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    大豆種子醇溶蛋白提取及SDS-PAGE體系優(yōu)化

    2019-05-28 07:25:30
    種子 2019年3期
    關(guān)鍵詞:正丙醇極差乙二醇

    (齊齊哈爾大學(xué)生命科學(xué)與農(nóng)林學(xué)院,黑龍江 齊齊哈爾 161006)

    醇溶蛋白是存在于植物種子中的一種儲(chǔ)藏蛋白,目前對(duì)于小麥、玉米、高粱等植物醇溶蛋白的提取及應(yīng)用研究都有較多的報(bào)道[1-3],但對(duì)豆類種子醇溶蛋白的相關(guān)研究較少。本實(shí)驗(yàn)采用2種不同的提取體系對(duì)大豆種子醇溶蛋白進(jìn)行提取,并進(jìn)行了SDS-PAGE體系的建立,旨在對(duì)豆類作物醇溶蛋白的研究提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    實(shí)驗(yàn)材料為墾農(nóng)16大豆種子,市購(gòu)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    采用2個(gè)混合提取體系提取大豆種子醇溶蛋白,每一體系均采用正交試驗(yàn),設(shè)計(jì)三水平四因素試驗(yàn)(見(jiàn)表1),提取大豆醇溶蛋白。提取后采用考馬斯亮藍(lán)G 250法[4]測(cè)定體系中醇溶蛋白濃度。

    提取體系Ⅰ:A.55 mL乙二醇+15 mL正丙醇;B.65 mL乙二醇+15 mL正丙醇;C. 75 mL乙二醇+15 mL正丙醇,各加蒸餾水至100 mL;

    提取體系Ⅱ:A.55 mL乙二醇+25 mL正丙醇、B.55 mL乙二醇+35 mL丙醇、C.55 mL乙二醇+45 mL正丙醇,各加蒸餾水至100 mL。

    電泳實(shí)驗(yàn)為SDS-PAGE體系[4],濃縮膠濃度為4%,分離膠濃度為10%,上樣量為19μL。

    表1 L9表

    試管號(hào)固液比(g/mL)溫度(℃)時(shí)間(h)提取液濃度(%)11(1∶10)1(30)1(1)1(A)21(1∶10)2(40)2(2)2(B)31(1∶10)3(20)3(3)3(C)42(1∶15)1(30)2(2)3(C)52(1∶15)2(40)3(3)1(A)62(1∶15)3(20)1(1)2(B)73(1∶20)1(30)3(3)2(B)83(1∶20)2(40)1(1)3(C)93(1∶20)3(20)2(2)1(A)

    2 結(jié)果與分析

    2.1 大豆醇溶蛋白提取分析

    圖1是提取體系Ⅰ提取大豆種子醇溶蛋白實(shí)驗(yàn)結(jié)果,通過(guò)各因素對(duì)大豆種子醇溶蛋白提取的極差計(jì)算可知,4種因素對(duì)于提取的影響是不同的,其中對(duì)于提取有較大影響的因素是提取時(shí)間,影響較小的因素是提取溫度,固液比和提取液濃度對(duì)提取的影響相差無(wú)幾。圖2是提取體系Ⅱ各因素對(duì)大豆種子醇溶蛋白提取的極差計(jì)算,與提取體系Ⅰ相同,4個(gè)因素中同樣表現(xiàn)出提取時(shí)間對(duì)醇溶蛋白提取有較大影響,而溫度對(duì)于提取的影響較小。

    圖1 提取體系Ⅰ提取大豆醇溶蛋白各因素極差

    圖2 提取體系Ⅱ提取大豆醇溶蛋白各因素極差

    2.2 SDS-PAGE分析

    圖3、圖4分別是2個(gè)不同提取體系提取大豆醇溶蛋白SDS-PAGE圖譜,上樣量均為19μL。提取體系Ⅰ的電泳圖譜中每1個(gè)泳道條帶均較清晰,差別不大。而提取體系Ⅱ的電泳圖譜則表現(xiàn)出不同的泳道有所不同,并且清晰度較差。

    圖3 提取體系Ⅰ電泳圖譜

    圖4 提取體系Ⅱ電泳圖譜

    3 討論與結(jié)論

    醇溶蛋白被定義為可以溶于乙醇等醇類物質(zhì)的一類蛋白,通常是由分子量為30~90 kDa不同的亞基所構(gòu)成[5]。不同作物種子中所含的醇溶蛋白有不同的亞基構(gòu)成及結(jié)構(gòu),因此在不同體系中溶解性是不同的。對(duì)于大豆種子醇溶蛋白的提取所設(shè)置的4個(gè)因素中,2個(gè)提取體系均表現(xiàn)為提取時(shí)間為較大影響因素,而提取溫度為較小影響因素,與之前的研究有所不同[6]。

    在先前的研究中發(fā)現(xiàn),大豆種子醇溶蛋白在不同的提取劑中有不同的溶解性,其中用乙二醇提取大豆種子醇溶蛋白后進(jìn)行SDS-PAGE效果較好[6]。本次研究采用了混合體系對(duì)大豆種子醇溶蛋白進(jìn)行提取,其中包括2種物質(zhì):乙二醇和正丙醇。提取體系Ⅰ中正丙醇含量不變,均為15 mL,乙二醇含量分別為55,65 mL和75 mL;提取體系Ⅱ中乙二醇含量不變,均為55 mL,正丙醇分別為15,25 mL和35 mL,結(jié)果顯示,提取體系Ⅰ提取大豆醇溶蛋白SDS-PAGE效果較好,而提取體系Ⅱ提取大豆種子醇溶蛋白SDS-PAGE效果不佳。因此認(rèn)為,正丙醇的濃度對(duì)大豆種子醇溶蛋白的提取及SDS-PAGE有一定的影響,在一定的提取體系中正丙醇濃度相對(duì)較小的情況下有利于大豆種子醇溶蛋白的提取及SDS-PAGE,而正丙醇濃度相對(duì)較高時(shí)則不利于大豆種子醇溶蛋白提取及SDS-PAGE體系的優(yōu)化。

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