兩種不同細(xì)菌鑒定法在臨床血液檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

陳華偉 張文軍 李德新(通訊作者)

101200北京市平谷區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科

細(xì)菌為原核微生物，形態(tài)微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，但無(wú)法在肉眼下對(duì)其進(jìn)行觀察，細(xì)菌檢測(cè)在臨床診斷和治療中具有重要的地位。近年來(lái)隨著臨床細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床對(duì)細(xì)菌鑒定和藥敏分析的要求也不斷提高，目前臨床細(xì)菌鑒定方法及技術(shù)較多，由于操作過(guò)程不同，且受主觀等因素影響，因此影響鑒定結(jié)果[1]。本文將比較常規(guī)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)和直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)在臨床血液檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值，旨在為臨床診斷和治療提供依據(jù)。

資料與方法

2013年9月-2016年9月收治發(fā)熱伴全身感染患者426 例，所有患者在入院前48 h 內(nèi)均未接受過(guò)藥物及相關(guān)治療，排除凝血功能障礙及血液系統(tǒng)疾病所致的發(fā)熱伴全身感染患者。其中男221例，女205例，平均年齡(57.2±2.5)歲。

檢測(cè)方法：留取所有患者的血液樣本20 mL，分別接種于含樹(shù)脂需氧培養(yǎng)瓶、含溶血素厭氧菌培養(yǎng)瓶中，并載入至Bact/ALERT 3D 全自動(dòng)血培養(yǎng)儀和BD BACTEC 9050 全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中。對(duì)于培養(yǎng)陽(yáng)性的血標(biāo)本分別采用常規(guī)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)法和直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)法進(jìn)行細(xì)菌鑒定。常規(guī)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)方法：將確定了的陽(yáng)性樣本分別接種至血平板、巧克力平板和麥康凱平板上進(jìn)行培養(yǎng)，在溫度35 ℃、濃度5%的二氧化碳條件下持續(xù)培養(yǎng)20 h，然后取菌落涂片，常規(guī)進(jìn)行革蘭染色，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果選擇適合的酶進(jìn)行氧化酶或觸酶試驗(yàn)。借助微生物鑒定儀：梅里埃VITEK 2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)。操作步驟：無(wú)菌棉簽挑取菌落至鑒定管，混勻5 s，等待10 s 使氣泡消失，用VITEK 2 DensiCHEKTM Plus 比濁儀調(diào)整菌液濃度0.5麥?zhǔn)蠁挝?，菌液配置后必須?0 s 內(nèi)加完。然后鑒定管菌懸液145 μL轉(zhuǎn)入藥敏管中，混勻。把鑒定/藥敏板卡分別插入鑒定管和AST 藥敏管。最后將患者以及鑒定/藥敏信息輸入儀器，并將鑒定/藥敏板放入儀器空位上，關(guān)好艙門即可。直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)法：使用無(wú)菌注射器將檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性的血液樣本抽取10 mL 至無(wú)菌試管中，使用密度梯度離心法以1 500轉(zhuǎn)/min的離心速率分離細(xì)菌，5～10 min的離心操作后，收集上清液，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，再進(jìn)行3 000轉(zhuǎn)/min的離心，離心時(shí)間15 min，祛除上清液后用PBS 洗滌沉淀。另取20 μL 懸液涂片對(duì)樣本進(jìn)行革蘭染色操作，倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，鑒定細(xì)菌為革蘭染色陽(yáng)性或陰性菌。試用無(wú)菌棉簽挑取沉淀物，并使用VITEK 2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌的鑒定和藥敏。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 17.0 軟件對(duì)搜集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，涉及的計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

細(xì)菌鑒定結(jié)果：426份血液標(biāo)本中檢出陽(yáng)性結(jié)果，檢出陽(yáng)性率92.5%，其中檢出革蘭陰性桿菌337 份(79.1%)，檢出革蘭陽(yáng)性球菌89份(20.9%)。直接檢測(cè)法對(duì)革蘭陰性桿菌檢驗(yàn)符合率和革蘭陽(yáng)性球菌檢驗(yàn)符合率分別為94.7%和96.7%，與常規(guī)法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.015，P=0.904，P＞0.05)，見(jiàn)表1。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果：直接法藥敏試驗(yàn)對(duì)革蘭陰性桿菌檢驗(yàn)?zāi)退幝屎兔舾新史謩e為97.9%和97.4%，對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌檢驗(yàn)?zāi)退幝屎兔舾新史謩e為97.8%和98.7%，與常規(guī)法比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.003， P=0.959， χ2=0.006， P=0.938，P＞0.05)，見(jiàn)表2。

討 論

感染患者機(jī)體內(nèi)會(huì)攜帶一定的耐藥性的細(xì)菌，若進(jìn)一步增強(qiáng)這些細(xì)菌的耐藥性，就會(huì)加重患者的病情，給臨床治療帶來(lái)一定的難度。因此對(duì)感染患者進(jìn)行及時(shí)有效的血液細(xì)菌學(xué)檢測(cè)及耐藥性檢測(cè)對(duì)于臨床診斷及指導(dǎo)臨床合理用藥具有重要意義，近年來(lái)抗生素濫用問(wèn)題嚴(yán)重，細(xì)菌的耐藥性和對(duì)抗生素的敏感性發(fā)生了巨大變化，使得細(xì)菌檢測(cè)的難度有所增加[2]，因此臨床工作者一直在探求一種方便、快捷、有效的鑒定方法，以提高臨床檢驗(yàn)質(zhì)量，從而為臨床診療提供依據(jù)。

目前臨床細(xì)菌鑒定的方法主要分為表型鑒定法和基因型鑒定法兩大類，前者主要是從細(xì)菌的形態(tài)、生理生化、細(xì)胞組分、蛋白質(zhì)等對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定，目前多數(shù)醫(yī)院由于條件的限制難以廣泛開(kāi)展基因型鑒定[3，4]。針對(duì)藥敏試驗(yàn)的方法也較多，包括紙片擴(kuò)散法、稀釋法、抗生素濃度梯度法等，但每種檢驗(yàn)方法均存在利弊[5]。

常規(guī)方法檢測(cè)陽(yáng)性血液標(biāo)本較為準(zhǔn)確，但藥敏試驗(yàn)及細(xì)菌鑒定速度均較慢，難以滿足臨床診療的需求[6]。本研究結(jié)果表明：直接藥敏試驗(yàn)細(xì)菌鑒定準(zhǔn)確率、抗生素耐藥率和敏感率檢測(cè)準(zhǔn)確率與常規(guī)檢測(cè)方法相近，這與國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[7，8]。直接藥敏試驗(yàn)在合適的溫度下對(duì)抑菌環(huán)大小進(jìn)行藥敏試驗(yàn)鑒定，無(wú)須進(jìn)行分離培養(yǎng)操作，操作更加方便快捷，能夠及時(shí)給臨床診斷和治療提供依據(jù)[9]。因此，當(dāng)患者病情復(fù)雜，但短時(shí)間不會(huì)威脅生命時(shí)可先行直接檢驗(yàn)，再行常規(guī)檢驗(yàn)，一般情況下采取直接藥敏試驗(yàn)即可達(dá)到檢驗(yàn)要求，臨床可廣泛開(kāi)展。

表1 兩種細(xì)菌鑒定法檢驗(yàn)符合率比較

表2 兩種細(xì)菌鑒定法藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析