(shù)片，用米泔水浸泡數(shù)小時(shí)，取出，置于炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒干，篩去碎屑.(2)麩炒蒼術(shù)：首先將鍋燒熱，向其中撒入麥麩，用中火加熱.待冒煙時(shí)投入蒼術(shù)片，不斷翻炒，當(dāng)炒至深黃色時(shí)，取出，篩去麥麩，放涼.蒼術(shù)片每100 kg用麥麩10 kg.(3)焦蒼術(shù)：取蒼術(shù)片，放于炒制容器內(nèi)，用中火加熱，炒至褐色時(shí)，噴淋少量清水，再用文火炒干，取出放涼，篩去碎屑即可.

但參閱目前中國(guó)藥典數(shù)據(jù)，雖然對(duì)相關(guān)藥材如蒼術(shù)有明確的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)，但是對(duì)其炮制品并沒(méi)有確切的質(zhì)量規(guī)范數(shù)據(jù)，在公開(kāi)文獻(xiàn)中也很少有這方面的資料.為此，本研究選取了不同產(chǎn)地不同批次的焦蒼術(shù)中藥炮制品，對(duì)其中藥炮制規(guī)范項(xiàng)目進(jìn)行測(cè)定研究，探討其性狀及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)如有效成分蒼術(shù)素、水分、總灰分含量，望為進(jìn)一步制定焦蒼術(shù)中藥飲片炮制標(biāo)準(zhǔn)提供參考數(shù)據(jù)資料.

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

樣品：本研究收集的蒼術(shù)采收地來(lái)源于江蘇，湖北等地，采用了10批樣品，代號(hào)分別為：a-湖北，b-黑龍江，c-遼寧，d-內(nèi)蒙古，e-吉林，f-山西，g-河北，YP-JCZ-001-江蘇，YP-JCZ-002-江蘇，YP-JCZ-003-江蘇.選取蒼術(shù)(茅蒼術(shù))作為對(duì)照藥材，來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為120932-201407.選取蒼術(shù)素為對(duì)照品，來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為111924-201404.

試劑：純化水、無(wú)水乙醇AR、濃鹽酸AR、甲苯AR、丙酮AR、甲醇(色譜級(jí))、石油醚(60℃～90℃)AR、甘油AR、硫酸AR、水合氯醛AR等.

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀(型號(hào)：LC-20A，日本島津公司);分析天平(型號(hào)：AL204，杭州康納科技有限公司);六兩裝高速中藥粉碎機(jī)(型號(hào)：LG-06A，瑞安市百信藥機(jī)械廠(chǎng));電熱鼓風(fēng)干燥箱(型號(hào)：GZX-9240MBE，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司);顯微鏡(型號(hào)：BA-310，北京中儀光科科技發(fā)展有限公司);超聲波清洗器(型號(hào)：700VDE，合肥金尼克機(jī)械制造有限公司);薄層電動(dòng)點(diǎn)樣器(型號(hào)：HAD8-DYQ-I，北京恒奧德儀器有限公司);循環(huán)水式真空泵(型號(hào)：SHZ-DⅢ型，河南省予華儀器有限公司);回旋式振蕩器(型號(hào)：HY-5，江蘇金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng));馬弗爐(型號(hào)：SX-4-10，天津泰斯特儀器有限公司)等.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 顯微鑒別[13]

取焦蒼術(shù)樣品置于六兩裝高速中藥粉碎機(jī)中粉碎，然后取粉末過(guò)3號(hào)篩，挑取少量粉末置于載玻片上，滴加兩滴水合氯醛溶液(取水合氯醛50 g，加蒸餾水15 ml與甘油10 ml使溶解)和稀甘油試液(取甘油33 ml，加蒸餾水10 ml，再加樟腦少許或液化苯酚1滴)，不可加熱，蓋上載玻片，吸出氣泡.顯微鏡下檢視樣品內(nèi)部結(jié)構(gòu).

1.3.2 薄層色譜鑒別

2015版藥典將蒼術(shù)素作為蒼術(shù)定性鑒別的指標(biāo)成分，因此在薄層色譜定性鑒別中選取蒼術(shù)素作為對(duì)照品.[14]

供試品溶液的制備：用電子分析天平稱(chēng)取本品粉末0.8 g，倒入貼好標(biāo)簽的錐形瓶，用10 ml移液管移取甲醇l0 ml，用超聲清洗器超聲處理15分鐘，過(guò)濾，取過(guò)濾液作為供試品溶液.同法制對(duì)照藥材溶液.

對(duì)照品溶液的制備：取蒼術(shù)素對(duì)照品，用甲醇溶解，而后制成每1 ml甲醇含0.2 mg對(duì)照品溶液.

將電動(dòng)點(diǎn)樣器平穩(wěn)放在工作臺(tái)上，插上電源，打開(kāi)開(kāi)關(guān)，預(yù)熱，當(dāng)上升溫度縮回，再設(shè)定到所定溫度，輸入供試品溶液6μl、對(duì)照藥材溶液6μl、對(duì)照品溶液2μl和打點(diǎn)數(shù)12等一系列參數(shù)在電腦程序上，然后用甲醇潤(rùn)洗微量注射器2次，而后吸取供試品溶液10次、照藥材溶液1次、對(duì)照品溶液1次，每次吸都得用甲醇潤(rùn)洗，并排除氣泡，針頭擦拭干凈，然后將微量注射器放在點(diǎn)樣針尖，然后點(diǎn)擊運(yùn)行按鈕，打點(diǎn).而后將硅膠G板分別在以石油醚(60℃～90℃)-丙酮體積配比為9∶2展開(kāi)劑的展缸里豎直展開(kāi)，大約跑版跑到板最上端1 cm處，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，并加熱至顯色明晰.

1.3.3 水分測(cè)定(甲苯法[15])

甲苯法：取供試品適量(相當(dāng)于含水量1～4 ml)，精密稱(chēng)定，置蒸餾燒瓶中，加甲苯200 ml，必要時(shí)加入干燥、潔凈的沸石數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿(mǎn)收集管的狹細(xì)部分.將燒瓶置電熱套中緩緩加熱，待甲苯開(kāi)始沸騰時(shí)，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴.待水分完全餾出，即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí)，將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗，再用飽蘸甲苯的長(zhǎng)刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在收集管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離(可加亞甲藍(lán)粉末少量，使水染成藍(lán)色，以便分離觀(guān)察).檢讀水量，并計(jì)算供試品中的含水量(%).每批樣品分別測(cè)試兩次，取其平均值.

1.3.4 總灰分測(cè)定

將焦蒼術(shù)粉碎，使能通過(guò)2號(hào)篩，混合均勻后，取供試品2～3 g，放置于熾灼至恒重的坩堝中，稱(chēng)定重量(準(zhǔn)確至0.0001 g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，首先將樣品放進(jìn)馬弗爐里于150℃炭化2小時(shí)，待炭化完全，再升高溫度到600℃計(jì)時(shí)灼燒5小時(shí)，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)樣品出現(xiàn)灰化不完全現(xiàn)象，通過(guò)往坩堝里加入適量熱水，在電爐上蒸干后再放入馬弗爐里在600℃條件下灼燒5小時(shí)，逐漸升高至600℃，使其完全灰化并至恒重.根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量(%).如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸鐵溶液2 ml，使殘?jiān)鼭駶?rùn)，然后置于電爐上蒸干，殘?jiān)涨胺胱?，至坩堝?nèi)容物完全灰化.每批樣品分別測(cè)試兩次，取其平均值.

1.3.5 有效成分蒼術(shù)素的含量測(cè)定

1.3.5.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑

儀器設(shè)備：島津LC-20A液相色譜儀

色譜柱：島津InertSustain C18柱5 um(250 mm*4.6 mm)

檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nnm;流速：1 ml/min;

柱溫：35℃

流動(dòng)相：甲醇-水(79∶21)

1.3.5.2 樣品前處理與有效成分測(cè)定[16]

對(duì)照品溶液的制備：取蒼術(shù)素的對(duì)照品，用甲醇溶解，而后制成每1 ml甲醇含0.2 mg的溶液.

供試品溶液的制備：精密稱(chēng)定本品粉末0.2 g，置錐形瓶中，移取甲醇50 ml，塞緊，稱(chēng)重，用超聲清洗器超聲處理1小時(shí)，放冷，再稱(chēng)重，用甲醇補(bǔ)重，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得.

測(cè)定時(shí)分別移取對(duì)照品溶液、試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得.

1.3.5.3 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取蒼術(shù)素對(duì)照品4.01 mg，用甲醇溶解，而后稀釋到200 ml，搖勻，即得母液.精密吸取1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色譜儀測(cè)定.

1.3.5.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μl，依照各自色譜條件，分別在0、15及19小時(shí)進(jìn)樣一次.

1.3.5.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取蒼術(shù)素對(duì)照品6.35 mg溶于250 ml甲醇中，配制成蒼術(shù)素對(duì)照品溶液(0.0254 mg/ml)，取該對(duì)照品6份，每份進(jìn)樣10μl.

2 結(jié)果與討論

2.1 性狀描述

關(guān)于焦蒼術(shù)性狀的描述，其顏色范圍基本屬于黃褐色，再結(jié)合10批焦蒼術(shù)樣品實(shí)物性狀，將本品性狀描述為“黃褐色的飲片”.將本品攤開(kāi)，嗅其氣味，本品香氣較淡，味辛、苦，故性狀描述為“香氣較淡，味辛、苦”.將其打粉，粉末呈黃棕色.圖1是焦蒼術(shù)的樣品及其粉末圖.

圖1 焦蒼術(shù)樣品及其粉末Fig.1 The sample and its powder of coked rhizoma atractylodis

2.2 樣品鑒別

2.2.1 顯微鑒別

本品粉末呈黃棕色.其內(nèi)部結(jié)構(gòu)中纖維大多成束，呈長(zhǎng)梭形，木質(zhì)化，細(xì)胞壁厚.石細(xì)胞較多，有長(zhǎng)方形、多角形，細(xì)胞壁厚.菊糖常見(jiàn)，呈紋理噴射狀.導(dǎo)管多見(jiàn)(見(jiàn)圖2).

圖2 焦蒼術(shù)粉末顯微圖Fig.2 The microscopic images of coked rhizoma atractylodis

2.2.2 薄層色譜

取10批焦蒼術(shù)樣品，按照前述薄層色譜鑒別方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，鑒別結(jié)果如下圖3所示.日光下檢視，發(fā)現(xiàn)供試品色譜與蒼術(shù)對(duì)照藥材，蒼術(shù)素對(duì)照品色譜在G板的相同位置顯示相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖3.說(shuō)明10批供試品中都含有蒼術(shù)中的特征成分蒼術(shù)素，鑒定供試品是焦蒼術(shù)樣品.

圖3 日光下焦蒼術(shù)薄層色譜圖Fig.3 The thin-layer chromatography image of coked rhizoma atractylodis under sunlight

2.3 水分測(cè)定

分別取焦蒼術(shù)粉末，按照前述甲苯法對(duì)10批樣品進(jìn)行水分測(cè)定，見(jiàn)表1.結(jié)果平均值為10.382% ，最大值為16.025%，最小值為5.505%.鑒于本品屬于蒼術(shù)的炮制品，受炮制過(guò)程影響，本品比原藥材水分含量大;其次可看出不同批次產(chǎn)品，由于全國(guó)各地土壤濕度、氣候等條件不同，導(dǎo)致由于生長(zhǎng)環(huán)境不同帶來(lái)的水分含量數(shù)據(jù)有較大差異.總體來(lái)說(shuō)焦蒼術(shù)炮制品水分含量的規(guī)定限度應(yīng)不得過(guò)17.0%.

表1 10批焦蒼術(shù)樣品水分測(cè)定數(shù)據(jù)Tab.1 The results of moisture of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.4 總灰分測(cè)定

分別取焦蒼術(shù)粉末，按照前述總灰分測(cè)定方法對(duì)10批樣品進(jìn)行總灰分測(cè)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2.其結(jié)果平均值為8.316%，最大值為13.115%，最小值為4.370%;可看出不同產(chǎn)地不同批次產(chǎn)品，由于其生長(zhǎng)環(huán)境不同，總灰分含量也有較大差異.總體來(lái)說(shuō)焦蒼術(shù)炮制品總灰分含量的規(guī)定限度應(yīng)不得超過(guò)14.0%.

表2 10批焦蒼術(shù)樣品總灰分測(cè)定數(shù)據(jù)Tab.2 The results of total ash of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.5 有效成分蒼術(shù)素的含量測(cè)定

蒼術(shù)主要含揮發(fā)油，約占5%～9%，倍半萜類(lèi)和聚乙烯炔成分是蒼術(shù)中最主要的兩大類(lèi)活性成分，前者主要的指標(biāo)性成分為β-桉葉醇，后者則為蒼術(shù)素.[16]2015版藥典已將蒼術(shù)素作為蒼術(shù)定性鑒別的指標(biāo)成分，故在焦蒼術(shù)炮制品中依然選擇蒼術(shù)中主要成分蒼術(shù)素作為含量測(cè)定指標(biāo)，可以較好地控制本品的內(nèi)在品質(zhì).

2.5.1 有效成分含量限度的確定

按照前述高效液相色譜操作條件，對(duì)10批樣品蒼術(shù)素的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4.由于生長(zhǎng)環(huán)境及可能炮制過(guò)程處理上的差異，致使不同樣品有效成分含量有較大差別.根據(jù)10批樣品測(cè)定數(shù)據(jù)，結(jié)果平均值為0.364%，最大值為0.582%，最小值為0.083%，根據(jù)測(cè)定結(jié)果建議本品蒼術(shù)素含量限度暫定為：本品按干燥品計(jì)算，含蒼術(shù)素計(jì)，不得少于0.08%.

表3 10批焦蒼術(shù)樣品有效成分含量測(cè)定數(shù)據(jù)Tab.3 The results of effective component of 10 batches of coked rhizoma atractylodis

2.5.2 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取蒼術(shù)素對(duì)照品4.01 mg稀釋至200 ml，加甲醇使溶解稀釋至刻度，搖勻即成母液.精密吸取上述對(duì)照品溶液1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl注入液相色譜儀，按前述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值取l g為底的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量取l g為底的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，蒼術(shù)素回歸方程y=1.0063x+7.064，R2=0.9998，測(cè)量結(jié)果詳見(jiàn)表4及圖4，表明蒼術(shù)素在0.02005～0.50125μg之間呈良好線(xiàn)性.

表4 線(xiàn)性關(guān)系測(cè)定結(jié)果Tab.4 The results of linear relation

圖4 線(xiàn)性關(guān)系圖Fig.4 The image of linear relation

2.5.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μl，按照各自色譜條件，分別在0、15及19小時(shí)進(jìn)樣一次，結(jié)果如表5所示，表明對(duì)照品溶液中各成分在19小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好.

表5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.5 The results of stability

2.5.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取蒼術(shù)素對(duì)照品6.35 mg溶于250 ml甲醇中，配制成蒼術(shù)素對(duì)照品溶液(0.0254 mg/ml)，取該對(duì)照品6份，每份進(jìn)樣10μl，峰面積及統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表6.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性較好.

表6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)Tab.6 The results of repeatability

3 結(jié)語(yǔ)

本研究工作結(jié)合了中國(guó)藥典的研究方法，使用顯微鑒別和薄層色譜分析法對(duì)焦蒼術(shù)做定性鑒別.同時(shí)對(duì)不同產(chǎn)地、不同批次的10批焦蒼術(shù)樣品進(jìn)行水分、總灰分、蒼術(shù)素有效成分含量進(jìn)行測(cè)定.結(jié)果顯示，由于生長(zhǎng)環(huán)境及可能炮制過(guò)程處理上的差異，致使不同樣品質(zhì)量數(shù)據(jù)有較大差別.為統(tǒng)籌兼顧全國(guó)市場(chǎng)上的焦蒼術(shù)品質(zhì)特征，規(guī)定焦蒼術(shù)炮制品水分含量應(yīng)不得超過(guò)17.0%，總灰分含量應(yīng)不得超過(guò)14.0%，蒼術(shù)素含量按干燥品計(jì)算含量應(yīng)不得少于0.08%.希望這些研究結(jié)果能為進(jìn)一步制定焦蒼術(shù)中藥飲片炮制標(biāo)準(zhǔn)做參考.