病毒性心肌炎患兒血清炎性細(xì)胞因子和高遷移率族蛋白1水平變化

王 茜,姜 紅,朱 聚,熊海英

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院 兒科,湖北 武漢430022)

病毒性心肌炎是兒科常見疾病，近年的發(fā)病率有逐年增高趨勢(shì)[1]。我國兒童病毒性心肌炎總發(fā)病率18.27/10萬，患病率21.83/10萬。在初生至17歲的猝死者中17%有心肌病理改變，在學(xué)齡兒童猝死者中有21%患有心肌炎。病毒性心肌炎的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前認(rèn)為與炎性細(xì)胞因子、免疫功能紊亂密切相關(guān)。高遷移率族蛋白1(HMGB1)是近年發(fā)現(xiàn)的一種重要的炎癥介質(zhì)和致炎細(xì)胞因子[2]，其與病毒性心肌炎的作用未見報(bào)道。本研究通過聯(lián)合檢測病毒性心肌炎患兒血清HMGB1和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，探討其在病毒性心肌炎發(fā)病中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年1月-2018年1月我科收治的病毒性心肌炎患兒共96例，均符合1999年9月昆明全國兒童心肌炎、心肌病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的兒童病毒性心肌炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除其他疾病引起的繼發(fā)性心肌損害，發(fā)病前1-3周均有上呼吸道感染史。急性期組：48例，男26例，女22例，年齡6.5-13.0歲，平均9.6歲；36例柯薩奇病毒B組(lgM抗體陽性，12例腺病毒(ADV)IgM抗體陽性?；謴?fù)期組：48例，男25例，女23例，年齡6.3-13.7歲，平均9.5歲；37例柯薩奇病毒B組(lgM抗體陽性，11例腺病毒(ADV)IgM抗體陽性。選擇40名正常健康兒童為對(duì)照組，其中男22例，女18例，年齡6.4-13.5歲，平均9.5歲；近期無感染、腹瀉病史。

1.2 方法

急性期組：給予黃芪注射液：黃芪注射液10 ml(神威藥業(yè)有限公司10 g/ml，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z13020999)溶于5%葡萄糖200 ml，改良極化液(門冬氨酸鉀鎂10 ml、能量合劑0.5支溶于5%葡萄糖200 ml)靜脈滴注，1次/d；口服輔酶Q10、維生素C，2周(14 d)為1個(gè)療程?；謴?fù)期組：給予傳統(tǒng)的抗病毒、改善心肌代謝、極化液、維生素C及其他對(duì)癥診療[3]。

1.3 標(biāo)本采集與檢測

各組患兒在入院時(shí)采血，急性期在診療3 d、7 d、14 d時(shí)分別抽取清晨空腹靜脈血3 ml，立即注入硅化玻璃試管，3 000 r/min離心10 min，吸取上清，將血清分裝置于-70℃冰箱待測。

采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫分析法定量檢測各組患兒血清中TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平。TGF-β1和TNF-α的ELISA檢測試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司，HMGB1檢測ELISA試劑盒購自美國R&D公司，使用美國BIO-RAD伯樂680型全自動(dòng)酶標(biāo)儀測定450 nm波長下吸光度值，用SPSS軟件繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本值[4]。操作嚴(yán)格按照試劑盒要求，所有樣品設(shè)立復(fù)孔，由專人負(fù)責(zé)，在同一批內(nèi)檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組血清TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平比較

與對(duì)照組比較，急性期組的TGF-β1、HMGB1水平明顯升高(P<0.05)，TNF-α升高更為顯著(P<0.01)，恢復(fù)期組TGF-β1較急性期稍降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；TNF-α、HMGB1明顯低于急性期組，但仍高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與急性期組比較，

▲P<0.05

2.2 急性期組患兒不同時(shí)間點(diǎn)血清TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平比較

TGF-β1第3 d、7 d無顯著變化，第14 d時(shí)明顯降低(P<0.05)；TNF-α和HMGB1診冶第3 d、7 d、14 d均依次降低，各時(shí)間點(diǎn)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 急性期組患兒診療不同時(shí)間點(diǎn)血清TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平比較

注：與1 d比較，*P<0.05，**P<0.01；與7 d比較，▲P<0.05

3 討論

病毒性心肌炎是由柯薩奇等嗜心肌病毒感染人體，心肌細(xì)胞發(fā)生炎性浸潤、變性壞死或間質(zhì)水腫的心血管疾病，以心肌代謝障礙和心功能改變?yōu)樘攸c(diǎn)，嚴(yán)重危害兒童健康。目前認(rèn)為，病毒性心肌炎的發(fā)病與病毒直接損傷、病毒誘發(fā)的免疫反應(yīng)有關(guān)，細(xì)胞因子在誘發(fā)免疫病理過程中起到關(guān)鍵作用[5]。

本研究選擇病毒性心肌炎患兒96例為研究對(duì)象，檢測不同組患兒入院時(shí)血清TGF-β1、TNF-α及HMGB1的水平，結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，急性期組的TGF-β1、HMGB1水平明顯升高，TNF-α升高更顯著，恢復(fù)期組TGF-β1較急性期稍降低，TNF-α、HMGB1則明顯降低；結(jié)果提示：病毒性心肌炎急性期患兒血清炎性細(xì)胞因子明顯升高，病毒誘發(fā)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，這與朱冰[6]等的研究結(jié)果一致。本研究中，恢復(fù)期組TNF-α和HMGB1均明顯恢復(fù)，而TGF-β1恢復(fù)不明顯，急性期組第14 d時(shí)仍較高，分析原因TGF-β1是重要的致纖維化細(xì)胞因子[7]，其在恢復(fù)期水平仍較高，提示病毒性心肌炎患兒炎癥消退后仍存在心肌纖維化的危險(xiǎn)[8]。本研究觀察到急性期患兒在第3 d、7 d、14 d時(shí)血清HMGB1依次降低，提示隨著診療進(jìn)展，心肌的免疫病理損傷得到一定程度的恢復(fù)。TNF-α的變化趨勢(shì)與HMGB1相同，提示病毒性心肌炎急性期時(shí)，單核巨噬細(xì)胞募集分泌TNF-α，使心肌炎性反應(yīng)增強(qiáng)[9,10]；隨診治炎癥反應(yīng)及心臟自身免疫反應(yīng)減弱，TNF-α也隨之下降?？傊?，TGF-β1、TNF-α和HMGB1參與病毒性心肌炎的發(fā)病過程，聯(lián)合檢測有助于病情判斷及預(yù)后評(píng)估。