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    韓春雨的“基因剪刀”又復(fù)活了?

    2019-05-21 03:41:06杜瑋
    中國(guó)新聞周刊 2019年15期
    關(guān)鍵詞:同源春雨論文

    杜瑋

    4月4日,美國(guó)冷泉港實(shí)驗(yàn)室運(yùn)營(yíng)的網(wǎng)站bioRxiv發(fā)表論文稱,普渡大學(xué)的科研人員發(fā)現(xiàn)了一種名為NgAgo的蛋白能切割DNA(脫氧核糖核酸), 并可以提高大腸桿菌體內(nèi)基因同源重組的效率。bioRxiv是免費(fèi)向生物學(xué)家開(kāi)放的預(yù)印本文獻(xiàn)庫(kù),也就是說(shuō),發(fā)表在上面的文章都是尚未獲得同行評(píng)議的作者原始文稿。

    韓春雨。

    在基因編輯過(guò)程中,同源重組被視為細(xì)胞常用的修復(fù)手段,基因剪刀斷開(kāi)DNA鏈條的行為,會(huì)刺激同源重組的發(fā)生,如果再提供外源供體,則能完成DNA序列的交換。三個(gè)月前,華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的研究團(tuán)隊(duì)也在國(guó)際期刊《核酸研究》上發(fā)文,同樣稱NgAgo能促進(jìn)幾種細(xì)菌體內(nèi)的基因同源重組,可視為潛在的基因編輯工具。

    NgAgo,正是兩年多以前,讓河北科技大學(xué)副教授韓春雨卷入巨大輿論漩渦的物質(zhì)。如今,伴隨著兩篇新論文的發(fā)表,由韓春雨首次發(fā)現(xiàn)并命名的NgAgo能否作為基因編輯的新剪刀,再度成了被關(guān)注的焦點(diǎn)。

    說(shuō)NgAgo繞不開(kāi)韓春雨

    2016年5月2日,《自然》雜志子刊《自然·生物技術(shù)》刊登了一篇名為《DNA引導(dǎo)的NgAgo蛋白可用作基因編輯工具》的文章,作者為河北科技大學(xué)韓春雨團(tuán)隊(duì),這是NgAgo首次被提出。文章稱,NgAgo能在向?qū)NA的指引下,對(duì)目標(biāo)基因有效切割,可用于對(duì)人類細(xì)胞的基因編輯。

    這篇文章發(fā)表后,在種種外界因素的推動(dòng)下,隨即在國(guó)內(nèi)引發(fā)轟動(dòng)效應(yīng),某些國(guó)內(nèi)專家和媒體稱之為“諾獎(jiǎng)級(jí)”的發(fā)現(xiàn)。同時(shí),NgAgo被視為新的基因編輯技術(shù),可比肩目前世界上應(yīng)用最廣泛的基因編輯工具CRISPR/Cas9。

    基因編輯,指人為對(duì)DNA片段進(jìn)行有目的的改造,包括插入、敲除基因等操作,使其序列發(fā)生變化。基因編輯和電腦上編輯一份文檔類似,只不過(guò),其操作對(duì)象是直接影響生物體特質(zhì)的終極密碼——DNA。通常,基因編輯分為剪開(kāi)與修復(fù)兩個(gè)步驟。因此,要想進(jìn)行基因編輯,首先要有把好“剪刀”。

    目前,科學(xué)家們用得最順手的基因剪刀就是CRISPR/Cas9,其開(kāi)發(fā)者是美國(guó)麻省理工學(xué)院華裔科學(xué)家張鋒和加州大學(xué)伯克利分校教授詹妮弗·杜德娜等。實(shí)際上,CRISPR/Cas9最初是細(xì)菌抵御外敵的防御系統(tǒng):當(dāng)有病毒或外來(lái)DNA首次入侵時(shí),CRISPR/Cas9就會(huì)剪切一段帶有入侵者身份特質(zhì)的DNA(核糖核酸),將其記錄在案,等外敵再次來(lái)犯時(shí),CRISPR/Cas9會(huì)依據(jù)之前記錄的DNA信息,轉(zhuǎn)錄出一段起著向?qū)ё饔玫腞NA,指引自己對(duì)來(lái)敵精準(zhǔn)識(shí)別,準(zhǔn)確打擊。就是這樣一套系統(tǒng),被科學(xué)家們用作基因編輯的工具。

    但CRISPR/Cas9也有缺點(diǎn):其剪切點(diǎn)一定要位于一段處于特定位置、名為PAM序列的上游,這意味著CRISPR/Cas9的工作范圍并不能無(wú)死角、全覆蓋。而引導(dǎo)其剪切的RNA還有著容易變身的特點(diǎn),這同樣會(huì)影響到剪切的準(zhǔn)確度。因此,研發(fā)更可靠、更準(zhǔn)確的新剪刀成了科學(xué)家們的目標(biāo)。這一背景下,名為Argonaute(簡(jiǎn)稱Ago)的蛋白家族開(kāi)始相繼登場(chǎng)。

    與CRISPR/Cas9相似,Ago蛋白同樣是生物體的防御系統(tǒng)。最初,人們發(fā)現(xiàn),真核生物體內(nèi)的Ago蛋白能降解外來(lái)的RNA,進(jìn)而又發(fā)現(xiàn),來(lái)源于原核生物的Ago蛋白可以消滅入侵的DNA。從形態(tài)上來(lái)說(shuō),原核與真核生物的區(qū)別在于細(xì)胞核有沒(méi)有核膜,原核生物是指一類細(xì)胞核無(wú)核膜包裹的原始單細(xì)胞生物,真核生物則涵蓋了包括人類在內(nèi)的所有動(dòng)植物等生命體。

    2014年,荷蘭瓦赫寧根大學(xué)教授約翰·范德歐斯特在原核生物的Ago蛋白家族中,發(fā)現(xiàn)一種名為T(mén)tAgo的蛋白能與具有向?qū)ё饔玫腄NA結(jié)合,在65°C條件下,切割目的DNA。但顯然,高溫限制了其發(fā)揮更大作用的潛力。

    業(yè)界一度認(rèn)為,韓春雨的研究突破性地解決了這一弊端。通過(guò)對(duì)比篩選,他發(fā)現(xiàn)另一種來(lái)源于格氏嗜鹽堿桿菌的Ago蛋白,并將其命名為NgAgo。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí),這種蛋白能在37°C常溫下,結(jié)合向?qū)NA,實(shí)現(xiàn)基因編輯。這意味著NgAgo在人類疾病治療、生物制藥等領(lǐng)域?qū)⒂袕V闊的應(yīng)用前景。而相比CRISPR/Cas9,NgAgo還有著不特定依賴于PAM序列、以DNA 為向?qū)Р灰资Ш兔摪?、容錯(cuò)率低、效率高等一系列優(yōu)點(diǎn)。

    2016年5月8日,新媒體平臺(tái)“知識(shí)分子”,以《韓春雨:“一鳴驚人”的中國(guó)科學(xué)家發(fā)明世界一流新技術(shù)》為題,報(bào)道了韓春雨其人與他的研究。“知識(shí)分子”在這篇注明為“特稿”的文章前加了一段編者按,其中寫(xiě)道:“令國(guó)人激動(dòng)的是,韓春雨在河北科技大學(xué)條件不好、經(jīng)費(fèi)缺乏、人員很少的情況下做出的研究,優(yōu)于世界一流的麻省理工、哈佛、斯坦福?!吨R(shí)分子》主編、北京大學(xué)教授饒毅將韓春雨推介給編輯部,在此我們特別刊出專訪,以饗讀者?!?/p>

    此后,國(guó)內(nèi)媒體蜂擁而上,對(duì)韓春雨的研究成果進(jìn)行報(bào)道。韓春雨先后被評(píng)為河北省科協(xié)副主席、河北省最美教師、國(guó)家“中青年科技創(chuàng)新領(lǐng)軍人才”候選人、“長(zhǎng)江學(xué)者獎(jiǎng)勵(lì)計(jì)劃”候選人、2016年度高校享受政府特殊津貼人員等。2016年8月,河北省發(fā)改委還批復(fù)并“原則同意”了估算總額達(dá)2.24億元的河北科技大學(xué)基因編輯技術(shù)研究中心的工程建設(shè)項(xiàng)目。

    質(zhì)疑聲與贊譽(yù)幾乎同時(shí)而至。在其論文發(fā)表后不到20天,現(xiàn)任美國(guó)普林斯頓大學(xué)分子生物學(xué)系教授、當(dāng)時(shí)在清華大學(xué)任教的結(jié)構(gòu)生物學(xué)家顏寧在微博上首次提出韓春雨論文結(jié)果的可重復(fù)性存在問(wèn)題。

    此后,類似質(zhì)疑在未名空間、知乎、百度貼吧等論壇上出現(xiàn)。至2016年9月,饒毅與中科院院士邵峰聯(lián)名致信河北科技大學(xué)校長(zhǎng),稱“宜謹(jǐn)慎對(duì)待韓春雨及其研究成果”,并建議成立專家委員會(huì),核實(shí)韓春雨研究成果。當(dāng)年10月,北大生科院教授魏文勝等13名國(guó)內(nèi)生物學(xué)家聯(lián)名在媒體上公開(kāi)發(fā)聲,表示無(wú)法重復(fù)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果,希望韓春雨公開(kāi)所有原始數(shù)據(jù),呼吁學(xué)校及相關(guān)方介入調(diào)查。

    2016年11月,《自然·生物技術(shù)》編輯部表示,正在調(diào)查該論文。之后,韓春雨給《自然·生物技術(shù)》編輯部補(bǔ)充了相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

    2017年1月,國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局撤回了韓春雨團(tuán)隊(duì)以Ago為核心的基因編輯技術(shù)專利。據(jù)介紹,目前,該團(tuán)隊(duì)以國(guó)際專利形式重新提交申請(qǐng),并處于公開(kāi)狀態(tài)。同年8月,由于一直沒(méi)有重復(fù)出實(shí)驗(yàn)結(jié)果,韓春雨團(tuán)隊(duì)撤回論文?!蹲匀弧ど锛夹g(shù)》編輯部發(fā)表了《是該數(shù)據(jù)說(shuō)話的時(shí)候了》的社論稱,“我們現(xiàn)在確信韓春雨的撤稿決定是維護(hù)已發(fā)表科研記錄完整性的最好做法。”

    之后,韓春雨團(tuán)隊(duì)繼續(xù)尋找論文結(jié)果不能重復(fù)的原因。時(shí)隔一年后,河北科技大學(xué)發(fā)文稱,韓春雨團(tuán)隊(duì)不存在主觀造假。但依據(jù)有關(guān)規(guī)定,取消韓春雨所獲得的榮譽(yù)稱號(hào),終止韓春雨團(tuán)隊(duì)承擔(dān)的科研項(xiàng)目并收回科研經(jīng)費(fèi)。韓春雨團(tuán)隊(duì)回應(yīng)說(shuō),實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)存在缺陷、研究過(guò)程存在著不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膯?wèn)題。

    兩項(xiàng)新發(fā)現(xiàn)與基因剪刀的未來(lái)

    雖然“韓春雨事件”告一段落,但由他首先提出的NgAgo能否作為基因編輯工具仍無(wú)定論。

    早在2016年11月,南通大學(xué)神經(jīng)再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室副教授劉東與復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院研究員王永明在《自然》雜志子刊《細(xì)胞研究》上發(fā)表了國(guó)內(nèi)第二篇關(guān)于NgAgo的文章。文章稱,用NgAgo可以“敲低”斑馬魚(yú)基因,導(dǎo)致其眼部發(fā)育缺陷。但由于“敲低”只是使基因表達(dá)降低,并沒(méi)有改變基因序列,因此,談不上“編輯”。而由于研究對(duì)象不同,劉東等人稱,其研究也“不能對(duì)此前韓春雨的結(jié)論證實(shí)或證偽”。

    相比之下,最近發(fā)表的兩項(xiàng)關(guān)于NgAgo的新研究似乎帶給人們更多希望。

    在美國(guó)普渡大學(xué)的研究中,NgAgo首先被證實(shí)在體外實(shí)驗(yàn)中具有切割DNA的能力。更進(jìn)一步,研究人員發(fā)現(xiàn),NgAgo上兩個(gè)名為PIWI和RepA的部位都能獨(dú)立切割DNA。但與韓春雨結(jié)論不同的是,在普渡大學(xué)開(kāi)展的體外實(shí)驗(yàn)中,NgAgo切割時(shí),并沒(méi)有和本該配對(duì)的向?qū)NA結(jié)合。負(fù)責(zé)這項(xiàng)研究的普渡大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物工程助理教授凱文·所羅門(mén)在接受《中國(guó)新聞周刊》采訪時(shí)推測(cè)說(shuō),這有可能是NgAgo事先已結(jié)合了DNA在復(fù)制過(guò)程產(chǎn)生的其他碎片DNA片段,充當(dāng)向?qū)А?/p>

    而在大腸桿菌的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,NgAgo被證明能結(jié)合向?qū)NA,并依靠其切割能力,提升大腸桿菌同源重組的效率。今年1月,華中農(nóng)業(yè)大學(xué)的研究同樣證明:在巴氏桿菌和大腸桿菌體內(nèi),NgAgo能提升基因同源重組的效率。但與普渡大學(xué)和韓春雨的研究不同,該論文作者華中農(nóng)大動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院、農(nóng)業(yè)微生物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室教授張安定、金梅林等人觀察到,NgAgo對(duì)同源重組的促進(jìn),是通過(guò)NgAgo的PIWI部位與一種助力同源重組的酶RecA的相互作用。“當(dāng)然,我們不排除它兩種原理都在起作用?!睆埌捕ㄔ诮邮堋吨袊?guó)新聞周刊》采訪時(shí)說(shuō)。

    但需要注意的是,無(wú)論是華中農(nóng)大還是普渡大學(xué)的研究,目前都聚焦的是NgAgo在原核生物中的切割作用?!拔覀儾](méi)有打算重復(fù)韓春雨論文中的研究結(jié)論,也就是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行基因編輯?!彼_門(mén)說(shuō),“現(xiàn)在說(shuō)NgAgo能否適用于人類細(xì)胞基因編輯為時(shí)尚早,我們能夠說(shuō)的是,這是又一個(gè)能提升細(xì)菌中基因編輯的工具,對(duì)生物燃料的生產(chǎn)、制藥等方面能發(fā)揮作用?!?/p>

    事實(shí)上,在韓春雨論文結(jié)果發(fā)表之初,國(guó)內(nèi)也曾一度掀起跟風(fēng)研究熱潮。據(jù)某不愿具名的業(yè)內(nèi)人士稱,國(guó)內(nèi)六七家在這一領(lǐng)域較有實(shí)力的科研機(jī)構(gòu)此前都對(duì)NgAgo很感興趣。但在韓春雨論文被熱烈追捧又遭到強(qiáng)烈質(zhì)疑后,這些研究者又逐漸退出,基本不再涉足該研究領(lǐng)域。相比之下,在世界范圍內(nèi),對(duì)于NgAgo乃至更大范圍的Ago蛋白家族的研究,仍進(jìn)展不斷。

    今年2月,加州理工學(xué)院生物工程系教授阿列克謝·阿拉溫在bioRxiv上發(fā)表論文稱,源于丁酸梭菌的CbAgo具有高活性,可用于在中等溫度下切割單鏈和雙鏈DNA。阿拉溫進(jìn)一步表示,在37℃條件下,CbAgo可能在真核細(xì)胞中具有活性。前文提到的荷蘭瓦赫寧根大學(xué)教授范德歐斯特近期也在bioRxiv發(fā)表了類似的研究成果。不過(guò),他對(duì)《中國(guó)新聞周刊》回復(fù)稱,“迄今為止,我們還沒(méi)有用CbAgo進(jìn)行人類細(xì)胞基因組的編輯,如果應(yīng)用,還需要更多的優(yōu)化”。

    國(guó)內(nèi)某權(quán)威科研院所一名長(zhǎng)期研究Ago蛋白家族的研究人員稱,當(dāng)初,韓春雨的研究只是該領(lǐng)域眾多科研成果中的一項(xiàng),即使文章結(jié)論成立,也并無(wú)特別值得關(guān)注之處。他的研究之所以引發(fā)轟動(dòng)效應(yīng),主要是媒體的炒作。在她看來(lái),眼下,Ago蛋白用作基因編輯工具還不太合適,“就像拿一把非常鈍的刀子去切肉一樣”,“但不排除以后大家想到什么樣的辦法對(duì)蛋白進(jìn)行一個(gè)非常大的改造,或者兩三個(gè)蛋白一起作用,研究人員應(yīng)該想一些更加有用的辦法。一旦基礎(chǔ)研究有了突破,應(yīng)用上的突破也會(huì)很快跟上。那么究竟突破在哪里?我覺(jué)得還得給大家更多時(shí)間?!?/p>

    前述不愿具名的業(yè)內(nèi)人士則表示,從目前國(guó)內(nèi)外最新的研究成果來(lái)看,NgAgo有其科研價(jià)值,“顯現(xiàn)出來(lái)很多的效果都是值得我們?nèi)パ芯康摹?。他認(rèn)為,相較國(guó)外的持續(xù)跟進(jìn),如果國(guó)內(nèi)因?yàn)轫n春雨當(dāng)年被“捧殺”而不再關(guān)注這一研究,將在這一領(lǐng)域處于落后被動(dòng)的地位。

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