SPF金黃地鼠乳汁成份分析

夏 爽，范方玲，甘 露，夏 放

(成都生物制品研究所有限責任公司，成都 610023)

金黃地鼠(golden hamster;Mesocricetusauratus)又稱敘利亞地鼠，毛色呈金黃色，成年體重120～150 g左右，染色體22對。金黃地鼠作為常用實驗動物，在醫(yī)學動物實驗研究中的作用越來越受到重視，使用量僅次于小鼠、大鼠和豚鼠而居嚙齒類第4位[1]。金黃地鼠的用途主要在三個方面，首先是對可誘發(fā)腫瘤的病毒很易感，腫瘤組織接種到口腔頰囊中易生長，也便于觀察，同時還是能夠誘發(fā)胰腺癌的唯一動物模型。故成為腫瘤學研究中最常用的動物；第二， 金黃地鼠常年發(fā)情，妊娠期短，性成熟早，繁殖傳代快，發(fā)情周期準確，特別適用于生殖生理研究；第三，金黃地鼠組織細胞體外培養(yǎng)容易建立二倍體細胞株，特適合組織培養(yǎng)研究。腎細胞可被做成細胞培養(yǎng)物接種病毒，用以分離或制備疫苗；為了長期保持已有SPF金黃地鼠種群的質(zhì)量優(yōu)勢，最大限度降低種群被污染的風險，為此需要建立一支無菌金黃地鼠種群，可以通過剖腹產(chǎn)技術(shù)，由無菌金黃地鼠代乳或者將無菌金黃地鼠直接降級為SPF金黃地鼠，從而避免種群由于污染而面臨毀滅的危險。無菌金黃地鼠還可作為某些人類腸道疾病的動物模型，在生物醫(yī)學研究領(lǐng)域有著不可替代的價值[2]。本文對金黃地鼠乳汁的主要成份進行測定，并與牛乳、人乳及嬰兒配方奶的主要成分進行比較，為下一步創(chuàng)建無菌金黃地鼠種群的人工哺乳工作及配方乳的配制工作提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF級金黃地鼠種群來自成都生物制品研究所有限責任公司[SCXK(川)2016-126]，分批選取60只分娩后(1～10 d)的哺乳期雌鼠。動物飼養(yǎng)間為C級屏障系統(tǒng)[SYXK(川)2016-090]，溫度控制范圍(20～26)℃，相對濕度40%～70%，日光照12 h，飼養(yǎng)間內(nèi)保持清潔、安靜、通風良好，定期消毒。金黃地鼠全價顆粒飼料，主要營養(yǎng)成份符合國家實驗動物配合飼料標準GB14924.1-2001和GB14924.3-2010，懷孕哺乳期間自由采食。本實驗遵循實驗動物使用的3R原則給予人道主義關(guān)懷。

1.2 實驗方法

1.2.1 地鼠乳汁的采集

每批選取10只分娩后(1～10 d)的哺乳期雌鼠，先將幼崽與母鼠分籠飼養(yǎng)4 h以上，保持母鼠水料充足。4 h以后給母鼠注射3%戊巴比妥鈉每只0.6 mL，后繼續(xù)注射獸用縮宮素(寧波市三生藥業(yè)有限公司，2 mL：每支10單位)每只0.3 mL。待母鼠完全麻醉處于放松狀態(tài)后，暴露乳頭，用溫水清潔乳頭皮膚并輕柔按摩，用自制電動吸奶裝置收集乳汁，隔日1次,連續(xù)3～5次，每只金黃地鼠采取乳汁總量約6～10 mL，每次采集完畢立即凍存于-26℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 檢測方法

將所凍存的金黃地鼠乳汁(混合樣品)低溫運送至廣州金域醫(yī)學檢驗中心有限由該中心按照國家標準的方法進行檢測，其中粗蛋白：參照GB/T 6432-1994 7.2；粗脂肪：參照GB/T 6433-2006；乳糖：參照GB/T 5413-2010第二法；灰分：參照GB/T 5009.4-2016第一法；水分：參照GB/T 5009.3-2016第一法；PH:參照GB/T5009.237-2016；鉀、鋅、錳、鈣、鐵、鈉、銅、鎂、鋁：參照GB/T5009.268-2016第一法；磷：參照GB/T 5009.87-2016第一法；氟：GB/T 5009.18-2003第三法；維生素C:參照GB/T 5009.86-2016第一法；維生素K1:參照GB/T 5009.158-2016第一法；維生素A參照GB/T 17817-2010第一法；維生素D:參照GB/T 5009.82-2016第四法；維生素E:參照GB/T 17812-2008第一法；維生素B1:參照GB/T 5009.84-2016第一法； 維生素B2:參照GB/T 5009.85-2016第一法；維生素B6:參照GB/T 5009.154-2016。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均采用國際標準單位換算。

2 結(jié)果分析

2.1 金黃地鼠乳汁成分

金黃地鼠乳汁由水分和總干物質(zhì)組成，其中總干物質(zhì)中又包括了脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、礦物質(zhì)及維生素等[3](表1)。金黃地鼠乳水分含量86.9%、脂肪2.4%、蛋白質(zhì)6.95%、乳糖2.61%、灰分0.83%(表1)。

2.2 金黃地鼠乳成分分析

金黃地鼠乳和牛乳、人乳的主要成份十分相似，都是由水分、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、鈣、磷、鉀、鈉、鎂、銅、鋅等物質(zhì)構(gòu)成[4]。本次參考的嬰兒配方奶粉為荷蘭生產(chǎn)的海普諾凱嬰兒配方奶粉(0～6個月齡適用)，金黃地鼠乳中蛋白質(zhì)含量明顯高于牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉，分別為牛乳的1.66倍，人乳的3.52倍，嬰兒配方奶粉的4.63倍；金黃地鼠乳中脂肪含量低于牛乳和嬰兒配方奶粉，僅為牛乳的35.6%，嬰兒配方奶粉的68.4%，與人乳接近；金黃地鼠乳中乳糖含量最低，僅為牛乳的58.7%，人乳的41.4%，嬰兒配方奶粉的18.5%；金黃地鼠乳微量元素中鉀、鈉、銅鋅的含量明顯高于牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉；維生素B2、維生素B6的含量也明顯高于牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉，具體參見表2。

表1 金黃地鼠乳主要成份含量表

表2 金黃地鼠乳，牛乳、人乳和嬰兒配方奶粉主要營養(yǎng)成分

3 討論

金黃地鼠在動物模型建立以及疫苗制造過程中的用途越來越廣泛，為進一步拓展金黃地鼠的應(yīng)用范圍，計劃建立無菌金黃地鼠種群。建立無菌金黃地鼠種群的必要性：可以長期保持已有SPF金黃地鼠種群的質(zhì)量優(yōu)勢，防止和避免SPF金黃地鼠種群受到污染而種群毀滅的危險；可以實驗性用于乙腦等疫苗的生產(chǎn)，以克服因SPF金黃地鼠攜帶菌污染細胞培養(yǎng)過程；作為人類疾病動物模型的材料，可用于多種人類疾病動物模型的建立和腸道菌群的研究。培育無菌動物通常采用無菌剖腹產(chǎn)方法，然后用配方乳或代乳喂養(yǎng)。乳汁是乳腺在受神經(jīng)和內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)下，腸內(nèi)吸收的物質(zhì)與血液之間的過濾，提取分離而生成，對自然環(huán)境中培育新生子代的成活率起到關(guān)鍵的作用[8]。本文對金黃地鼠乳汁的主要成分進行檢測，發(fā)現(xiàn)與人乳、牛乳、嬰兒配方奶粉的主要營養(yǎng)成分十分相似，均由水、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖、礦物質(zhì)及維生素等組成，初步弄清金黃地鼠乳的主要成份及含量。并與牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉的主要成分比較，由于哺乳動物物種特性的差異，金黃地鼠乳汁與牛乳、人乳及嬰兒配方奶粉在成分含量上還是存在明顯差異；同時可以根據(jù)金黃地鼠乳汁高蛋白、低脂肪和低乳糖的特點指導(dǎo)人工乳配方成分的調(diào)制，以提高人工喂養(yǎng)仔鼠的成功率，為建立無菌金黃地鼠種群提供科學依據(jù)和基礎(chǔ)保障。

注：金黃地鼠是倉鼠科倉鼠亞科金倉鼠屬動物，在公開出版物中使用倉鼠作為名稱更為科學。但鑒于目前我國實驗動物國家標準中提到的動物的種類都是地鼠，作為專業(yè)人員能夠清楚該物種在動物分類中地位，并不妨礙科學研究的成果和使用，故本文在發(fā)表時仍沿用“金黃地鼠”，待國標修訂后再統(tǒng)一命名為“倉鼠”。