載脂蛋白E基因多態(tài)性與心腦血管疾病患者C反應(yīng)蛋白水平相關(guān)性分析

國希云，王曙霞，鄧嫻，唐果，何荊貴

(中國人民解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心干部診療科,北京 100853)

載脂蛋白E(ApoE)最早發(fā)現(xiàn)于1973年，是從極低密度脂蛋白(VLDL)中發(fā)現(xiàn)的，后來在所有哺乳動(dòng)物的乳糜微粒(CM),低密度脂蛋白(LDL)，高密度脂蛋白(HDL)相繼被發(fā)現(xiàn)，目前已經(jīng)確定ApoE的生理功能是主要作為LDL和CM受體的配體，參與脂蛋白的代謝。既往研究發(fā)現(xiàn)，ApoE基因rs7412 和 rs429358多態(tài)性與心腦血管發(fā)病密切相關(guān)，ApoEε4攜帶者心腦血管風(fēng)險(xiǎn)明顯增高[1-3]，但其機(jī)制目前尚不十分明確，本研究擬通過研究ApoEε4攜帶者與超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平之間的關(guān)系，探討炎癥在ApoEε4攜帶者心腦血管疾病發(fā)病方面的作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象 心腦血管疾病組： 連續(xù)入選我院2016年4月至2017年3月門診就診的心腦血管疾病患者278例(其中冠心病患者160例，缺血性腦卒中患者118例)。其中男208例，女70例，年齡(67.6±8.7)歲。對照組： 同期在我院進(jìn)行體檢的健康對照人群236例，其中男165例，女71例，年齡(66.9±8.8)歲。兩組患者的年齡、性別、文化程度等比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 提取DNA 所有受試者均禁食≥ 12 h，次日清晨抽取肘靜脈血10 mL，其中一部分血液標(biāo)本用于生化檢測，其余部分加入乙二胺四乙酸二鈉抗凝，-20 ℃ 保存，采用分離白細(xì)胞，低滲溶血，常規(guī)酚一氯仿法提取DNA，EDTA抗凝。

1.2.2 ApoE基因多態(tài)性檢測 引物為：5’-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC-3’，5’-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA-3’，PCR反應(yīng)參數(shù)為：取PCR產(chǎn)物5 μL，加HhaⅠ酶3 u，37 ℃酶切5 h，用2%瓊脂糖凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物。結(jié)果可顯示PCR產(chǎn)物為244 bp，被酶切為91 bp和83 bp的片段為ε2基因，被酶切為91 bp和48 bp的片段為ε3基因，被酶切為72 bp和48 bp的片段為ε4基因。

1.2.3 CRP檢測 采用生化全自動(dòng)儀分別對三酰甘油(TG)，總膽固醇(TC)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),空腹血糖和血清hs-CRP 水平等進(jìn)行測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料均行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)資料的組間比較采用成組t檢驗(yàn)，偏態(tài)資料的組間比較采用秩檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般臨床情況 心腦血管疾病組與對照組的臨床一般情況及血脂、血糖、血壓，見表1。心腦血管疾病組的收縮壓高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。年齡、血脂等指標(biāo)兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 ApoE基因型頻率比較 ApoE基因型頻率基本符合Hardy-Weinberg平衡，對照組ApoEε2,ApoEε3和ApoEε4基因分別占20.8%,75.0%和4.2%,心腦血管疾病組ApoEε3頻率為74.1%，與對照組之間大體相近，心腦血管疾病組ApoEε4基因頻率為14.7%，明顯高于健康對照組，而心腦血管疾病組ApoEε2基因頻率為11.2%，明顯低于健康對照組。見表2。

表1 心腦血管疾病組與健康對照組一般情況比較

表2 心腦血管疾病組與健康對照組ApoE基因頻率對比

2.3 不同基因型hs-CRP比較 心腦血管疾病組的hs-CRP水平顯著高于對照組(P<0.05)，心腦血管疾病組ApoE各基因型的hs-CRP水平均較對照組增高，但ApoEε3和ApoEε2在兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。心腦血管疾病組ApoEε4水平較對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 心腦血管疾病組與健康對照組不同ApoE基因型hs-CRP對比

注：兩組比較采用成組秩檢驗(yàn)

3 討論

ApoE是由299個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，當(dāng)其112位和158位全是半胱氨酸時(shí)，就是E2型的異構(gòu)體，當(dāng)這兩個(gè)位置全是精氨酸時(shí)就是E4型異構(gòu)體。當(dāng)112位是半胱氨酸，158位是精氨酸是就是E3型的異構(gòu)體。有的人體內(nèi)只有一種異構(gòu)體，就是純合子，像E2E2，E3E3，E4E4。有的人體內(nèi)含有兩種異構(gòu)體，就是雜合子E2E3，E2E4，E3E4[4]。

體內(nèi)所含有的異構(gòu)體類型是和基因型相對應(yīng)的，決定人們載脂蛋白E型別的基因位于19號染色體上，有三個(gè)等位基因共同表達(dá)ε2，ε3，ε4。因此，又可將6種異構(gòu)體型別劃分為三個(gè)大的表型，即ApoE2，E3，E4表型。相應(yīng)的不同的表型有不同的特性，E3型為野生型，占到70%～80%，E2，E4型通常稱為變異性，或者突變型。

E2型占自然人群的5%～10%。E2型攜帶者不易患神經(jīng)退化性疾病，像阿爾茨海默病、帕金森病，也不容易患心肌梗死、腦梗死等心腦血管疾??；E4型的突變攜帶者易患老年癡呆，帕金森綜合征等神經(jīng)退化性疾病，也是高血脂、動(dòng)脈硬化、心肌梗死、腦梗死等心腦血管疾病的易感人群，占10%～15%。既往研究將大鼠體內(nèi)的ApoE基因敲除，然后給予大鼠正常的飲食，大鼠會(huì)罹患嚴(yán)重的動(dòng)脈粥樣硬化，由此推測，ApoE的ε4等位基因可能是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立因素[5-7]。本研究中，心腦血管疾病患者ApoE的ε4等位基因頻率顯著高于對照組。ApoEε4攜帶者心腦血管患病風(fēng)險(xiǎn)明顯增高，但其機(jī)制目前尚不十分明確。

hs-CRP是由肝細(xì)胞產(chǎn)生的一種炎癥和組織損傷急性期反應(yīng)的非常敏感的標(biāo)志物，動(dòng)脈硬化是一系列病因所致炎性反應(yīng)引發(fā)炎性細(xì)胞和介質(zhì)造成動(dòng)脈壁損壞所引起。CRP可誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)組織因子，激活凝血系統(tǒng)和補(bǔ)體系統(tǒng)導(dǎo)致機(jī)體凝血與纖溶失衡，從而增加心血管事件的危險(xiǎn)[8-11]。本研究通過發(fā)現(xiàn)心腦血管疾病組ApoEε4攜帶者的hs-CRP水平增高，提示ApoEε4攜帶者體內(nèi)炎癥水平增高，可能是其導(dǎo)致心腦血管疾病增加的機(jī)制之一。但本研究亦有較明顯的不足：樣本量較少，缺乏對ApoEε4攜帶者體內(nèi)炎性水平地更深入研究。

綜上所述，載脂蛋白E4等位基因在心腦血管疾病患者中的比例較高，同時(shí)攜帶ApoEε4基因型的患者血漿hs-CRP 水平增高，ApoEε4患者體內(nèi)炎癥水平較高，可能是導(dǎo)致其心腦血管疾病發(fā)病率增高的原因之一。