基于Th17/Treg失衡的解毒祛瘀滋陰方治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡作用機制研究*

袁 曉 范永升 何兆春

1 浙江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院 浙江 杭州 310006

2 浙江中醫(yī)藥大學 浙江 杭州 310053

3 浙江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院 浙江 杭州 310005

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種自身免疫性疾病，以女性多見。近年來，人們對SLE免疫學發(fā)病機制研究有了新的進展，諸多研究顯示:Th17/Treg細胞免疫失衡參與了SLE異常免疫應答過程[1-2]。解毒祛瘀滋陰方是范永升教授治療SLE的經(jīng)驗方，已證實具有良好的臨床療效。本研究以Th17/Treg細胞免疫失衡為切入點，探討解毒祛瘀滋陰方對這一免疫平衡的調(diào)控作用。

1 資料和方法

1.1 一般資料:40例SLE女性患者選自浙江省中醫(yī)院、浙江省新華醫(yī)院門診及住院患者，隨機分為對照組和觀察組（統(tǒng)稱患者組），各20例。健康組20例女性選自浙江省中醫(yī)院體檢中心。對照組年齡19～60歲，平均38.0±10.6歲；病程2～68個月，平均29.2±18.6個月。觀察組年齡18～63歲，平均39.3±13.0歲；病程4～70個月，平均33.5±15.4個月。健康組年齡21～64歲，平均41.2±13.4歲。三組間年齡差異及對照組和觀察組間病程差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 診斷標準:SLE診斷標準參照美國風濕病學會（ARA）1997年修訂的SLE分類標準[3]。

1.3 治療方法:對照組:根據(jù)病情需要口服潑尼松5～60mg/d，同時給予胃黏膜保護劑、補鈣藥等，病情改善后嚴格按激素減量法漸次減量。觀察組:在對照組基礎上，聯(lián)合解毒祛瘀滋陰方(干地黃、七葉一枝花、積雪草、炒薏苡仁各15g，炙鱉甲、青蒿、赤芍各12g，升麻、佛手片各9g，生甘草6g)，并根據(jù)臨床癥狀變化加味用藥（皮疹、紅斑明顯加紫草、凌霄花各9g；關節(jié)痛加海桐皮、威靈仙各15g，秦艽12g；口腔潰瘍加生甘草7g，黃芩9g，苦參12g）。每天1劑，連續(xù)8周。

1.4 觀察指標:①患者組SLE活動指數(shù)（SLE-DAI）積分及潑尼松用量。②治療前及治療8周后（健康組僅入組時），肘靜脈取血，分離外周血單個核細胞，流式細胞檢測輔助性T細胞17（Th17）、調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）水平，ELISA法測定白細胞介素（IL）-17、轉化生長因子（TGF）-β水平。

1.5 統(tǒng)計學方法:統(tǒng)計分析采用SPSS 17.0軟件，各組計量資料以±s表示，多組間比較，若數(shù)據(jù)滿足正態(tài)性和方差齊性，采用單因素方差分析，各組間進一步比較采用S-N-K法，若為非正態(tài)分布，采用非參數(shù)檢驗；兩組間比較，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后SLE-DAI積分比較:見表1。

表1 兩組患者治療前后SLE-DAI積分比較（±s，分）

表1 兩組患者治療前后SLE-DAI積分比較（±s，分）

注:與治療前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與對照組比較，#P＜0.05。

治療后15.35±7.69*11.05±5.16**#組別對照組觀察組例數(shù)20 20治療前21.05±9.28 19.85±7.84

2.2 兩組患者治療前后潑尼松用量比較:見表2。

表2 兩組患者治療前后潑尼松用量比較（±s，mg/d）

表2 兩組患者治療前后潑尼松用量比較（±s，mg/d）

注:與治療前比較，**P＜0.01。

組別對照組觀察組治療后18.38±7.27**14.63±6.65**例數(shù)20 20治療前30.25±10.79 28.13±13.86

2.3 健康組與患者組治療前Th17、Treg占CD4+T細胞百分數(shù)比較:見表3。

表3 健康組與患者組治療前Th17、Treg占CD4+T細胞百分數(shù)比較（±s，%）

表3 健康組與患者組治療前Th17、Treg占CD4+T細胞百分數(shù)比較（±s，%）

注:與健康組比較，##P＜0.01。

組別健康組患者組Treg 3.41±0.77 1.96±0.98##例數(shù)20 40 Th17 1.25±0.39 2.39±0.76##

2.4 兩組患者治療前后Th17、Treg占CD4+T細胞百分數(shù)比較:見表4。

表4 兩組患者治療前后Th17、Treg占CD4+T細胞百分數(shù)比較（±s，%）

表4 兩組患者治療前后Th17、Treg占CD4+T細胞百分數(shù)比較（±s，%）

注:與治療前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與對照組比較，#P＜0.05。

Treg 1.88±1.02 2.26±0.87 2.05±0.96 2.81±0.82*#組別對照組例數(shù)20觀察組20時間治療前治療后治療前治療后Th17 2.45±0.80 1.97±0.61*2.33±0.74 1.59±0.52**#

2.5 健康組和患者組治療前IL-17和TGF-β水平比較:見表5。

表5 健康組與患者組治療前IL-17和TGF-β水平比較（±s，pg/ml）

表5 健康組與患者組治療前IL-17和TGF-β水平比較（±s，pg/ml）

注:與健康組比較，##P＜0.01。

組別健康組患者組TGF-β 33.63±6.67 25.56±4.70##例數(shù)20 40 IL-17 10.95±2.23 30.39±8.19##

2.6 兩組患者治療前后IL-17和TGF-β水平比較:見表6。

表6 兩組患者治療前后IL-17和TGF-β水平比較（±s，pg/ml）

表6 兩組患者治療前后IL-17和TGF-β水平比較（±s，pg/ml）

注:與治療前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與對照組比較，#P＜0.05。

TGF-β 24.94±4.98 27.03±4.57 26.19±4.44 30.24±5.16*#組別對照組例數(shù)20觀察組20時間治療前治療后治療前治療后IL-17 31.18±9.20 24.36±7.45*29.60±7.21 19.69±5.43**#

3 討論

Th17和Treg是兩類新近發(fā)現(xiàn)的CD4+T細胞亞群，Th17/Treg細胞免疫失衡，可引起全身或局部免疫應答異常，導致多種免疫性疾病、腫瘤等的發(fā)生[4]。目前主流觀點認為活動性SLE中存在Th17細胞數(shù)目增多，伴隨Treg細胞數(shù)目減少，即Th17/Treg細胞失衡參與了SLE異常免疫應答過程[5]。中醫(yī)學根據(jù)臨床癥狀不同，把SLE分別歸屬于“陰陽毒”“蝴蝶斑”“日曬瘡”“溫毒發(fā)斑”等范疇。范永升教授認為[6-7]，SLE病因病機為素體稟賦不足、腎精虧損為本，感受外界熱毒之邪、瘀血阻滯為標，虛實互為因果，尤其育齡女性氣火旺盛，多有陰虛內(nèi)熱，加之邪毒外襲，病久虛火灼津，陰血虧虛，故總以肝腎陰虛為本，熱毒、瘀血為標，這三者又相互聯(lián)系、互為因果。因此，以解毒祛瘀滋陰作為治療SLE的基本方法，創(chuàng)立“解毒祛瘀滋陰方”。方中干地黃、炙鱉甲、青蒿滋陰清熱；七葉一枝花、積雪草、升麻、生甘草清熱解毒；赤芍涼血活血解毒；炒薏苡仁健脾益氣；佛手片疏肝理氣。同時隨癥加減，效果較著。

本研究結果顯示:治療前，SLE患者外周血Th17占CD4+T細胞比例及IL-17水平顯著高于健康組，Treg占CD4+T細胞比例及TGF-β水平顯著低于健康組，提示SLE患者中Th17和Treg細胞占CD4+T細胞比例存在異常，Th17/Treg細胞失衡可能參與了SLE患者異常免疫應答過程，導致SLE的發(fā)生和發(fā)展。治療8周后，觀察組SLE-DAI積分變化明顯優(yōu)于對照組，潑尼松每日用量也較治療前有明顯減少；觀察組潑尼松每日用量低于對照組但尚無統(tǒng)計學差異，考慮SLE是一種慢性疾病，而本研究服藥療程8周相對較短，并且激素聯(lián)合中藥治療期間激素的減量亦是一個相對緩慢的過程，后期有待進一步延長療程觀察。治療后兩組患者較各自治療前均出現(xiàn)Th17細胞比例及IL-17水平下降，Treg細胞比例及TGF-β水平升高，但觀察組變化較對照組更為顯著，提示解毒祛瘀滋陰方的可能作用機制之一是通過對Th17和Treg細胞比例的調(diào)控，促進恢復Th17/Treg細胞免疫平衡來達到減毒、增效的作用。