超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定藥包材中的雙酚A

翟美娟，陳伯文，唐蓮

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院，蘇州市立醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 蘇州 215002)

雙酚A(bisphenol A，BPA)，簡稱二酚基丙烷，是一種外源性的內(nèi)分泌干擾物，具有某些雌激素特性[2],是合成塑料包裝材料制品的一種添加劑，常用于生產(chǎn)聚碳酸酯、環(huán)氧樹脂、聚砜樹脂、聚苯醚樹脂等多種高分子材料[1]。雙酚A易溶于堿性水溶液、丙酮和醇類，用含雙酚A的材料制成的藥包材及食品包裝材料(飲料瓶、飲水瓶、奶瓶等)時，材料中的雙酚A會遷移到藥品或食品中，從而進入人體，對人體健康帶來潛在危害。

目前雙酚A的測定方法主要有高效液相色譜法[3-4]、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法[5]、氣相色譜法[6]、氣質(zhì)聯(lián)用法[7]等。本文建立了超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用法[8]測定了部分藥品包裝材料中的雙酚A含量，方法簡便快捷、靈敏度高，為藥包材中BPA的含量控制及藥包材的選用提供了參考依據(jù)。

1 儀器與試劑

超高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(Waters xevo TQ-S)；超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；雙酚A標準品(美國Supelco公司，純度為99.9%)；藥包材(蘇州市立醫(yī)院提供，詳見表9)；甲醇、乙腈均為LC-MS級別。

2 試驗方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 標準溶液的制備 精密稱取雙酚A對照品10.63 mg至10 mL容量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，配制成濃度為1.063 mg·mL-1的標準儲備液。

精密移取1 mL標準儲備液至100 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，稀釋成濃度為10.63 μg·mL-1的標準溶液。

2.1.2 樣品溶液的制備 分別將藥包材剪碎或打成粉末，精密稱取0.5 g樣品至10 mL容量瓶中，加甲醇溶解超聲提取60 min后，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，10 000 rpm離心10 min，取上清液待測。

2.2 色譜及質(zhì)譜條件

2.2.1 色譜條件 色譜柱為BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；流動相：乙腈-水，梯度洗脫(洗脫程序見表1)；柱溫：40 ℃；樣品室溫度：15 ℃；流速：0.4 mL·min-1；進樣量：2 μL。

2.2.2 質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧離子源(ESI)；掃描方式：負離子掃描；離子噴霧電壓：2.5 kV；錐孔電壓：50 V；離子源霧化溫度：600 ℃；去溶劑氣流量：1 100 L·h-1；錐孔氣流量：150 L·h-1；霧化器氣流量：7 Bar；碰撞氣體流量：0.15 mL·min-1；檢測模式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式，雙酚A的離子對及質(zhì)譜分析條件參數(shù)見表2?？瞻滓骸φ掌芳皹悠芬旱馁|(zhì)譜圖見圖1，結(jié)果表明，藥包材中的其他成分不干擾BPA的測定。

表1 流動相梯度洗脫

表2 雙酚A的質(zhì)譜參數(shù)

2.3 標準曲線的制備 用甲醇逐級稀釋BPA標準溶液，配制成BPA濃度分別為0.531 5、5.315、26.58、53.15、106.3 ng·mL-1的標準溶液，進樣分析，以峰面積(A)為縱坐標對BPA濃度(C)為橫坐標進行線性回歸，得標準曲線方程：A=1 432.781 1C+416.762 4，r=0.999 9，BPA濃度在0.5～106.3 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

A.空白液;B.對照品；C.樣品液圖1 雙酚A的質(zhì)譜圖

2.4 精密度 分別取低、中、高3種不同濃度的BPA標準溶液，按上述色譜-質(zhì)譜條件，在1 d內(nèi)連續(xù)進樣5次，以及連續(xù)5 d進樣測定，計算BPA的日內(nèi)及日間精密度RSD(見表3)。

表3 日內(nèi)日間精密度實驗結(jié)果(n=5)

2.5 穩(wěn)定性 取濃度為53.15 ng·mL-1BPA標準溶液，分別在0、2、4、6、8、10 h時進樣分析，按“2.2”項下條件測定峰面積，計算RSD值。并精密稱取外用液體藥用聚酯瓶(批號：1511054)粉末0.5 g，按上述樣品處理方法操作，分別在0、2、4、6、8、10 h時進樣分析，按上述條件測定峰面積，計算RSD值(結(jié)果見表4)，結(jié)果表明對照品及樣品溶液在10 h內(nèi)均穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率 稱取樣品(外用液體藥用聚酯瓶 批號：1511054)粉末約0.5 g 9份，分別精密加入相當于上述藥包材粉末中含量80%、100%、120%的BPA對照品，按上述樣品處理方法操作，制備樣品并進樣分析，測定加入的BPA的量，計算回收率(見表5)。

表4 穩(wěn)定性試驗

表5 加樣回收率測定(n=3)

由上表可見，回收率整體在92%～105%之間，RSD<10%，符合含量測定要求。

2.7 重復(fù)性 精密稱取外用液體藥用聚酯瓶(批號：1511054)粉末0.5 g，按上述樣品處理方法操作，平行制備6份，進樣分析，計算BPA的含量，計算其RSD(結(jié)果見表6)。

表6 重復(fù)性試驗(n=6)

由上表結(jié)果可知，重復(fù)性結(jié)果良好。

2.8 樣品含量測定 分別精密稱取各藥包材粉末或碎片0.5 g，按上述樣品處理方法操作，進樣測定，計算BPA的含量(結(jié)果見表7)。

3 討論

3.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化 將濃度為531.5 ng·mL-1的BPA標準溶液在負離子模式下進行母離子全掃描，得到雙酚A分子離子峰為227.1，分別對錐孔電壓、離子源溫度、去溶劑氣溫度等條件進行優(yōu)化。通過碰撞反應(yīng)進行子離子掃描確定雙酚A的定量離子和定性離子，再進行MRM檢測反復(fù)優(yōu)化，在錐孔電壓54 V時，碎裂能分別為26和18 V，m/z133.1和m/z212.1碎片離子強度比較大，所以選擇m/z133.1和m/z212.1作為定量離子和定性離子。

表7 含量測定結(jié)果

3.2 色譜條件的優(yōu)化 試驗分別考察了甲醇、乙腈作為有機相對BPA測定的影響，發(fā)現(xiàn)甲醇作為流動相靈敏度高，但是噪音較大，色譜峰分離不完全。而以乙腈和水為流動相產(chǎn)生的噪音較小，因此試驗選擇乙腈和水為流動相，并采用梯度洗脫的方式，色譜峰的分離效果較好。

3.3 BPA的提取 BPA不溶于水，易溶于堿性水溶液、丙酮和醇類，試驗初期我們分別采用四氫呋喃、丙酮、二氯甲烷、甲醇等對藥包材中的BPA進行提取，考察了不同溶劑對BPA提取的效果，結(jié)果表明甲醇對BPA有較好的提取效果，且提取出的雜質(zhì)較少。進而對甲醇提取BPA的超聲時間進行了考察，發(fā)現(xiàn)BPA的提取效率隨著超聲時間的延長而增加，60 min可基本將BPA提取完全。

綜上，本試驗采用超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定藥包材中雙酚A的含量，在濃度為0.5～106 ng·mL-1范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。樣品的平均回收率在92%～105%之間，RSD10%。該方法具有操作簡便、靈敏度和準確度高的特點，能滿足藥品包裝材料中雙酚A的準確測定。

在所提供的藥包材中均檢測出雙酚A，雖含量差異較大，但考慮到BPA對人體的

潛在危害，本試驗結(jié)果提醒我們，應(yīng)慎重選擇合適的藥包材。