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    熒光原位雜交技術(shù)聯(lián)合尿脫落細(xì)胞學(xué)、膀胱腫瘤抗原對(duì)尿路上皮細(xì)胞腫瘤的診斷效能分析

    2019-06-04 07:04:12梅玉峰王春陽魏寶珍沈利華
    關(guān)鍵詞:原位雜交細(xì)胞學(xué)尿路

    熊 鉆,梅玉峰,王春陽,魏寶珍,劉 萍,王 亞,沈利華,劉 慶

    (1.鄂州市鄂鋼醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖北鄂州 436000;2.鄂州市婦幼保健院檢驗(yàn)科,湖北鄂州 436000)

    上尿路上皮細(xì)胞癌是我國(guó)男性泌尿生殖系統(tǒng)最為常見的惡性腫瘤,因臨床癥狀不是十分典型,很容易被漏診而延誤治療,導(dǎo)致患者預(yù)后較差[1-2]。上尿路上皮細(xì)胞癌的診斷方法較多,包括尿脫落細(xì)胞學(xué)、血清膀胱腫瘤抗原(BTA)、影像學(xué)(尿路造影、CT和磁共振成像等)、內(nèi)窺鏡檢查等。BTA及尿脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)雖對(duì)腫瘤具有明確的提示作用,但靈敏度較低;影像學(xué)檢查對(duì)上尿路上皮細(xì)胞癌的分期具有明確的指導(dǎo)意義,但對(duì)較小體積癌、早期癌的診斷靈敏度較低;內(nèi)窺鏡則是一種侵入性手術(shù),將其納入常規(guī)檢查較為困難,故提高上尿路上皮細(xì)胞癌的早期診斷率、減少無創(chuàng)性操作一直是近年來上尿路上皮細(xì)胞癌的研究熱點(diǎn)。目前,臨床常使用的檢測(cè)方法均不能完全滿足此目的[3-4]。最新的臨床研究表明,上尿路上皮細(xì)胞癌的發(fā)生與某些基因位點(diǎn)缺失、染色體數(shù)目異常等密切相關(guān)[5-6]。UroVysion熒光原位雜交技術(shù)可準(zhǔn)確、清晰地檢測(cè)腫瘤細(xì)胞染色體改變,或許可成為早期診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的一種新技術(shù)。故本研究選取泌尿外科經(jīng)膀胱鏡活檢確診為尿路上皮細(xì)胞癌患者105例作為研究對(duì)象,分別進(jìn)行UroVysion熒光原位雜交技術(shù)、尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA檢測(cè),比較不同方法對(duì)上尿路上皮細(xì)胞癌診斷的差異,并分析了UroVysion熒光原位雜交技術(shù)的診斷效能,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 本研究取得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的審批同意。選取2014-2017年鄂州市鄂鋼醫(yī)院經(jīng)膀胱鏡活檢確診為上尿路上皮細(xì)胞癌患者105例作為觀察組,選取同期鄂州市鄂鋼醫(yī)院健康體檢者100例作為對(duì)照組。與兩組研究對(duì)象講明本研究目的,并獲得同意后共同簽訂知情書。兩組研究對(duì)象均分別接受UroVysion熒光原位雜交技術(shù)及尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA檢查。觀察組患者中男73例,女32例;平均年齡(51.58±6.37)歲;高分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌42例,低分級(jí)乳頭狀尿路上皮癌31例,低度惡性傾向尿路上皮乳頭狀癌32例。對(duì)照組研究對(duì)象中男64例,女36例;平均年齡(51.24±6.78)歲。

    1.2方法

    1.2.1采集尿液標(biāo)本 使用清潔、干燥的一次性大口杯的容器留取兩組研究對(duì)象50 mL以上的新鮮晨尿,為防止時(shí)間較久的尿液成分會(huì)發(fā)生變化、出現(xiàn)細(xì)胞溶解或其他原因?qū)е碌奈廴?,最好在留取? h內(nèi)送檢,每份樣本分為2份,分別進(jìn)行UroVysion熒光原位雜交技術(shù)及尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查。留取尿標(biāo)本過程中防止精液、月經(jīng)血、糞便、白帶等摻入,并準(zhǔn)確區(qū)分標(biāo)記研究對(duì)象的個(gè)人信息。

    1.2.2采集血液標(biāo)本 留取兩組研究對(duì)象靜脈血5 mL,進(jìn)行BTA檢查。

    1.2.3利用對(duì)照組設(shè)立正常閾值[7]對(duì)對(duì)照組研究對(duì)象的尿液標(biāo)本進(jìn)行UroVysion熒光原位雜交技術(shù)檢查,每份標(biāo)本采用9p21區(qū)帶探針和17、7、3號(hào)染色體著絲粒探針組合計(jì)算100個(gè)尿路上皮細(xì)胞,統(tǒng)計(jì)出現(xiàn)正常細(xì)胞數(shù)目、不同類型異常細(xì)胞數(shù)目的百分比,建立參考閾值。檢測(cè)指標(biāo)若大于閾值計(jì)為陽性,小于閾值計(jì)為陰性。

    1.2.4結(jié)果判讀

    1.2.4.1尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查 取新鮮尿液40 mL,離心后將沉淀制成細(xì)胞涂片,常規(guī)蘇木精-伊紅染色后使用顯微鏡觀察。每例研究對(duì)象均接受3次檢測(cè),發(fā)現(xiàn)1次異常細(xì)胞即判斷為陽性。

    1.2.4.2UroVysion熒光原位雜交技術(shù)檢查 當(dāng)1個(gè)位點(diǎn)有2種以上出現(xiàn)異常,如p16有3信號(hào)點(diǎn)異?;?信號(hào)點(diǎn)異常,即計(jì)為陽性,任意2個(gè)以上位點(diǎn)出現(xiàn)異常,如7號(hào)或3號(hào)染色體出現(xiàn)非整倍增加,計(jì)為陽性。若只有1個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)1種異常,需重新檢測(cè)判斷。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示,采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.12種方法診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的靈敏度、特異度比較 UroVysion熒光原位雜交技術(shù)診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的靈敏度及特異度分別為81.90%、92.00%,尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的靈敏度及特異度分別為37.14%、93.00%,2種方法診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的靈敏度比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而特異度比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1~3。

    表1 UroVysion熒光原位雜交技術(shù)診斷上尿路上皮 細(xì)胞癌的靈敏度、特異度

    表2 尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA診斷上尿路上皮 細(xì)胞癌的靈敏度、特異度

    表3 2種方法診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的 靈敏度、特異度比較[n(%)]

    2.22種方法對(duì)上尿路上皮細(xì)胞癌的分級(jí)檢測(cè)分析 2種方法隨上尿路上皮細(xì)胞癌分級(jí)的升高檢測(cè)陽性率逐漸升高,且各類型上尿路上皮細(xì)胞癌比較,UroVysion熒光原位雜交技術(shù)檢出率明顯高于尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

    表4 2種方法對(duì)上尿路上皮細(xì)胞癌的分級(jí) 檢測(cè)分析[n(%)]

    注:與尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA檢測(cè)比較,P<0.05

    2.3聯(lián)合3種方法對(duì)上尿路上皮細(xì)胞癌的檢測(cè)分析 聯(lián)合3種方法診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的靈敏度、準(zhǔn)確度均明顯高于單獨(dú)UroVysion熒光原位雜交技術(shù)、尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA檢測(cè),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

    表5 聯(lián)合3種方法對(duì)上尿路上皮細(xì)胞癌的檢測(cè)分析(%)

    注:與聯(lián)合3種方法檢測(cè)比較,*P<0.05

    3 討 論

    上尿路上皮細(xì)胞癌是一種較為常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤,由于臨床癥狀不典型,常導(dǎo)致就診時(shí)腫瘤分期已相對(duì)靠后。雖然上尿路上皮細(xì)胞癌可經(jīng)手術(shù)完全切除,但術(shù)后復(fù)發(fā)率較高,高達(dá)45.00%以上[8]。因此,如能對(duì)上尿路上皮細(xì)胞癌進(jìn)行早期診斷,對(duì)患者的預(yù)后十分關(guān)鍵。臨床BTA、尿脫落細(xì)胞學(xué)、內(nèi)窺鏡檢查是診斷上尿路上皮細(xì)胞癌較常用的方法。但由于尿脫落細(xì)胞學(xué)靈敏度較低,尤其是低級(jí)別腫瘤的靈敏度更低。

    診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的腫瘤標(biāo)記物除常用的BTA,還有人核基質(zhì)蛋白22(NMP22)、Im-munocyt等,相關(guān)研究表明,對(duì)可疑上尿路上皮細(xì)胞癌患者進(jìn)行BTA檢查和膀胱鏡檢,BTA的特異度為85.90%,靈敏度不超過60.00%,故BTA不能作為早期診斷的確診依據(jù),不能取代膀胱鏡,而只能是一種篩選手段;診斷上尿路上皮細(xì)胞癌的“金標(biāo)準(zhǔn)”為內(nèi)窺鏡檢查,其靈敏度可達(dá)84.80%,但因其操作屬侵入有創(chuàng)性、檢測(cè)費(fèi)用昂貴等缺點(diǎn),不易在門診對(duì)所有患者普遍使用[9,11]。因此,探索一種靈敏度及特異度均較高、創(chuàng)傷小的檢查測(cè)方法是上尿路上皮腫瘤早期診斷的研究熱點(diǎn)問題。

    UroVysion熒光原位雜交技術(shù)可對(duì)9p21區(qū)帶和17、7、3號(hào)染色體著絲粒進(jìn)行檢測(cè),分別針對(duì)的是p16基因、HER2基因、EGFR基因和RAF1基因,最新研究表明,上尿路上皮細(xì)胞癌的發(fā)生與p16基因、HER2基因、EGFR基因和RAF1基因密切相關(guān),而膀胱尿路上皮癌與上尿路上皮細(xì)胞癌細(xì)胞核型改變一致,故提出可使用UroVysion熒光原位雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)[12-13]。

    UroVysion熒光原位雜交技術(shù)可通過4種熒光標(biāo)記的DNA探針檢測(cè)腫瘤細(xì)胞染色體的改變情況,具有一定的可行性及可操作性[14-15]。近年來,國(guó)內(nèi)外大量臨床研究應(yīng)用UroVysion熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)上尿路上皮細(xì)胞癌,發(fā)現(xiàn)其靈敏度高于BTA、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查,且特異性差異不大[16,18]。2001年UroVysion熒光原位雜交技術(shù)被美國(guó)食品和藥物管理局認(rèn)證可用于檢測(cè)上尿路上皮細(xì)胞癌的術(shù)后復(fù)查,而2005年時(shí)便被指南更新,批準(zhǔn)用于無上尿路上皮細(xì)胞癌病史的鏡下或肉眼血尿患者中診斷上尿路上皮細(xì)胞癌[19-20]。

    本研究選取2014-2017年鄂州市鄂鋼醫(yī)院泌尿外科經(jīng)膀胱鏡活檢確診為尿路上皮細(xì)胞癌的患者105例作為研究對(duì)象,分別進(jìn)行UroVysion熒光原位雜交技術(shù)、尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA檢測(cè),結(jié)果顯示,UroVysion熒光原位雜交技術(shù)診斷尿路上皮細(xì)胞癌的靈敏度高達(dá)81.90%,明顯高于尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA檢測(cè),且2種方法診斷尿路上皮細(xì)胞癌的特異度相似,說明前者具有較高的診斷效能。本研究在隨后的細(xì)化討論中發(fā)現(xiàn),UroVysion熒光原位雜交技術(shù)也可用于上尿路上皮細(xì)胞癌的分級(jí)診斷,且惡性程度越高,診斷靈敏度越高。最后將3種方法聯(lián)合分析發(fā)現(xiàn),聯(lián)合3種方法確診為尿路上皮細(xì)胞癌的靈敏度、準(zhǔn)確度均明顯高于單獨(dú)使用UroVysion熒光原位雜交技術(shù)、尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA檢測(cè)。

    4 結(jié) 論

    UroVysion熒光原位雜交技術(shù)因其技術(shù)特點(diǎn)尚不能完全取代內(nèi)鏡診斷,建議UroVysion熒光原位雜交技術(shù)、尿脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合BTA對(duì)可疑患者進(jìn)行篩查,在可保證獲得較高診斷水平的基礎(chǔ)上節(jié)約成本、減少內(nèi)鏡檢查次數(shù)、減輕患者痛苦,值得臨床推薦應(yīng)用。

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