老年重癥肺炎患者血磷與免疫狀態(tài)相關(guān)性研究

劉雪凱 劉 晨 辛 勤 陳 濤 梁國威

肺部感染是老年人最常見的疾病之一，因肺炎死亡患者中老年患者約占70%[1]。且有研究指出，危重癥患者常伴有不同程度的電解質(zhì)紊亂[2～5]。而磷是人體必需的常量元素之一，臨床上低磷血癥的發(fā)生率為0.34%～3.10%[6]。老年重癥肺炎患者群體中極易多發(fā)低磷血癥，并與患者預(yù)后密切相關(guān)[7～10]。淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)也是重癥肺炎治療和預(yù)后判斷的重要輔助手段[11]。淋巴細(xì)胞亞群包括T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞3類。T細(xì)胞亞群又分為輔助性T淋巴細(xì)胞和抑制性T淋巴細(xì)胞，其特征分別為表達(dá)CD4+和CD8+簇分化抗原。正常情況下，淋巴細(xì)胞各亞群處于正常水平，且CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞保持著動(dòng)態(tài)平衡，二者比值在正常范圍內(nèi)浮動(dòng)。通過對(duì)淋巴細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)、百分比計(jì)算以及CD4+/CD8+比值的計(jì)算，可獲得患者的免疫狀態(tài)信息。

本研究旨在通過檢測(cè)老年重癥肺炎患者的血清磷水平和淋巴細(xì)胞亞群狀態(tài)，探索二者的變化規(guī)律及有無相關(guān)性，并研究伴有和不伴有低磷血癥重癥肺炎患者的免疫狀態(tài)是否存在差異，從而為臨床診治和預(yù)后判斷提供參考依據(jù)，為進(jìn)而嘗試糾正低磷血癥能否改善預(yù)后的實(shí)驗(yàn)提供理論基礎(chǔ)。

對(duì)象與方法

1.研究對(duì)象：選取2017年1～4月來自航天中心醫(yī)院的老年重癥肺炎患者85例(診斷標(biāo)準(zhǔn)見2016年《中國成人社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南》[12])。其中低磷血癥組(血磷<0.8mmol/L)42例，患者年齡61～91歲，中位年齡82歲，非低磷血癥組43例，患者年齡62～93歲，中位年齡82歲。健康對(duì)照者：選取同期航天中心醫(yī)院健康體檢者30例，年齡65～82歲，中位年齡75歲。均無感染及呼吸系統(tǒng)疾病。

2.研究方法：(1)儀器與試劑：深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的BriCyte E6流式細(xì)胞儀及原裝配套抗體、溶血?jiǎng)┖唾|(zhì)控物?？贵w包括T淋巴細(xì)胞抗體試劑：CD3-FITC/CD8-PE/CD45-perCP/CD4-APC；B淋巴細(xì)胞抗體試劑：CD3-FITC/CD16+CD56-PE/ CD45-PerCP/CD19-APC。貝克曼庫爾特實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(蘇州)有限公司生產(chǎn)的AU5800全自動(dòng)生化分析儀。(2)標(biāo)本采集：采集患者及健康對(duì)照者清晨空腹?fàn)顟B(tài)下EDTA-K2抗凝靜脈全血標(biāo)本2ml及靜脈血5ml以惰性分離膠采血管采集，取血后迅速混勻。(3)標(biāo)本檢測(cè)：生化檢測(cè)：惰性分離膠采血管離心后，在全自動(dòng)生化分析儀器上機(jī)檢測(cè)血清無機(jī)磷；淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：采用全血免洗法，上機(jī)后流式細(xì)胞儀自動(dòng)設(shè)門檢測(cè)CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞(CD3+CD4+)、CD8+T細(xì)胞(CD3+CD8+)、B淋巴細(xì)胞(CD19+)和NK細(xì)胞(CD3-CD16+56+)占淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分比及其絕對(duì)值，絕對(duì)值測(cè)量方法為體積法。CD4+/CD8+比值為計(jì)算值。

結(jié) 果

1.3組血清磷和淋巴細(xì)胞亞群百分比:結(jié)果詳見表1。3組之間血磷比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低磷血癥組CD4+%和CD4+/CD8+顯著低于非低磷血癥組和正常對(duì)照組，而非低磷血癥組和正常對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表2。

2.3組血清磷和淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值:結(jié)果詳見表3。3組之間CD3+和CD4+細(xì)胞絕對(duì)值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。重癥肺炎患者無論磷高低與否CD8+、B細(xì)胞和NK細(xì)胞絕對(duì)值均顯著低于正常對(duì)照組。詳見表4。

3.重癥肺炎患者血清磷和CD4+/CD8+比值：具有顯著相關(guān)性(r=0.626,P=0.000)。

表1 3組患者血清磷和淋巴細(xì)胞亞群百分比結(jié)果

表2 低磷血癥組、非低磷血癥組和正常對(duì)照組血清磷和淋巴細(xì)胞亞群百分比差異性分析

表3 3組患者淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值結(jié)果(個(gè)/微升)

表4 低磷血癥組、非低磷血癥組和正常對(duì)照組淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值差異性分析

討 論

人體中磷元素含量豐富，可作為細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分，參與體內(nèi)普遍的磷酸化反應(yīng)以及參與人體能量供給相關(guān)反應(yīng)等。造成低磷血癥的原因有很多，如急慢性腎衰竭、心功能不全、多器官功能障礙及靜脈血液濾過等。有研究發(fā)現(xiàn)，危重癥患者低磷血癥的發(fā)生率可高達(dá)44.8%，低磷血癥可以引起多器官衰竭，影響患者預(yù)后[13]。本實(shí)驗(yàn)中，老年重癥肺炎患者根據(jù)其血磷水平分為低磷血癥組和非低磷血癥組，3組間血磷水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，低磷血癥組顯著低于非低磷血癥組，非低磷血癥組顯著低于對(duì)照組，說明重癥肺炎病人的血磷水平普遍低于正常人群。

淋巴細(xì)胞是人體免疫功能的重要執(zhí)行者，由免疫器官產(chǎn)生，按其遷移率、簇分化抗原和功能的差異可分為T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)。淋巴細(xì)胞亞群的測(cè)定是了解人體免疫功能、狀態(tài)和平衡水平的主要指標(biāo)。健康狀態(tài)下，人體內(nèi)各種淋巴細(xì)胞及其亞群相互作用，維持機(jī)體正常免疫功能。當(dāng)受其他因素影響，淋巴細(xì)胞及其亞群的數(shù)量或比例異常時(shí)，免疫功能會(huì)受到破壞并可能導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生。T淋巴細(xì)胞(CD3+)負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能，在抗細(xì)胞內(nèi)感染、腫瘤細(xì)胞清除、排斥反應(yīng)等方面發(fā)揮作用，并對(duì)體液免疫具有輔助功能。輔助性T細(xì)胞(Th，CD4+CD8-)具有輔助其他免疫細(xì)胞分化和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的作用；抑制性T細(xì)胞(Ts，CD4-CD8+)可以抑制Th細(xì)胞的活性，從而間接抑制B細(xì)胞的分化以及殺傷性T細(xì)胞的功能，達(dá)到負(fù)向調(diào)控體液免疫和細(xì)胞免疫功能的作用。因此，CD4+/CD8+比值可協(xié)助判斷免疫功能是否處于平衡狀態(tài)[14]。NK無需致敏就可以非特異性地殺傷靶細(xì)胞， B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，特異性地結(jié)合抗原，擔(dān)負(fù)體內(nèi)體液免疫。

本研究中低磷血癥組老年重癥肺炎患者外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值及其百分比、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值及其百分比、CD4+/CD8+比值、B淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、NK細(xì)胞絕對(duì)值均顯著低于對(duì)照組水平。這說明伴有低磷血癥的老年重癥肺炎患者免疫水平降低，免疫細(xì)胞數(shù)量減少；CD4+/CD8+比值顯著降低說明該群體免疫功能處于紊亂狀態(tài)。

非低磷血癥組老年重癥肺炎患者外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值、B淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、NK細(xì)胞絕對(duì)值均顯著低于對(duì)照組水平，這表明不伴有低磷血癥的老年重癥肺炎患者外周血主要免疫細(xì)胞數(shù)量與健康人群相比顯著偏低，雖百分比比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但作為相對(duì)數(shù)據(jù)不如絕對(duì)值準(zhǔn)確，所以該組人群仍然處于免疫功能低下狀態(tài)。

低磷血癥組老年重癥肺炎患者外周血中T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值及其百分比、CD8+T細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值與非低磷血癥組老年重癥肺炎患者群體水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值和CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值的低下是伴有低磷血癥的老年重癥肺炎患者群體較之不伴有低磷血癥的老年重癥肺炎患者群體免疫功能紊亂的根本原因。老年重癥肺炎患者(包括低磷和非低磷組)B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的絕對(duì)值和百分比與對(duì)照組相比顯著降低，這提示B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的數(shù)量下降或許是老年重癥肺炎患者的普遍狀況。另外，對(duì)照組的分析中，CD4+/CD8+比值雖然處于參考區(qū)間內(nèi)，但也是低值水平，這也與老年人免疫功能減低的普遍認(rèn)識(shí)一致。研究發(fā)現(xiàn)，老年重癥肺炎患者血清無機(jī)磷和CD4+/CD8+比值具有相關(guān)性(P=0.000)，相關(guān)系數(shù)為0.626。這說明老年重癥肺炎患者的血清磷水平越低下，CD4+/CD8+比值越低，免疫功能越處于紊亂狀態(tài)。

綜上所述，老年重癥肺炎患者免疫功能狀態(tài)紊亂，而近來很多研究表明，免疫治療可以提高重癥肺炎患者的免疫功能改善預(yù)后[15～17]。本研究顯示伴有低磷血癥的患者免疫功能紊亂更為明顯，筆者今后通過研究糾正低磷血癥促進(jìn)患者免疫功能的恢復(fù)以改善預(yù)后。