不同溶劑對柴胡中柴胡皂苷a溶出效果的影響

河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院，河南 洛陽 471023

柴胡是傘形科柴胡屬植物的干燥根，為常用中藥，具有解熱鎮(zhèn)痛、利膽保肝的作用。柴胡皂苷a是柴胡藥材的主要有效成分，是含有柴胡類中成藥質(zhì)量標準中重要的檢測指標。在目前的中成藥質(zhì)量標準評價體系下，提高藥材中柴胡皂苷a的溶出度無疑是提取工藝研究的重點，其中溶劑種類的選擇尤為重要。目前有文獻對柴胡的提取溶劑進行優(yōu)選，然而得出的結(jié)論卻差異較大，有高濃度的乙醇，如70%乙醇[1-2]，有堿性高濃度乙醇，如含5%氨水的95%乙醇[3]，亦有常規(guī)提取溶劑水[4]。可見，從已有的相關(guān)文獻判斷，并不能得到明晰的結(jié)論，這種狀況無法對相應(yīng)的科研和生產(chǎn)起指導(dǎo)作用?；诖?，本文以藥材中柴胡皂苷a的溶出度為指標，對不同溶劑對藥材中柴胡皂苷a溶出效果進行考察，為合理選用柴胡的提取溶劑奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 600-2487高效液相色譜儀；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長城科工貿(mào))；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；METTLER-AE240型電子分析天平。

1.2 試藥 柴胡藥材購自洛陽關(guān)林藥材市場，經(jīng)河南科技大學(xué)尹衛(wèi)平教授鑒定為北柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根；柴胡皂苷a(自制，面積歸一化法測定其純度高于98%)；乙腈(DIKMA公司，色譜純)，重蒸水自制，大孔樹脂(天津南開大學(xué)化工廠)，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取柴胡皂苷a 2.2 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2 供試品溶液的制備[5]稱取柴胡藥材10份，每份20 g，分別用水、30%、50%、70%、95%乙醇和5%NaOH水溶液、5%NaOH-30%乙醇、5%NaOH-50%乙醇、5%NaOH-70%乙醇、5%NaOH-95%乙醇進行提取。提取方式為10倍量溶劑，提取3次，每次1 h。提取完畢后，將所得提取液合并，回收溶劑，真空干燥，得相應(yīng)浸膏。

分別稱取相當于0.4 g生藥的浸膏(以水為提取溶劑的樣品取相當于2 g生藥浸膏)，加水溶解后，于AB-8型大孔吸附樹脂(內(nèi)徑1.2 cm，柱長9 cm)上樣，先用0.5 mol/LNaOH 80 mL洗脫，棄去；然后用水洗脫至中性(約40 mL)；再用30%乙醇30 mL洗脫，棄去；最后用95%乙醇100 mL洗脫，搜集95%乙醇洗脫部分，水浴蒸干，用50%乙醇溶解轉(zhuǎn)至10 mL量瓶中，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.3 色譜條件 Hypersil-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：(見表1)；流速：1.0 mL/min；柱溫：35℃；檢測波長：210 nm；進樣量：10.0 μL。各樣品及標準品的HPLC色譜圖見圖1。

表1 流動相梯度變化

2.4 線性關(guān)系 考察分別精密吸取柴胡皂苷a對照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL注入液相色譜儀，依“2.3”項下色譜條件分析并測定峰面積。以峰面積(A×10-6)與進樣量(X)進行線性回歸，得柴胡皂苷a的回歸方程為A=3.371X-0.0271(r= 0.9998)。結(jié)果表明，柴胡皂苷a在0.55～3.3 μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。如圖2。

2.5 精密度試驗 精密移取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的樣品溶液10.0 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣5次，測定峰面積。結(jié)果顯示柴胡皂苷a的峰面積RSD為 1.51%，說明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 精密移取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的樣品溶液10.0 μL，分別于0、2、5、10、12 h注入液相色譜儀，依法測定柴胡皂苷a的峰面積。結(jié)果顯示柴胡皂苷a峰面積的RSD為1.83%，表明樣品在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗 精密稱取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的柴胡提取物5份，每份浸膏折合生藥材0.4 g，依法富集其中的柴胡皂苷a并測定含量。結(jié)果顯示，以5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑從20 g柴胡藥材中提取得到柴胡皂苷a的含量為97.5 mg，RSD為2.10%。

2.8 回收率試驗 精密稱取已測知含量的5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的柴胡提取物5份，每份折合生藥材0.2 g，加入適量對照品溶液，按樣品溶液的制備方法處理，并依法測定，計算柴胡皂苷a的回收率。結(jié)果見表2。

表2 柴胡皂苷a回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品測定 按照“2.3”項下柴胡皂苷a的分析方法對各樣品進行測定，并計算折合20 g柴胡生藥中柴胡皂苷a溶出量。結(jié)果見表3。

表3 提取溶劑對柴胡皂苷a的溶出量結(jié)果

3 討論

3.1 溶劑中堿濃度的確定 柴胡皂苷a結(jié)構(gòu)中的環(huán)氧醚環(huán)不穩(wěn)定，在提取過程中易發(fā)生開裂，造成結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化[6]，降低提取液中柴胡皂苷a的含量，而堿性溶劑可以抑制該過程的發(fā)生。因此，本文在考察提取溶劑的種類時增加了不同濃度的堿性乙醇，同時確定提取溶劑中氫氧化鈉的濃度為5%，因為在該濃度下可以很好的抑制柴胡皂苷a的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化。

3.2 提取方式的確定 柴胡中的有效成分包括揮發(fā)油和皂苷兩大類成分[7]，前者提取采用水蒸氣蒸餾法，后者以溶劑法為主。本文主要優(yōu)化皂苷的提取，并不涉及揮發(fā)油。有文獻[3，8]采用先提取柴胡揮發(fā)油，再提取藥渣中的皂苷的方式提取柴胡，以達到對柴胡的充分利用，但是這種提取方式在提取揮發(fā)油的過程中已經(jīng)有部分柴胡皂苷a發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，換句話說這種提取方式在顧忌了揮發(fā)油的同時損失了柴胡皂苷a的提取率。

3.3 提取溶劑種類的確定 由表3的測定結(jié)果可知，對于不同濃度的中性乙醇水溶劑系統(tǒng)，50%和70%的乙醇對柴胡皂苷a的溶出度較高，其次是30%的乙醇，再次是95%的乙醇，溶出度最差的是水溶液?？紤]到成本的因素，50%乙醇是中性溶劑系統(tǒng)中對柴胡皂苷a溶出度最佳的溶劑。對于不同濃度堿性乙醇，同樣50%的堿性乙醇表現(xiàn)出了對柴胡皂苷a的良好溶出能力，且比中性50%乙醇的溶出量高近30%。可見，堿性50%乙醇對柴胡皂苷a的溶出能力最強。然而，實際生產(chǎn)中，柴胡往往是與其他藥材一同進行提取，如果采用堿性50%乙醇作為提取溶劑，那么在提高了柴胡皂苷a溶出度的同時，堿性環(huán)境極有可能對其他成分造成破壞，此時50%乙醇應(yīng)作為首選提取溶劑，而只有當提取的目的僅僅是柴胡皂苷a時，可選用堿性50%乙醇作為提取溶劑。

中醫(yī)臨床用藥的主要形式是煎劑，作為煎劑的提取溶媒水在表3中顯示出對柴胡皂苷a較低的溶出度，由于中藥發(fā)揮作用的機理是多成分、多靶點起效，因而據(jù)此判斷水不宜作為柴胡的提取溶劑是不可取的，該方面還有待進一步的深入研究。本文通過系統(tǒng)地考察提取溶劑對柴胡皂苷a溶出度的影響，為進一步規(guī)范柴胡的提取工藝提供參考。