馬書(shū)琴,魯旭陽(yáng)
(1.河南師范大學(xué)旅游學(xué)院,河南 新鄉(xiāng) 453007;2.中國(guó)科學(xué)院水利部成都山地災(zāi)害與環(huán)境研究所山地表生過(guò)程與生態(tài)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 成都 610041)
大氣二氧化碳(CO2)是全球變暖的主要溫室氣體之一,對(duì)溫室效應(yīng)的貢獻(xiàn)率高達(dá)60%[1-2]。土壤可通過(guò)生態(tài)系統(tǒng)呼吸過(guò)程向大氣釋放CO2,并受多種因素的影響,比如土壤動(dòng)物和微生物活性,土壤水分、溫度、有機(jī)質(zhì)、銨態(tài)氮(NH4+-N)和硝態(tài)氮(NO3--N)含量等[3-5]。其中有機(jī)質(zhì)作為土壤生態(tài)系統(tǒng)呼吸的主要碳源和能量來(lái)源,其含量的高低和化學(xué)組成特征直接關(guān)系著微生物代謝底物的多寡和質(zhì)量[6-7]。草地生態(tài)系統(tǒng)作為全球碳循環(huán)的重要組成部分,其土壤環(huán)境及養(yǎng)分含量與植被類型密切相關(guān)。因此,不同類型草地土壤中有機(jī)質(zhì)含量及組成可能通過(guò)影響土壤微生物數(shù)量和活性,進(jìn)而影響土壤CO2的排放。
土壤有機(jī)質(zhì) (soil organic matter, SOM)是植物、微生物和動(dòng)物殘?bào)w在微生物分解及其他物理化學(xué)過(guò)程中變換而成的復(fù)合物質(zhì)[8],這種復(fù)雜性使得在分子尺度上研究SOM具有一定挑戰(zhàn)性。目前,熱裂解氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(pyrolysis-gas chromatography/mass spectrometry, Py-GC/MS)技術(shù)被廣泛用于解析森林[9]、草原[10]和農(nóng)田[11]等生態(tài)系統(tǒng)的SOM特征,該方法可以從分子尺度上獲取SOM化學(xué)組成“指紋圖譜”[12]。依據(jù)Py-GC/MS獲取化合物的來(lái)源和相似性SOM主要分為多糖、木質(zhì)素、蛋白質(zhì)、酚類、脂肪酸類、烷烴類、芳香類、多環(huán)芳烴和萜烯類等物質(zhì),這些物質(zhì)不同程度地影響著土壤微生物活性和土壤碳礦化過(guò)程[13]。如,Grandy等[14]研究加利福尼亞森林生態(tài)系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)含氮化合物吡啶和吡咯的相對(duì)豐度與真菌和細(xì)菌比值呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,而木質(zhì)素衍生物相對(duì)豐度與真菌和細(xì)菌比值呈正相關(guān)關(guān)系;White等[15]和Yang等[16]研究北極苔原生態(tài)系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)SOM中易降解成分初級(jí)多糖和蛋白質(zhì)等,可以刺激微生物活性,從而促進(jìn)自身轉(zhuǎn)化為CO2。綜上所述,SOM化學(xué)組成是影響土壤微生物活性和結(jié)構(gòu)及土壤CO2排放的重要因素。
藏北高寒草地是世界上典型的高寒生態(tài)系統(tǒng)和生態(tài)脆弱帶,其群落結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、自調(diào)節(jié)能力較弱,在全球碳循環(huán)調(diào)控中具有重要作用[17]。該區(qū)域由于低溫限制,部分有機(jī)質(zhì)成分被微生物降解利用,不易被微生物分解的成分則貯藏在土壤中,從而SOM在長(zhǎng)期的不斷累積和轉(zhuǎn)化過(guò)程中形成了復(fù)雜的混合物[18]。關(guān)于藏北高寒草地生態(tài)系統(tǒng)的SOM化學(xué)組成和成分還尚未明確報(bào)道。另外,溫度、水分被認(rèn)為是影響青藏高原草地CO2排放的重要因子,植物凋落物混合物質(zhì)和動(dòng)物擾動(dòng)也通過(guò)刺激微生物活性進(jìn)而影響土壤CO2排放過(guò)程[19-20]。近年來(lái)研究認(rèn)為,SOM的含量與土壤CO2排放量存在密切聯(lián)系,而且青藏高原地區(qū)溫度上升促進(jìn)了SOM的分解,增加了土壤CO2的排放[21]。然而,SOM中哪些化學(xué)成分對(duì)土壤CO2排放起關(guān)鍵作用還鮮有研究。本研究利用Py-GC/MS方法研究SOM化學(xué)組成及其與土壤CO2排放和微生物數(shù)量的關(guān)系,分析藏北高寒草地土壤中是否存在某些特定的化學(xué)成分影響著SOM的生物穩(wěn)定性以及土壤CO2排放潛力。
本研究對(duì)象是藏北兩種不同類型草地(高寒草甸和高寒草原),分別以矮嵩草(Kobresia humilis)和紫花針茅(Stipa purpurea)為主要物種,采樣點(diǎn)集中于西藏那曲市和阿里地區(qū)。該區(qū)域?qū)俑咴瓉喓畮夂騾^(qū),寒冷干燥,無(wú)絕對(duì)無(wú)霜期。平均年降水量為298~462 mm,一年中大部分降水集中于6-8月。年均氣溫-2.8 ℃,最暖月為7月,月均溫度不及14 ℃,最冷月為1月,月均溫度為-10 ℃以下[22-23]。
在高寒草甸和高寒草原各布設(shè)5個(gè)樣點(diǎn),共計(jì)10 樣點(diǎn)。在每個(gè)樣點(diǎn)選取 3 個(gè) 0.5 m × 0.5 m 樣方,用鐵鏟挖取土體表層0-15 cm土壤,混勻后并裝入塑封袋內(nèi)。土壤樣品分為兩份,一份過(guò)0.25 mm篩后風(fēng)干,用于測(cè)定土壤基本理化性質(zhì)和SOM化學(xué)組成;另一份混勻并過(guò)2 mm篩后,4 ℃冷藏,用于室內(nèi)培養(yǎng)測(cè)定CO2排放量和磷脂脂肪酸組成。野外采樣于2016年8月完成。
2016年9 月至2017年4月進(jìn)行室內(nèi)培養(yǎng)試驗(yàn)。將相當(dāng)于100 g干土的鮮土放置250 mL錐形瓶中,并用保鮮膜將瓶口封住后放置于恒溫培養(yǎng)箱中。由于樣品采自不同區(qū)域,本研究選擇微生物生長(zhǎng)較適宜的溫濕度進(jìn)行培養(yǎng),設(shè)置每個(gè)處理中土壤水分為40%最大田間持水量(Water holding capacity, WHC),在室內(nèi) 25 ℃ 培養(yǎng) 210 d,每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)。土壤CO2氣體的釋放在培養(yǎng)的前14 d,每2 d測(cè)定一次;第15天到第49天,每3 d測(cè)定一次;第50天到第210天,除特定情況外,約7 d測(cè)定一次。每次測(cè)定開(kāi)始前用橡膠塞封住培養(yǎng)瓶口,用真空泵將培養(yǎng)瓶中抽為真空狀態(tài),之后統(tǒng)一通入空氣(空氣為統(tǒng)一購(gòu)置的干空氣),并用注射器抽取空氣10 mL測(cè)定CO2濃度(w1),然后在培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)2 h后再用注射器抽取培養(yǎng)瓶中土壤上部空間氣體10 mL測(cè)定CO2濃度(w2),w2-w1值為恒溫培養(yǎng)2 h內(nèi)土壤CO2排放量。氣體樣品在取樣后24 h內(nèi)用安捷倫氣相色譜儀(Agilent 7890A,Agilent Technologies Inc., USA)測(cè)定。
土壤化學(xué)性質(zhì)采用常規(guī)分析法測(cè)定[24]。土壤NH4+-N以及NO3--N用流動(dòng)注射分析儀測(cè)定;SOM含量和土壤全氮(TN)采用元素分析儀測(cè)定;pH采用酸度計(jì)測(cè)定;容重采用環(huán)刀法測(cè)定。用磷脂脂肪酸標(biāo)記土壤微生物,采用HP6890-HP5973型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析氯仿-甲醇-檸檬酸緩沖液提取的磷脂脂肪酸的組成,獲得細(xì)菌、真菌、放線菌、革蘭氏陰性細(xì)菌和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌磷脂脂肪酸標(biāo)志物的含量[25]。
采用Py-GC/MS方法測(cè)定SOM化學(xué)組成。將收集的用于測(cè)定有機(jī)化學(xué)成分的土壤樣品置陰涼處自由風(fēng)干,然后將其研磨成細(xì)粉。測(cè)定時(shí),稱取磨細(xì)后的土壤樣品10~20 mg,利用Pyrofoil包裹,然后利用居里點(diǎn)熱裂解儀對(duì)樣品在590 ℃進(jìn)行高溫裂解。將裂解后產(chǎn)品在線傳送到氣相色譜實(shí)驗(yàn)室,界面溫度 250 ℃,分流比 50 ∶ 1,氦 (He)作為載氣,流速1.0 mL·min-1。裂解產(chǎn)品在氣相色譜柱中進(jìn)行分離,分離時(shí)先在40 ℃保持5 min,然后以5 ℃·min-1速度加熱到 270 ℃,接著以 30 ℃·min-1速度跳躍,使最終溫度保持在300 ℃。將色譜柱分離的產(chǎn)品利用質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè),EI離子源電壓為70 eV,傳輸線溫度為 270 ℃,離子源溫度為200 ℃[26]。將Py-GC/MS分析獲取的峰利用自動(dòng)質(zhì)譜 圖 解 卷 積 鑒 定 系 統(tǒng) (The Automatic Mass Spectral Deconvolution and Identification System, AMDIS 2.72)、質(zhì)譜庫(kù) (National Institute of Standards and Technology,NIST MS Library 2014)和已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行分析和鑒定[27]。鑒定的化學(xué)成分利用相對(duì)豐度表示其含量大小,相對(duì)豐度不能反映出該化學(xué)成分在SOM中絕對(duì)的豐度,但是能反映出SOM各化學(xué)成分的相對(duì)組成特征,因此被廣泛用來(lái)分析SOM化學(xué)成分的相對(duì)定量。根據(jù)其性質(zhì)和前體物質(zhì)以及已發(fā)表的眾多文獻(xiàn)信息將SOM化學(xué)成分大體歸類為木質(zhì)素、脂質(zhì)、多糖、蛋白質(zhì)、含氮化合物等類別(化學(xué)組成)。根據(jù)測(cè)定的化學(xué)成分和確定的化學(xué)組成,構(gòu)建高寒草草甸和高寒草原SOM的“指紋圖譜”。
土壤CO2的累積排放量(cumulative emissions)用以下公式計(jì)算[20]:
式中:F是指土壤 CO2的釋放速率 [mg·(kg·h)-1],i是指第i個(gè)土壤樣品,ti+1-ti是指前后兩次土壤CO2釋放測(cè)定的時(shí)間差,n指總測(cè)定次數(shù)。
運(yùn)用 SPSS 20.0(U.S., IBM, 2011)中獨(dú)立樣本 T檢驗(yàn)對(duì)兩種草地類型土壤基本性質(zhì)及化學(xué)組成進(jìn)行差異性比較;利用雙變量相關(guān)分析法分析SOM化學(xué)組成相對(duì)含量與微生物數(shù)量及CO2累積排放量之間的相關(guān)性。使用 Sigmaplot 10.0(Germany, Systat Software, Inc., 2006)進(jìn)行作圖。
高寒草甸土壤SOM、NH4+-N和NO3--N含量顯著(P< 0.05)高于高寒草原土壤(表1)。高寒草原土壤容重 (1.44 g·cm-3)與高寒草甸土壤容重 (1.31 g·cm-3)間差異性未達(dá)到顯著水平 (P> 0.05)。
經(jīng)過(guò)210 d培養(yǎng)后,高寒草甸土壤CO2累積排放量 (1 246.67 mg·kg-1)顯著高于高寒草原土壤(643.15 mg·kg-1) (P<0.05)。培養(yǎng)期間兩種土壤的 CO2排放通量均未出現(xiàn)明顯波動(dòng)。高寒草甸土壤在培養(yǎng)過(guò)程中的平均 CO2排放通量為 0.23 mg· (kg·h)-1,高寒草原土壤為 0.11 mg·(kg·h)-1(圖 1)。
對(duì)藏北高寒草甸和高寒草原SOM的Py-GC/MS圖譜和Nist 2014數(shù)據(jù)庫(kù)質(zhì)譜圖進(jìn)行比對(duì),并去除無(wú)法識(shí)別的和僅有一個(gè)樣品中出現(xiàn)的化學(xué)成分,最終篩選出化學(xué)成分(表2)。所有土壤樣品可解析出的化學(xué)成分中,含氮化合物種類最多,為23種;其次是脂肪類,為12種;萜烯類和雜環(huán)類較少,分別為1和2種。在SOM化學(xué)組成中,D-丙氨酸(D-alanine)是主要含氮化合物,其次是吡啶(Pyridine);芳香類化物的主要裂解產(chǎn)物是甲苯(占SOM化學(xué)組成的2.12%~5.38%);酚(Phenol)(1.20%~4.41%)和2/3-甲基酚(2/3-Methylphenol)是主要的酚類化合物;糖醛(Furfural)是主要多糖類化合物,其中高寒草甸SOM中糖醛所占比例較高,其值大于3%;萘(Naphthalene)是主要的多雜環(huán)類(Polyaromatics);木質(zhì)素化合物主要為2-甲氧基-4-乙烯基酚(2-Methoxy-4-vinylphenol) (表 2)。
表1 高寒草地生態(tài)系統(tǒng)土壤理化性質(zhì)Table 1 Soil physical and chemistry properties of different ecosystems
圖1 高寒草地土壤培養(yǎng)過(guò)程CO2排放通量和累積排放量Figure 1 Soil CO2 fluxes and cumulative emissions during the incubation period
表2 藏北高寒草地土壤有機(jī)質(zhì)Py-GC/MS裂解產(chǎn)物Table 2 List of Py-GC/MS products in the alpine meadow and alpine steppe soil samples
Py-GC/MS圖譜解析結(jié)果顯示,高寒草甸和高寒草原SOM中含氮化合物相對(duì)豐度高于其他有機(jī)成分,占全部化合物的38.0%~52.5%。不過(guò),兩種類型高寒草地土壤含氮化合物的相對(duì)含量無(wú)顯著差異(P> 0.05);烷烯烴類、多糖類和芳香烴類則表現(xiàn)為高寒草甸土壤顯著(P< 0.05)高于高寒草原土壤;脂肪酸類、木質(zhì)素、多環(huán)芳烴類和酚類在兩種類型土壤間無(wú)顯著差異 (P> 0.05) (圖 2)。
圖2 藏北高寒草甸和高寒草原土壤有機(jī)質(zhì)化學(xué)組成相對(duì)含量Figure 2 Relative abundance of soil organic matter chemical composition in the alpine meadow and alpine steppe soils
相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)(表3),土壤CO2累積排放量與土壤中含氮化合物、烷烯烴類、脂肪類、木質(zhì)素類、酚類、多雜環(huán)芳香烴類不相關(guān)(P> 0.05);而與芳香烴和多糖類相對(duì)含量顯著(P< 0.05)和極顯著正相關(guān)(P< 0.01),其相關(guān)系數(shù)r分別為0.670和0.800?;?10 d室內(nèi)培養(yǎng)試驗(yàn),建立了關(guān)于多糖類與 CO2累積排放量之間關(guān)系式,為Y= 86.761X+344.87(R2= 0.632 1,P< 0.05),式中Y為 CO2累積排放量(mg·kg-1),X為SOM中多糖類物質(zhì)的相對(duì)含量(圖 3)。
表3 土壤有機(jī)質(zhì)化學(xué)組成與土壤CO2累積排放量的相關(guān)系數(shù)Table 3 Correlation analysis between the soil organic matter chemical composition and cumulative CO2 emission
圖3 藏北高寒草地土壤有機(jī)質(zhì)化學(xué)組成多糖類相對(duì)含量與CO2累積排放量的相關(guān)關(guān)系Figure 3 Correlation analysis between the soil organic matter chemical composition and cumulative CO2 emission
芳香烴類和多糖類的相對(duì)含量與土壤中磷脂脂肪酸生物標(biāo)記的細(xì)菌、真菌、放線菌、革蘭氏陰性細(xì)菌和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌含量間顯著(P< 0.05)或極顯著正相關(guān)(P< 0.01);含氮化合物的相對(duì)含量與微生物數(shù)量均顯著負(fù)相關(guān) (P< 0.05)(表 4)。
藏北高寒草地生態(tài)系統(tǒng)中,SOM含量明顯影響土壤呼吸產(chǎn)生CO2,其中可溶性有機(jī)質(zhì)含量與土壤釋放的CO2存在密切聯(lián)系[5, 28],表明SOM礦化過(guò)程中可溶性有機(jī)質(zhì)被優(yōu)先利用,如可溶性有機(jī)氮和可溶性有機(jī)碳[18]。Pare和Bedard-haughn[29]研究北極苔原生態(tài)系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)烷類碳和芳香類也顯著影響土壤CO2的排放,這與本研究結(jié)果相一致,表明SOM作為藏北高寒草地生態(tài)系統(tǒng)土壤CO2是主要來(lái)源,除了在含量上影響著CO2的排放,其質(zhì)量上也與CO2排放存在一定聯(lián)系。
不同類型草地SOM化學(xué)組成結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度的差異直接決定了微生物的利用效率,從而導(dǎo)致土壤CO2排放過(guò)程存在差異性。通常認(rèn)為,土壤微生物較易分解利用蛋白質(zhì)和多糖類物質(zhì),而對(duì)結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定的芳香類化合物的降解能力較低[30-31]。本研究顯示,土壤CO2累積釋放量與多糖類顯著正相關(guān),與含氮化合物顯著負(fù)相關(guān),White等[15]和Dai等[32]也得到了類似結(jié)果。SOM中多糖的相對(duì)含量與CO2排放之間表現(xiàn)為較強(qiáng)相關(guān)性可能是由于SOM化學(xué)組成中多糖類物質(zhì)最易降解,其降解速率較快而降解程度較為徹底,為CO2排放提供了主要的碳源物質(zhì),進(jìn)而對(duì)預(yù)測(cè)土壤呼吸具有重要指導(dǎo)作用[15, 33]。
土壤中氮元素含量對(duì)CO2動(dòng)態(tài)過(guò)程影響的研究大多數(shù)集中于無(wú)機(jī)態(tài)氮元素,而土壤中的無(wú)機(jī)氮素主要來(lái)源于微生物對(duì)有機(jī)氮的礦化作用。因此,土壤中有機(jī)氮的含量和質(zhì)量可能會(huì)影響土壤供氮能力進(jìn)而間接影響土壤CO2的排放。已有研究表明土壤中含氮化合物(有機(jī)氮)中不同化學(xué)成分錯(cuò)綜復(fù)雜的連接在一起可能抑制土壤中有機(jī)氮的降解過(guò)程,使得這部分物質(zhì)在土壤中相對(duì)穩(wěn)定[34]。本研究結(jié)果顯示,含氮化合物與CO2排放之間相關(guān)性未達(dá)到顯著水平,這可能是由于本研究培養(yǎng)時(shí)間較短,土壤微生物僅利用了土壤中已有的無(wú)機(jī)氮,而有機(jī)態(tài)氮未被分解利用,也可能是含氮化合物存在一定抗性,無(wú)法被微生物所降解利用,關(guān)于這部分研究可以考慮在未來(lái)采用同位素標(biāo)記方法深入分析。
土壤微生物作為草地土壤生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分,直接參與并調(diào)節(jié)著土壤物質(zhì)循環(huán)過(guò)程[35-36]。同時(shí),土壤微生物對(duì)環(huán)境變化較為敏感,其數(shù)量、活性、分布特征以及分解有機(jī)物質(zhì)的能力與土壤中有機(jī)物質(zhì)含量和質(zhì)量密切相關(guān)[37]。微生物對(duì)SOM的分解是土壤CO2的主要來(lái)源,SOM化學(xué)組成除了與CO2排放量之間存在直接聯(lián)系,可能還影響著土壤中微生物數(shù)量。本研究顯示,土壤中細(xì)菌、真菌、放線菌、革蘭氏陰性細(xì)菌和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌數(shù)量均與SOM中芳香烴和多糖類物質(zhì)相對(duì)含量密切相關(guān),表明微生物在SOM化學(xué)組成中的重要作用。
表4 土壤有機(jī)質(zhì)化學(xué)組成與土壤微生物數(shù)量的相關(guān)系數(shù)Table 4 Correlation analysis between the soil organic matter chemical composition and microbial quantity
SOM中多糖含量和質(zhì)量對(duì)土壤呼吸以及形成適宜植物生長(zhǎng)的土壤結(jié)構(gòu)具有重要作用[38],且該物質(zhì)是最易被微生物所分解和利用的成分[39]。因此,高寒草甸土壤相比高寒草原中的相對(duì)較為豐富的多糖類化學(xué)成分可能主要來(lái)源于微生物,這部分化合物被整合到微團(tuán)聚體中,最終通過(guò)與有機(jī)礦物相互作用穩(wěn)定的保存下來(lái)[40]。藏北高寒草地土壤中細(xì)菌、真菌、革蘭氏陰性細(xì)菌和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌與芳香類化合物呈正相關(guān)關(guān)系,而與木質(zhì)素間相關(guān)性未達(dá)到顯著水平。木質(zhì)素是在真菌、細(xì)菌以及相關(guān)微生物共同作用下降解的,真菌占據(jù)著主要地位[39]。白腐真菌分泌的酚氧化酶可以將木質(zhì)素初步降解成為芳香烴化合物,特定的細(xì)菌進(jìn)一步將這些成分礦化成低分子量的化合物[41]。細(xì)菌由于其來(lái)源廣泛且繁殖速度快,可以在木質(zhì)素的降解過(guò)程中起到輔助作用,如支鏈改性、環(huán)開(kāi)裂和解聚等[42]。因此,藏北高寒草地土壤中木質(zhì)素可能是作為能源和碳源物質(zhì)被微生物分解,同時(shí)這些微生物可以產(chǎn)生相應(yīng)降解酶從而將木質(zhì)素轉(zhuǎn)化成芳香烴等低分子片段。藏北高寒草地SOM化學(xué)組成中含氮化合物負(fù)相關(guān)于所測(cè)定的微生物數(shù)量,說(shuō)明多數(shù)有機(jī)氮對(duì)微生物生長(zhǎng)和發(fā)育的貢獻(xiàn)要低于其他物質(zhì),甚至可能抑制土壤中氮素在各形態(tài)之間的相互轉(zhuǎn)變[12]。
本研究基于Py-GC/MS方法分析了藏北高寒草甸和高寒草原SOM本質(zhì)特征,并探討了不同化學(xué)組成對(duì)高寒草地土壤微生物數(shù)量和土壤CO2排放的影響。研究結(jié)果顯示高寒草甸和高寒草原兩種類型草地的SOM化學(xué)組成存在明顯差異,而且SOM化學(xué)組成中部分化合物的相對(duì)含量與土壤呼吸作用存在密切聯(lián)系。這從新視角和方法上認(rèn)識(shí)了高寒環(huán)境下影響土壤CO2排放的決定性因素,也為研究不同環(huán)境條件土壤CO2排放特征提供新的理論依據(jù)。