二維液相色譜法檢測(cè)嬰幼兒奶粉中的?；撬?/h1>

2019-06-10 03:48:10鄭國(guó)建沈龍?zhí)禅Q林毅侃王承平楊保剛

中國(guó)乳品工業(yè)訂閱 2019年4期 收藏

關(guān)鍵詞：牛磺酸水溶液奶粉

鄭國(guó)建，沈龍?zhí)禅Q，林毅侃，王承平，楊保剛

（上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)技術(shù)研究院，上海 200233)

0 引 言

牛磺酸(Taurine)又名2-氨基乙磺酸，是人體重要的氨基酸，可促進(jìn)大腦的損傷修復(fù)[1,2]、提高免疫力[3]、減輕炎癥反應(yīng)[4]、促進(jìn)視覺(jué)機(jī)能的發(fā)育[5]。

目前用于食品中牛磺酸測(cè)定的方法主要包括液相色譜法[6-11]和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[12-14]。由于食品中?；撬岷扛?，且液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀價(jià)格昂貴，所以主要使用液相色譜法，如國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB5009.169-2016[15]。該標(biāo)準(zhǔn)第一法為柱后衍生法。由于該方法使用的色譜柱價(jià)格高，且需要使用柱后衍生裝置，對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求較高，所以大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)準(zhǔn)中的第二法，既丹磺酰氯柱前衍生法。但在第二法中某些基質(zhì)樣品中的雜質(zhì)會(huì)對(duì)?；撬釞z測(cè)產(chǎn)生干擾。本研究將建立一種二維液相色譜法檢測(cè)嬰幼兒配方奶粉中的?；撬?，該方法具有準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料與試劑

?；撬針?biāo)準(zhǔn)品，丹磺酰氯為分析純，鹽酸甲胺為分析純，甲酸、三氟乙酸、甲醇、乙腈為色譜純，亞鐵氰化鉀、乙酸鋅為化學(xué)純，超純水（由Millipore Milli-Q超純水儀生產(chǎn)）。

1.2 儀器與設(shè)備

Thermo U 3000雙三元高效液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器(DAD)、熒光檢測(cè)器(FLD)和一個(gè)六通閥；Eppendorf 5804離心機(jī)；Wiggens Votex 3000渦旋振蕩儀。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

第一維色譜柱：Agilent XDB-C18：3.0 mm×150 mm，3.5μm；第二維色譜柱：Thermo Gold PFP(全氟苯基柱)：4.6 mm×150 mm，5μm。

A1和B1流動(dòng)相對(duì)應(yīng)泵1，A2和B2對(duì)應(yīng)泵2，流動(dòng)相A1為甲醇，流動(dòng)相A2為乙腈，流動(dòng)相B1為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%三氟乙酸水溶液，流動(dòng)相B2為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%甲酸水溶液。泵1的流速為0.4 mL/min，泵2的流速為1 mL/min；柱溫為35℃；進(jìn)樣量10μL；一維使用紫外檢測(cè)器，其檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；二維使用熒光檢測(cè)器，其激發(fā)波長(zhǎng)為330 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為530 nm。泵1和泵2的梯度如表1所示。

表1 二維液相色譜流動(dòng)相梯度

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(質(zhì)量濃度約50 mg/L)：精密稱量5 mg標(biāo)準(zhǔn)品用水定容到100 mL。分別準(zhǔn)確取適量上述儲(chǔ)備液，用水稀釋為質(zhì)量濃度2，5，10，15，20 mg/L的溶液。

1.3.3 樣品處理

樣品處理過(guò)程參照GB 5009.169-2016[15]第二法：準(zhǔn)確稱取1 g樣品(精確到0.1 mg)于50 mL容量瓶中，加入30 mL水，渦旋10 s，放入超聲振蕩器中超聲提取10min。加入1.0 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%亞鐵氰化鉀水溶液，渦旋混合，1.0 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%乙酸鋅水溶液，渦旋混合，用水定容至刻度，充分混勻。樣液于8 000 r/min下離心3 min。

準(zhǔn)確吸取1.00 mL上清液，1.00 mL濃度為80 mmol/L（pH值為9.5）碳酸鈉緩沖液，1.00 mL質(zhì)量濃度為1.5 g/L丹磺酰氯溶液于10 mL離心管中，渦旋10 s，于室溫避光處?kù)o置反應(yīng)2 h(1 h后振搖1次)，加入0.10 mL質(zhì)量濃度為20 mg/L鹽酸甲胺溶液渦旋混合，避光靜置至沉淀完全。取上清過(guò)0.22μm尼龍濾膜后進(jìn)液相色譜分析。

2 結(jié)果與分析

基于多種分離機(jī)理的多維色譜可用于復(fù)雜基質(zhì)中目標(biāo)化合物的分離和定量測(cè)定[16-24]。其中的二維色譜技術(shù)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)備要求低，已經(jīng)越來(lái)越多的應(yīng)用到食品分析中[16,24-26]。

實(shí)驗(yàn)對(duì)第二維色譜的的流動(dòng)相進(jìn)行了考察，分別考察了純水、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%三氟乙酸水溶液、以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%甲酸水溶液作為B2相。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在使用純水時(shí)牛磺酸的色譜峰峰寬較寬，且對(duì)稱性差；使用酸性溶液能明顯改善峰型，而使用0.1%甲酸溶液時(shí)牛磺酸的熒光響應(yīng)要大于在0.1%三氟乙酸水溶液中的響應(yīng)（色譜圖未給出）。所以最終選擇0.1%甲酸水溶液作為B2相。

2.1 二維色譜流路構(gòu)建與切換時(shí)間的確定。

2.1.1 閥切換時(shí)間的確定

為了保證將一維色譜柱中的?；撬崛壳懈畹降诙S色譜柱，首先使用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)一維色譜圖中的?；撬岢龇逦恢眠M(jìn)行確認(rèn)，如圖1所示。由圖1可以看出?；撬嵩谝痪S色譜柱的保留時(shí)間為4.7 min。因此將閥切換時(shí)間的設(shè)定在4.2 min和5.2 min。二維液相色譜的具體連接方法如圖2所示。在0~4.2 min，六通閥處于1、2連通狀態(tài)；在4.2~5.2 min，六通閥處于1和6連通狀態(tài)；5.2~15min，六通閥處于1和2連通狀態(tài)。

圖1 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)品一維色譜

圖2 二維液相系統(tǒng)連接示意圖

2.1.2 色譜柱的選擇

二維液相色譜既要考慮2個(gè)維度的體系的兼容性，又要考慮這2個(gè)維度存在一定的差異，因此該研究選用了C18作為第一色譜柱，PFP色譜柱作為第二色譜柱。在表1液相條件下，牛磺酸可以和雜質(zhì)得到很好的分離，如圖3所示。

圖3 樣品中牛磺酸的二維液相色譜色譜

2.2 線性關(guān)系和檢出限

使用儲(chǔ)備液，用水稀釋成不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，然后經(jīng)過(guò)和樣品一樣的衍生過(guò)程反應(yīng)后，過(guò)濾進(jìn)樣分析。以標(biāo)準(zhǔn)工作液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，該方法的線性相關(guān)系數(shù)r≥0.999。以3倍信噪比（S/N）計(jì)算方法的檢出限為0.02 mg/100g，以10倍信噪比(S/N)計(jì)算方法的定量限為0.05 mg/100g。GB5009.168-2016[18]第二法的定量限為0.1 mg/100g，該方法可以滿足日常嬰幼兒奶粉中?；撬岬亩啃枨?。

2.3 回收率和精密度

使用乳清粉進(jìn)行加標(biāo)回收率和精密度實(shí)驗(yàn)。

以定量限、1倍目標(biāo)值和1.5倍目標(biāo)值三個(gè)水平進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如表2所示。

由表2可知：該方法加標(biāo)回收率為97.8%~99.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.56%~3.25%。表明方法回收率和精密度良好。

2.4 實(shí)際樣品檢測(cè)

采用該方法和GB5009.168-2016第二法[18]對(duì)市售的6種嬰幼兒配方奶粉，1個(gè)部分水解配方奶粉，以及1個(gè)有機(jī)奶粉原料進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表3所示。

表3 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果 mg/100g

由表3可以看出：對(duì)于1~6號(hào)樣品采用兩種方法得到的結(jié)果基本一致，結(jié)果偏差在小于5%。說(shuō)明該方法在檢測(cè)普通嬰幼兒配方奶粉時(shí)和國(guó)標(biāo)方法具有很好一致性。

在檢測(cè)部分水解配方奶粉時(shí)，使用GB5009.168-2016第二法測(cè)得的結(jié)果為65.2 mg/100 g，按產(chǎn)品能量為2 000 k J/100 g計(jì)算，?；撬岬暮繛?.26 mg/100 kJ，超出國(guó)標(biāo)限量要求。使用該方法的測(cè)得值為1.84 mg/100 kJ，符合國(guó)標(biāo)限量要求。

對(duì)于有機(jī)奶粉原料樣品，我們從供應(yīng)商得知該樣品為還未添加?；撬岬脑戏?，其本底?；撬豳|(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)該很低。但是使用GB5009.168-2016第二法得到的數(shù)值為29.5 mg/100 g，明顯大于該方法得到的9.12 mg/100 g。

從水解配方奶粉和有機(jī)奶粉原料的數(shù)據(jù)可以進(jìn)一步說(shuō)明使用該方法可很好的消除某些特殊基質(zhì)樣品中的基質(zhì)干擾，得到比國(guó)標(biāo)方法更加準(zhǔn)確的?；撬岷?。

3 結(jié)論

本文建立了一種使用二維液相色譜檢測(cè)嬰幼兒配方奶粉中牛磺酸含量的檢測(cè)方法，對(duì)該方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，該方法在2~20 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性，線性相關(guān)系數(shù)r≥0.999；定量限為0.05 mg/100g；在 0.05 mg/100g，40 mg/100g，60 mg/100g三個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)水平的加標(biāo)回收在97.8%~99.0%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.56%~3.25%。使用該方法對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè)，證明該方法準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單，抗干擾能力強(qiáng)，適用于嬰幼兒奶粉中?；撬岬臏y(cè)定。

猜你喜歡

?；撬?/a>水溶液奶粉

?；撬嵴嬗杏脝幔?/a>

電腦報(bào)(2022年25期)2022-07-05 23:54:27

貓為什么喜歡吃老鼠

科普童話·學(xué)霸日記(2021年11期)2021-05-30 10:48:04

奶粉危機(jī)

兒童故事畫報(bào)·發(fā)現(xiàn)號(hào)趣味百科(2017年10期)2018-03-13 19:05:12

妹妹的奶粉錢

數(shù)學(xué)小靈通·3-4年級(jí)(2017年5期)2017-06-05 09:12:38

你家奶粉只能沖著喝?這些媽媽們把奶粉做成了這個(gè)樣子！

媽媽寶寶(2017年2期)2017-02-21 01:21:06

DMAC水溶液乙酸吸附分離過(guò)程

浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(工學(xué)版)(2016年9期)2016-06-05 09:20:57

聚焦水溶液中的三大守恒關(guān)系

中學(xué)生理科應(yīng)試(2016年2期)2016-05-30 14:23:28

TEA水溶液的流變性研究

廣東石油化工學(xué)院學(xué)報(bào)(2016年3期)2016-05-17 05:16:21

牛磺酸聯(lián)合維生素E治療非酒精性脂肪性肝病的效果觀察

中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥(2015年23期)2015-03-01 02:05:50

添加酸對(duì)HPP-SO2水溶液熱解吸的影響

應(yīng)用化工(2014年8期)2014-08-08 13:11:39

中國(guó)乳品工業(yè)2019年4期

中國(guó)乳品工業(yè)的其它文章

利用HeraclesⅡ超快速氣相電子鼻對(duì)不同品牌UHT全脂牛奶的快速鑒別研究

紫外殺菌技術(shù)在乳制品滅菌工藝中應(yīng)用研究進(jìn)展

干酪中的生物活性肽及其作用

我國(guó)及世界主要國(guó)家乳品相對(duì)密度的比較研究

酸性乳糖酶對(duì)奶粉中乳糖水解工藝的研究

高溫、高濕和光照對(duì)嬰幼兒配方乳粉影響分析