結(jié)直腸癌患者血清miR-106b-5p水平及臨床意義

邱 敏,李森娟,凌怡庭,沈桂鑫,曹鴻峰

(1.浙江省嘉興市第二醫(yī)院肛腸科 314000;2.浙江省人民醫(yī)院肛腸外科，杭州 310013)

結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，發(fā)病率和病死率居高不下，早期結(jié)直腸癌大多沒有明顯臨床癥狀，多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已為晚期，術(shù)后5年生存率較低[1]。結(jié)直腸癌的早期診斷缺少靈敏度和特異度較高的指標(biāo)[2]。miR-106b是miR-106b-25家族成員，在腎癌、食管癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá)，具有調(diào)控腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)化、侵襲、遷移等功能[3-4]，但其在結(jié)直腸癌中的意義尚不十分清楚。本文對結(jié)直腸癌患者血清miR-106b-5p水平及其意義進(jìn)行研究，為臨床提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇浙江省嘉興市第二醫(yī)院肛腸科2015年1月至2017年12月收治的60例結(jié)直腸癌患者作為結(jié)直腸癌組，同期60例健康體檢者作為對照組。60例結(jié)直腸癌患者均進(jìn)行手術(shù)治療，手術(shù)前后均進(jìn)行miR-106b-5p水平測定。納入標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)直腸癌患者均為行首次手術(shù)治療，術(shù)前未進(jìn)行放化療等其他治療的初診患者，均經(jīng)病理學(xué)明確診斷為結(jié)直腸癌；對照組身體健康，無惡性腫瘤病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病、高血壓、肝腎疾病、心腦血管疾病等慢性疾病史者，嚴(yán)重?zé)熅剖群谜摺＝Y(jié)直腸癌組結(jié)腸癌24例，直腸癌36例；腫瘤位于左半結(jié)直腸45例，右半結(jié)直腸15例；患者年齡(59.32±4.35)歲；男42例，女18例；腫瘤直徑小于或等于5 cm者26例，腫瘤直徑大于5 cm者34例；臨床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期21例，Ⅲ期25例，Ⅳ期2例；高分化25例，中分化21例，低分化14例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移5例；浸潤深度：T1 12例，T2 14例，T3 16例，T4 18例。對照組患者年齡(59.45±4.16)歲；男38例，女22例，結(jié)直腸癌組和對照組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2主要試劑 引物由上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司設(shè)計(jì)合成，實(shí)時熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)儀器及相關(guān)試劑盒購自美國Thermo Fisher公司。

1.3方法 收集患者性別、年齡、臨床病理特點(diǎn)及血清癌胚抗原(CEA)水平等臨床資料。對照組患者體檢當(dāng)日清晨抽取外周靜脈血4 mL，結(jié)直腸癌患者抽取術(shù)前及術(shù)后1周外周靜脈血4 mL，3 000 r/min離心10 min，取上清液，提取血清中總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件為37 ℃ 60 min，95 ℃ 5 min，以cDNA為模板，采用熒光定量PCR法測定血清miR-106b-5p水平，miR-106b-5p引物序列為5′-AAA GUG CUG ACA GUG CAG-3′。反應(yīng)條件為95 ℃ 3 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，共50個循環(huán)，選U6為內(nèi)參基因，U6 snRNA引物序列為5′-TTC GTG AAG CGT TCC ATA TTT T-3′。血清miR-106b-5p相對表達(dá)量以2-ΔΔCt表示。

2 結(jié) 果

2.1血清miR-106b-5p和CEA水平比較 結(jié)腸癌組和直腸癌組血清miR-106b-5p、CEA水平高于對照組(P<0.05)，結(jié)腸癌組和直腸癌組血清miR-106b-5p、CEA水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組患者血清miR-106b-5p和CEA水平比較

a:P<0.05，與結(jié)腸癌組比較;b:P<0.05,與直腸癌組比較

2.2結(jié)腸癌組和直腸癌組患者手術(shù)前后血清miR-106b-5p和CEA水平比較 結(jié)腸癌組和直腸癌組患者手術(shù)后血清miR-106b-5p和CEA水平均低于手術(shù)前(P<0.05)。結(jié)腸癌組和直腸癌組之間手術(shù)前后血清miR-106b-5p和CEA水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.3血清miR-106b-5p診斷結(jié)直腸癌的ROC曲線分析 血清miR-106b-5p診斷結(jié)直腸癌的ROC曲線下面積為0.845(95%CI：0.771～0.954；P<0.01)，血清miR-106b-5p對結(jié)直腸癌的最佳診斷閾值為2.08，敏感度為83.7%，特異度為82.1%，見圖1。

2.4血清miR-106b-5p水平與結(jié)直腸癌臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系 血清miR-106b-5p水平與結(jié)直腸癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者血清miR-106b-5p水平高；血清miR-106b-5p水平與結(jié)直腸癌患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度、位置無顯著相關(guān)性(P>0.05)，見表3。

表2 結(jié)腸癌組和直腸癌組患者手術(shù)前后血清miR-106b-5p和CEA水平比較

圖1 血清miR-106b-5p診斷結(jié)直腸癌的ROC曲線

表3 血清miR-106b-5p水平與結(jié)直腸癌臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系

項(xiàng)目nmiR-106b-5p相對表達(dá)量tP年齡(歲)1.0070.318 ≤60393.53±0.51 >60213.68±0.62性別0.4160.679 男423.66±0.62 女183.59±0.54腫瘤直徑(cm)0.8620.392 ≤5263.57±0.64 >5343.71±0.61臨床分期6.274<0.01 Ⅰ～Ⅱ333.12±0.56 Ⅲ～Ⅳ274.19±0.76分化程度0.7620.449 高253.55±0.69 中、低353.69±0.71淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9.466<0.01 是224.41±0.74 否382.92±0.48遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移8.304<0.01 是54.58±0.61 否552.82±0.44浸潤深度1.0160.314

續(xù)表3 血清miR-106b-5p水平與結(jié)直腸癌臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系

3 討 論

隨著生活水平的提高，結(jié)直腸癌的發(fā)病率有上升趨勢，盡管結(jié)直腸癌的手術(shù)技術(shù)不斷提高、治療方法不斷進(jìn)步，仍有不少結(jié)直腸癌患者轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患者預(yù)后，因此尋找結(jié)直腸癌有效的早期診斷指標(biāo)具有重要意義[5]。血清癌胚抗原水平是最早發(fā)現(xiàn)的結(jié)直腸癌患者的血清標(biāo)志物，但癌胚抗原特異性比較低，在多數(shù)惡性腫瘤中具有不同程度升高，對結(jié)直腸癌的診斷價值不大，因此尋找敏感度和特異度比較高的結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物是提高結(jié)直腸癌早期診斷水平的重要手段之一[6-7]。近年來，隨著對miRNA研究的深入，發(fā)現(xiàn)循環(huán)血中miRNA在結(jié)直腸癌的早期診斷及預(yù)后評估等方面具有重要作用[8-9]。

miR-106b位于人類7q22染色體上，可與靶mRNA的3′非翻譯區(qū)結(jié)合，通過抑制mRNA翻譯或誘導(dǎo)mRNA降解調(diào)節(jié)基因表達(dá)[10-11]；miR-106b在多種腫瘤中表達(dá)水平升高，和惡性腫瘤的細(xì)胞生存、腫瘤生長、新生血管生成等關(guān)系密切[12-14]，如劉俊麗等[15]研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組織中miR-106b水平高表達(dá)，與鼻咽癌病灶內(nèi)細(xì)胞周期和侵襲關(guān)系密切；肖長艷等[16]研究發(fā)現(xiàn)miR-106b在食管鱗癌中呈高表達(dá)，與食管鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后關(guān)系密切，可作為食管鱗癌診斷和預(yù)后的標(biāo)志物；邵琳等[17]研究發(fā)現(xiàn)miR-106b在卵巢漿液性癌組織中高表達(dá)，miR-106b在卵巢漿液性癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲。上述研究表明miR-106b在多種惡性腫瘤中高表達(dá)。miR-106b可通過與其靶基因結(jié)合調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化及凋亡等過程，如桂連等[18]研究發(fā)現(xiàn)miR-106b可通過調(diào)控胰島素分泌細(xì)胞(IPCs)誘導(dǎo)分化過程中Ngn3的表達(dá)；史文博等[19]研究發(fā)現(xiàn)miR-106b可通過靶向調(diào)節(jié)BTG3的表達(dá)調(diào)控非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖和凋亡。結(jié)直腸癌為常見的消化道惡性腫瘤，miR-106b與結(jié)直腸癌的關(guān)系如何尚不十分清楚，本文對結(jié)直腸癌患者血清miR-106b-5p水平進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者血清miR-106b-5p水平升高，結(jié)直腸癌患者治療后血清miR-106b-5p水平下降；血清miR-106b-5p診斷結(jié)直腸癌的ROC曲線下面積為0.845，敏感度為83.7%，特異度為82.1%；血清miR-106b-5p水平與結(jié)直腸癌的臨床分期和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。miR-106b-5p水平與結(jié)直腸癌的臨床分期和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，考慮可能為miR-106b-5p與其相關(guān)的靶基因結(jié)合調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲，從而在結(jié)直腸癌的臨床分期和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。至于miR-106b-5p通過與哪種靶基因結(jié)合調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞生長和侵襲，以及通過哪種途徑參與結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長和侵襲過程尚需今后在體內(nèi)外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中深入研究。

綜上所述，miR-106b-5p參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展，miR-106b-5p有望成為結(jié)直腸癌早期診斷的標(biāo)志物。