謝 婷，姜 靈，洪 波，王新譜，賈彥霞

(寧夏大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，銀川 750021)

煙粉虱Bemisiatabaci(Gennadius)又稱棉粉虱或甘薯粉虱，廣泛分布于熱帶、亞熱帶及溫帶地區(qū)，是一種重要的世界性害蟲(chóng)。該蟲(chóng)主要危害黃瓜、番茄、辣椒、西葫蘆等蔬菜以及棉花等眾多作物[1-2]。1889年，煙粉虱在希臘的煙草上首次被發(fā)現(xiàn)并報(bào)道[3]。在中國(guó)，對(duì)煙粉虱的最初記載是1949年[4]，目前全國(guó)各地均有發(fā)生，寄主約有74科900多種[5-6]。迄今為止，對(duì)煙粉虱的防治仍以化學(xué)防治為主，但是自20世紀(jì)80年代Prabhaker發(fā)現(xiàn)煙粉虱對(duì)馬拉硫磷等有機(jī)磷農(nóng)藥產(chǎn)生抗性以來(lái)，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)其對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯等農(nóng)藥均產(chǎn)生不同程度的抗性[7]。此外，不合理使用化學(xué)農(nóng)藥導(dǎo)致農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染和食品安全等問(wèn)題已不容小覷，而采用病原真菌防治害蟲(chóng)具有無(wú)污染、安全高效等優(yōu)點(diǎn)。因此，利用病原真菌來(lái)防治煙粉虱已成為國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者研究的熱點(diǎn)[8]。

球孢白僵菌Beauveriabassiana(Balsamo)作為一種廣譜性昆蟲(chóng)病原真菌，對(duì)農(nóng)業(yè)病蟲(chóng)害的防控具有重要作用[9]。其寄生范圍廣泛，能侵染15目149科700多種昆蟲(chóng)及6科10余種蜱螨類[10]。但由于其防效慢、花費(fèi)大、易受環(huán)境影響、應(yīng)用技術(shù)還不夠成熟等缺點(diǎn)不能廣泛投入使用[11]。而余素紅等[12]、姜靈等[13]研究表明，球孢白僵菌與一些殺蟲(chóng)劑復(fù)配對(duì)粉虱、薊馬、蚜蟲(chóng)等防治取得不錯(cuò)的效果。寧夏地區(qū)粉虱類害蟲(chóng)適生指數(shù)較高，蟲(chóng)害頻發(fā)，尤其對(duì)溫室蔬菜危害最為嚴(yán)重。近年來(lái)隨著寧夏地區(qū)蔬菜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，化學(xué)防治導(dǎo)致的農(nóng)藥殘留現(xiàn)象日益嚴(yán)重，因此生物防治的手段越來(lái)越受到人們的關(guān)注。本試驗(yàn)研究球孢白僵菌與8種殺蟲(chóng)劑的相容性以及球孢白僵菌與苦參堿復(fù)配對(duì)溫室煙粉虱的防治效果，以期為溫室煙粉虱綜合防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：球孢白僵菌粉劑，江西天人生態(tài)有限公司生產(chǎn)。

供試作物：黃瓜，品種為‘德?tīng)?號(hào)’，由寧夏天緣種業(yè)有限公司提供。黃瓜種植于溫室大棚，初花期為試驗(yàn)主要時(shí)期。

供試殺蟲(chóng)劑見(jiàn)表1。

表1 供試殺蟲(chóng)劑信息Table 1 Information of tested insecticides

1.2 8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌孢子萌發(fā)、菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響

1.2.1 孢子萌發(fā)的測(cè)定 用含w=0.05%吐溫80的無(wú)菌水充分洗脫球孢白僵菌孢子，制成數(shù)量濃度為1×107mL-1的孢子懸浮液。利用無(wú)菌水將殺蟲(chóng)劑配制成田間推薦用量、以及5倍和10倍稀釋濃度，并以w=0.05%吐溫80的無(wú)菌水為對(duì)照組，分裝至1.5 mL離心管中，各處理5個(gè)重復(fù)。搖床震蕩24 h后，觀察其孢子萌發(fā)量，計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率。

孢子萌發(fā)抑制率=(對(duì)照組孢子萌發(fā)數(shù)-處理組孢子萌發(fā)數(shù))/對(duì)照組孢子萌發(fā)數(shù)×100%

1.2.2 菌絲生長(zhǎng)的測(cè)定 吸取100 μL 3個(gè)濃度梯度的殺蟲(chóng)劑于PDA培養(yǎng)基上制成含毒平板，取20 μL孢子懸浮液置于含毒平板中央，以w=0.05%吐溫80的無(wú)菌水作為對(duì)照，在培養(yǎng)皿底部畫(huà)互相垂直的直線，培養(yǎng)10 d，每隔2 d測(cè)量其直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=(對(duì)照組菌落平均直徑-處理組菌落平均直徑)/對(duì)照組菌落平均直徑×100%

1.2.3 產(chǎn)孢的測(cè)定 用0.5 cm的打孔器在“1.2.2”節(jié)中球孢白僵菌的菌落中心至邊緣 1/2處，制出2個(gè)菌餅，以20 mL含w=0.05%吐溫80的無(wú)菌水充分洗脫孢子，4層紗布過(guò)濾，磁力懸浮器充分混勻，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，得孢子數(shù)量濃度，計(jì)算產(chǎn)孢抑制率。

產(chǎn)孢抑制率=(對(duì)照組產(chǎn)孢量-處理組產(chǎn)孢量)/對(duì)照組產(chǎn)孢量×100%

1.3 苦參堿與球孢白僵菌對(duì)煙粉虱的室內(nèi)毒力測(cè)定

利用含w=0.05%的吐溫80的無(wú)菌水將苦參堿配制成3.25、6.5、13、26和52 mg/L質(zhì)量濃度梯度。浸液法測(cè)定對(duì)煙粉虱的毒力：取帶有 2～3齡若蟲(chóng)的黃瓜葉片，每個(gè)葉片保留30頭，浸泡10 s，晾干后用保濕棉球包住葉柄，置于培養(yǎng)皿中，保鮮膜封口，膜上扎一些小孔，置光照培養(yǎng)箱(25±1)℃，于相對(duì)濕度80%、L∶D=14 h∶10 h下培養(yǎng)48 h，記錄若蟲(chóng)死亡數(shù)，計(jì)算LC50。

用同樣方法將球孢白僵菌配制成系列數(shù)量濃度 1×107、1×106、1×105和1×104mL-1，測(cè)定其對(duì)煙粉虱的毒力，方法同上。培養(yǎng)5 d后，記錄若蟲(chóng)死亡數(shù)，計(jì)算LC50。

1.4 苦參堿與球孢白僵菌對(duì)煙粉虱的聯(lián)合毒力

將LC50的球孢白僵菌與LC50的苦參堿以體積比9∶1、4∶1、1∶1、1∶4、1∶9混合均勻，浸液法測(cè)定對(duì)煙粉虱若蟲(chóng)的致病力，方法同上。培養(yǎng)5 d后記錄死亡粉虱數(shù)，計(jì)算LC50、置信區(qū)間、毒力回歸方程及共毒系數(shù)。

毒力指數(shù)(TI)=標(biāo)準(zhǔn)藥劑的LC50/供試藥劑的LC50×100

混合藥劑的毒力指數(shù)(ATI)=標(biāo)準(zhǔn)藥劑的LC50/混合藥劑的LC50×100

混劑理論毒力指數(shù)(TTI)=TI(a)×a在混劑中所占比例+TI(b)×b在混劑中所占比例

共毒系數(shù)(CTC)=混劑實(shí)際毒力指數(shù)AII/混劑理論毒力指數(shù)TTI×100

1.5 苦參堿與球孢白僵菌混配對(duì)煙粉虱的田間防效

試驗(yàn)設(shè)苦參堿推薦質(zhì)量濃度、1×107數(shù)量濃度的球孢白僵菌和苦參堿+球孢白僵菌(4∶1)3個(gè)處理，各處理3個(gè)重復(fù)，共設(shè)9個(gè)小區(qū)，對(duì)照組(CK)施用相同用量的w=0.05%吐溫80的清水，按照隨機(jī)區(qū)組排列。利用3WBD-18背負(fù)式電動(dòng)噴霧器噴霧，每個(gè)小區(qū)噴施稀釋后的藥液 6 L。

調(diào)查和統(tǒng)計(jì)方法：施藥前1 d調(diào)查煙粉虱基數(shù)，藥后1、3、5、7、9和14 d調(diào)查活蟲(chóng)數(shù)，調(diào)查時(shí)小區(qū)內(nèi)5點(diǎn)取樣，每點(diǎn)標(biāo)定1株，統(tǒng)計(jì)整株成蟲(chóng)的數(shù)量，計(jì)算蟲(chóng)口減退率及校正防效。

蟲(chóng)口減退率=(處理前對(duì)照蟲(chóng)量-處理后對(duì)照蟲(chóng)量)/(處理前對(duì)照蟲(chóng)量)×100%

校正防效=[1-(處理前對(duì)照蟲(chóng)量×處理后處理蟲(chóng)量)/(處理后對(duì)照蟲(chóng)量×處理前處理蟲(chóng)量)]×100%

1.6 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2010和DPS 7.05軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，以Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行多重 比較。

表2 8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌孢子萌發(fā)的影響Table 2 Effect of eight insecticides on spore germination of B.bassiana

注：1c.推薦濃度；0.2c.5倍稀釋濃度；0.1c.10倍稀釋濃度；數(shù)據(jù)為“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”。同列不同大寫(xiě)字母及同行不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

Notes：1c.Recommended concentration; 0.2c.5 times dilution concentration; 0.1c.10 times dilution concentration.Data in the table is mean±SE.Different uppercase letters in the same column and lowercase letters in the same row indicate significant difference(P< 0.05),respectively.The same below.

2 結(jié)果與分析

2.1 8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌孢子萌發(fā)、菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響

由表2可以看出，8種殺蟲(chóng)劑隨著稀釋倍數(shù)的增加，對(duì)球孢白僵菌孢子萌發(fā)的抑制率逐漸減小，處理間差異顯著。在田間推薦濃度下，各殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌的孢子萌發(fā)抑制率均較高，除苦參堿和噻嗪酮外均在80%以上。在5倍稀釋濃度下，聯(lián)苯菊酯、烯啶蟲(chóng)胺和吡丙醚的抑制率高于70%，其他殺蟲(chóng)劑的抑制率從高到底依次為阿維菌素、噻嗪酮、印楝素、乙基多殺菌素和苦參堿。在10倍稀釋濃度下，聯(lián)苯菊酯的抑制率最高，為 60.37%，印楝素和苦參堿最低，分別為17.32%和14.44%。

由表3可以看出，8種殺蟲(chóng)劑隨著稀釋倍數(shù)增加，對(duì)球孢白僵菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率逐漸減小，各處理間存在顯著差異。在不同濃度下，各殺蟲(chóng)劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率均較低。在田間推薦濃度下，各殺蟲(chóng)劑抑制率均為30%～50%。在5倍稀釋濃度下，各殺蟲(chóng)劑的抑制率均低于40%，苦參堿最低，為18.96%。在10倍稀釋濃度下，各殺蟲(chóng)劑的抑制率均小于30%，苦參堿最小，為10.17%。

由表4可以看出，8種殺蟲(chóng)劑隨著稀釋倍數(shù)增加，對(duì)球孢白僵菌產(chǎn)孢的抑制率逐漸減小，各處理間存在顯著差異。在田間推薦濃度下，殺蟲(chóng)劑對(duì)產(chǎn)孢的抑制率較高，均在43%以上。在5倍稀釋濃度下，乙基多殺菌素和苦參堿的抑制率較低，分別為25.91%和25.48%。在10倍稀釋濃度下，聯(lián)苯菊酯、烯啶蟲(chóng)胺、吡丙醚抑制率為 43.68%～34.26%，其他藥劑均在25%以下，其中苦參堿最低，為12.63%。

2.2 苦參堿、球孢白僵菌及其混配對(duì)粉虱若蟲(chóng)的室內(nèi)聯(lián)合毒力

8種殺蟲(chóng)劑與球孢白僵菌相容性試驗(yàn)表明，苦參堿對(duì)球孢白僵菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率、產(chǎn)孢抑制率、孢子萌發(fā)抑制率均最低，因此選擇苦參堿與球孢白僵菌以不同比例混配測(cè)定其對(duì)粉虱若蟲(chóng)的聯(lián)合毒力。

由表5可以看出，苦參堿和球孢白僵菌對(duì)煙粉虱若蟲(chóng)的LC50分別為13.35 mg/L和7.86×106mL-1，二者不同體積比混配的共毒系數(shù)均大于120，其中以9∶1和4∶1混配的最大，分別為224和293，表明其增效作用最顯著；隨著苦參堿濃度的降低，共毒系數(shù)逐漸減小，當(dāng)以1∶9混合時(shí)，共毒系數(shù)最低為160。

表3 8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌菌絲生長(zhǎng)的影響Table 3 Effect of eight insecticides on mycelial growth of B.bassiana

表4 8種殺蟲(chóng)劑對(duì)球孢白僵菌產(chǎn)孢的影響Table 4 Effect of eight insecticides on sporulation of B.bassiana

表5 苦參堿與球孢白僵菌對(duì)煙粉虱若蟲(chóng)的聯(lián)合毒力Table 5 The bioassay results of matrine with B.bassiana

注：y為觀察機(jī)率值，x為計(jì)量對(duì)數(shù)。

Note:y.the observation probability value;x.the logarithm measurement.

2.3 苦參堿與球孢白僵菌混配對(duì)煙粉虱的田間防效

由表6可以看出，用藥1 d后，苦參堿的防效最高，為70.57%，球孢白僵菌與苦參堿混配的防效為66.32%，單獨(dú)使用球孢白僵菌的防效為 49.92%。在防治過(guò)程中，球孢白僵菌與苦參堿混合使用的防效在9 d后達(dá)到最高，防效為 75.81%，在14 d后防效降至68.12%。單獨(dú)球孢白僵菌在第9天后防效最高，為65.36%。由此看出，菌藥混合的防效均優(yōu)于單獨(dú)使用苦參堿或菌株的防治效果，且菌藥混合使用持效性強(qiáng)。

表6 低用量苦參堿與球孢白僵菌的混配對(duì)煙粉虱的田間防效Table 6 Field control effects of B.tabaci after used of mixed agentia of matrine with B.bassiana

注：同列數(shù)據(jù)后不同大寫(xiě)字母和小寫(xiě)字母分別表示在0.01和0.05水平下不同處理間的差異顯著性。

Notes:Capital letters and small letters in the same column indicate significant difference among different treatment groupsat 0.01 and 0.05 levels,respectively.

3 討 論

中國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中過(guò)度依賴化學(xué)農(nóng)藥現(xiàn)象非常普遍，從全國(guó)來(lái)看，2015年農(nóng)藥使用量約180.7萬(wàn)t，約占世界總用量的一半。農(nóng)藥過(guò)量使用不僅拉高農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)成本，而且對(duì)土壤、空氣、水等造成嚴(yán)重污染，從而給人畜健康帶來(lái)極大危害。因此亟需找到環(huán)境友好的化學(xué)農(nóng)藥替代品或替代手段來(lái)解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中出現(xiàn)的病蟲(chóng)害問(wèn)題。生物防治作為一種安全有效的防治手段，近幾年越來(lái)越受到人們的關(guān)注[14-16]。但是單一使用生物防治具有防效慢、受外部環(huán)境條件影響大、不能應(yīng)對(duì)緊急病蟲(chóng)害的發(fā)生等局限性。蟲(chóng)生真菌與殺蟲(chóng)劑的復(fù)配使用不僅可以加快防效，還能降低農(nóng)藥用量[17-18]，因而成為研究的 熱點(diǎn)。

本試驗(yàn)在10倍稀釋濃度下，苦參堿對(duì)球孢白僵菌的孢子萌發(fā)抑制率、產(chǎn)孢抑制率和菌絲生長(zhǎng)抑制率均最低，分別為14.44%、12.63%和 10.17%，這與王定鋒等[18]、熊琦等[19]和曹偉平等[20]研究結(jié)果相一致。本試驗(yàn)表明，苦參堿與球孢白僵菌有協(xié)同促進(jìn)作用，與張英財(cái)?shù)萚21]和Purwar等[22]的研究結(jié)果相同。用苦參堿和球孢白僵菌進(jìn)行毒力測(cè)定和大田防效試驗(yàn)，兩者以不同體積比混合后的共毒系數(shù)均大于120，說(shuō)明混合藥劑都存在明顯的增效作用。秦長(zhǎng)生等[23]、王峰等[24]和曹偉平等[25]研究表明球孢白僵菌與化學(xué)殺蟲(chóng)劑混用具有良好的協(xié)同增效作用。

綜上所述，球孢白僵菌與稀釋10倍濃度下的殺蟲(chóng)劑混用防治煙粉虱效果最好，且在參試的8種殺蟲(chóng)劑中，苦參堿與球孢白僵菌的協(xié)同促進(jìn)作用最顯著。說(shuō)明化學(xué)殺蟲(chóng)劑和真菌制劑復(fù)配使用可以提高殺蟲(chóng)效果，從而減少農(nóng)藥用量，降低昆蟲(chóng)抗藥性，對(duì)環(huán)境保護(hù)和農(nóng)業(yè)生物防治具有重要 意義。