無創(chuàng)DNA檢測在診斷高齡孕婦胎兒非整倍體中的應(yīng)用

陳梅連 鄒曉紅 胡利輝

（肇慶市高要區(qū)人民醫(yī)院 廣東 肇慶 526040）

隨著計(jì)劃生育政策的改革調(diào)整，高齡孕婦數(shù)量也在逐年增加，醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，隨著孕婦年齡的增長，胎兒出生缺陷和發(fā)育異常風(fēng)險(xiǎn)也會增加。所以，加強(qiáng)出生缺陷檢測和產(chǎn)前檢查，對于人口素質(zhì)的提高具有重要意義。無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測(NIPT)是一種安全性較高的無創(chuàng)侵入性產(chǎn)前檢查方法。本研究對無創(chuàng)DNA檢測在診斷高齡孕婦胎兒非整倍體中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行了分析。

1.資料和方法

1.1 一般資料

本研究選擇分析我院產(chǎn)科2015年1月-2018年10月接受產(chǎn)前檢查2460例產(chǎn)婦的醫(yī)療檔案，孕周12～26周，平均（20.5±4.2）周，年齡35～39歲孕婦2350例，年齡40歲以上孕婦110例。

表 羊水染色體核型和NIPT結(jié)果分析

1.2 方法

第一，NIPT檢測方法。在無菌條件下抽取10ml外周血，置于EDTA抗凝管中，離心處理后提取血漿，游離出血漿中的DNA，PCR擴(kuò)增后形成待分析文庫，通過高通量測序方法實(shí)施覆蓋度測序，并應(yīng)用生物信息學(xué)分析技術(shù)對胎兒染色體非整倍體異常的患病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行計(jì)算，常見異常包括性染色體異常、13-三體、18-三體、21-三體等。對于低風(fēng)險(xiǎn)檢測結(jié)果的孕婦，通過電話隨訪了解胎兒出生后生長發(fā)育情況，對結(jié)果假陰性情況進(jìn)行驗(yàn)證。若孕婦NIPT檢測結(jié)果證實(shí)為高風(fēng)險(xiǎn)，則可在獲得孕婦認(rèn)可后實(shí)施羊水穿刺，并作出準(zhǔn)確判斷。

第二，羊水細(xì)胞染色體核型分析。針對于NIPT檢測結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦，超聲監(jiān)測下在云18～24周時(shí)實(shí)施羊膜腔穿刺手術(shù)，抽取20ml羊水樣本，實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，確定細(xì)胞分裂最旺盛時(shí)收獲細(xì)胞，常規(guī)制備染色體實(shí)施G顯帶后核型分析，全部樣本均進(jìn)行50個分裂相計(jì)數(shù)，確定出2個完整的核型。

第三，觀察指標(biāo)和診斷標(biāo)準(zhǔn)。染色體異常的陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)為羊水細(xì)胞染色體核型分析結(jié)果，NIPT檢測為陽性的孕婦均接受電話隨訪，確定胎兒圍生期臨床表現(xiàn)，并以此為陰性診斷標(biāo)準(zhǔn)，對NIPT檢測方法的陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、特異度和敏感度進(jìn)行計(jì)算。通常情況下，青春期前無法準(zhǔn)確判斷出性染色體異常情況，因而本研究不對孕婦的特異度和敏感度等指標(biāo)進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

NIPT檢測結(jié)果證實(shí)，性染色體高風(fēng)險(xiǎn)患者42例，其中，實(shí)施羊膜腔穿刺術(shù)治療患者34例，拒絕羊水穿刺而繼續(xù)妊娠患者8例，最終失訪。共有4例21-三體高風(fēng)險(xiǎn)患者不愿接受侵入性產(chǎn)前診斷性檢查，其中，直接引產(chǎn)患者2例，接受孕24周系統(tǒng)超聲檢查，并確診為多發(fā)性畸形患者2例，并實(shí)施引產(chǎn)術(shù)終止妊娠。同時(shí)，NIPT檢測證實(shí)共有2418例患者檢查結(jié)果為陰性，并接受電話隨訪，結(jié)果證實(shí)孕婦均順利分娩，新生兒保健檢查證實(shí)無表型異常。NIPT檢測結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)羊水染色體核型分析比較證實(shí)，高齡孕婦胎兒非整倍體檢查，陰性預(yù)測值為100.00%，陽性預(yù)測值為90.91%，特異度為99.93%，敏感度為100.00%。見表。

3.討論

產(chǎn)前篩查與診斷是目前臨床上最為常用的胎兒唐氏綜合征檢查和診斷方法，且產(chǎn)前檢查的主要目標(biāo)也在于胎兒非整倍體情況的早期檢查和干預(yù)，以往臨床使用的超聲影像學(xué)檢查和血清學(xué)篩查方法存在假陽性率過高以及敏感性不足的問題，因而臨床應(yīng)用價(jià)值不足[1]。隨著計(jì)劃生育正常的改革和調(diào)整，高齡孕婦數(shù)量也逐漸增加，由此所導(dǎo)致的孕育異常核型胎兒問題逐漸凸顯。高齡妊娠是胎兒非整倍體問題產(chǎn)前檢查的主要指征，然而，高齡孕婦通常胎兒來之不易更加珍惜，因而對于羊水穿刺這種侵入性檢查存在疑慮，害怕出現(xiàn)感染或是流產(chǎn)等問題，這就大大降低了孕婦及家屬對于產(chǎn)前診斷的依從性[2]。產(chǎn)前檢查常用有創(chuàng)性操作包括臍血細(xì)胞、羊水和絨毛培養(yǎng)的核型分析檢查，這也是非整倍體染色體疾病產(chǎn)前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，然而，侵入性檢查也存在一定陰道流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)，這就會大大增加孕婦及其家屬的心理負(fù)擔(dān)[3]。

無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測是一種較為準(zhǔn)確可靠的產(chǎn)前篩查技術(shù)，能夠?qū)?1-三體綜合征、18-三體綜合征和13-三體綜合征等進(jìn)行相對準(zhǔn)確的判斷，因而更加適用于高齡孕婦和產(chǎn)前高風(fēng)險(xiǎn)篩查，結(jié)合無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果對是否需要產(chǎn)前介入性診斷進(jìn)行分析[4-5]。盡管無創(chuàng)DNA檢測屬于一種非診斷性檢查方式，其陽性結(jié)果仍然需要深入的有創(chuàng)性診斷加以驗(yàn)證，且對于染色平衡易位的檢出率較低，無法準(zhǔn)確判斷染色體結(jié)構(gòu)異常問題，但是，這一檢查方法具有更高的準(zhǔn)確性，能夠有效避免產(chǎn)前穿刺問題，減少有創(chuàng)檢查導(dǎo)致流產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)感染的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，具有假陽性率低、更加準(zhǔn)確、檢測時(shí)間更早和安全性更高的優(yōu)勢[6-7]。

綜上所述，無創(chuàng)DNA檢測是一種安全、可靠、快速的高齡孕婦胎兒非整倍體檢測方法，有助于降低新生兒缺陷率，因而推廣應(yīng)用價(jià)值較高。