李靜
【摘要】目的:綜述四物湯活性成分提取工藝研究進(jìn)展。方法:查閱近20年來(lái)有關(guān)四物湯活性成分提取的文獻(xiàn)。結(jié)論在提取中可結(jié)合各物質(zhì)活性分析,選取相應(yīng)成分為指標(biāo),選用最合適及最佳方案進(jìn)行提取。
【關(guān)鍵詞】四物湯;提取工藝;多糖;白芍苷;阿魏酸;揮發(fā)油
四物湯是補(bǔ)血調(diào)血的經(jīng)典名方,始見(jiàn)于宋代《太平惠民和劑局方》,由熟地、當(dāng)歸、白芍、川芎四味中藥組成,有“補(bǔ)血之專方”的美稱,常用于治血虛。四物湯有效成分包括阿魏酸、芍藥苷、沒(méi)食子酸、多糖類與揮發(fā)油等,方中所含芍藥苷、阿魏酸、沒(méi)食子酸及多糖類成分具有補(bǔ)血調(diào)血、增強(qiáng)機(jī)體免疫、抗腫瘤、抗放射性損傷、抗血栓、抑制血小板凝集以及抑制血栓素樣物質(zhì)的釋放、改善微循環(huán)、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等藥理作用,視為主要活性成分。
1整方提取
2015年版中國(guó)藥典給出四物合劑的提取工藝:當(dāng)歸和川芎冷浸0.5h,用水蒸氣蒸餾,水溶液另器保存,藥渣與白芍、熟地黃加水煎煮三次,第一次1h,第二、三次各1.5h,煎液合并濾過(guò)后與上述水溶液合并,加入乙醇使醇含量達(dá)55%。
1.1水提法
中藥復(fù)方傳統(tǒng)提取工藝大多為水提法,本處方中除揮發(fā)油外大部分成分都溶于水。
魏學(xué)軍等以四物湯中芍藥苷、沒(méi)食子酸和總多糖得率為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法,選取液固比、提取溫度、提取時(shí)間作為考察因素優(yōu)選提取工藝。結(jié)果表明提取時(shí)間和液固比具顯著性影響(P<0.01,P<0.05),提取溫度對(duì)結(jié)果影響無(wú)顯著性,以此確定最優(yōu)工藝為30倍量水,在溫度85°C下提取2次,每次提取3h。含量測(cè)定結(jié)果為芍藥苷21.31m/g,沒(méi)食子酸0.69m/g,多糖1.65/g。
郭江玉等以多糖、阿魏酸、芍藥苷、干膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素,運(yùn)用層次分析法確定權(quán)重,綜合評(píng)價(jià)最佳工藝。結(jié)果表明影響因素大小為提取次數(shù)>提取時(shí)間>加水量,其中提取次數(shù)具有顯著性影響(P<0.05),最終確定最佳工藝為10倍量水,提取2次,每次2.5h。測(cè)定結(jié)果為多糖1.54g/g,阿魏酸14.32mg/g、芍藥苷162.85mg/g干膏率44.61%。
伍勇等利用星點(diǎn)設(shè)計(jì)一效應(yīng)面法,以藥材浸泡時(shí)間、加水量和提取時(shí)間為自變量,以浸膏得率和梓醇、芍藥苷、阿魏酸含量的總評(píng)“歸一值”為評(píng)價(jià)指標(biāo),進(jìn)行二次多項(xiàng)式擬合,描繪三維效應(yīng)面,從效應(yīng)面上選取最佳工藝。最終確定最佳工藝為加水10.2倍量,浸泡68min后提取105min。含量測(cè)定結(jié)果為浸膏得率15.7%,芍藥苷230.61m/g、梓醇23.59mg/g、阿魏酸14.26m/g。
水提法中提取溫度對(duì)結(jié)果無(wú)顯著性影響,而提取時(shí)間和液固比具顯著性影響,而其中提取次數(shù)影響最大。
1.2水提醇沉法
目前大多數(shù)中藥制劑工藝采用乙醇沉 淀法以除去水溶性雜質(zhì)。即應(yīng)用一定濃度乙醇對(duì)水提取物選擇性溶解而達(dá)到精制純化目的。
何瑤等結(jié)合藥效作用,研究不同提取工藝對(duì)血虛小鼠造血功能的影響。結(jié)果表明3種工藝均能改善血虛模型小鼠造血功能,其中水提組和50%乙醇滲漉組與模型組比較均有差異性顯著(P<0.05)且優(yōu)于水提醇沉組。
譚有能嘲研究水提法、水提55%醇沉法、大孔吸附樹(shù)脂除雜提取液對(duì)血虛小鼠的補(bǔ)血作用。結(jié)果提示水提液和水提醇沉液均有補(bǔ)血作用且水提液>55%醇沉液;而大孔吸附樹(shù)脂除雜液并不能提高以上指標(biāo)。
梁乾德比較20%乙醇沉淀物、80%乙醇沉淀物和80%乙醇沉淀上清提取物對(duì)血虛小鼠補(bǔ)血作用,結(jié)果表明80%醇沉和80%醇沉上清液可升高外周血像白細(xì)胞,而20%醇沉無(wú)明顯作用。
水提醇沉法結(jié)合藥效實(shí)驗(yàn)表明,水提醇沉法藥效并不如水提法。20%醇沉法無(wú)效,而50%、55%、80%醇沉法均有補(bǔ)血效果。原因可能是多糖為補(bǔ)血作用重要成分,20%醇沉物為粘液質(zhì)以及淀粉、大分子多糖、蛋白質(zhì)等,多糖含量較低;而80%醇沉物主要為低聚糖和多糖。另外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大孔樹(shù)脂除雜后無(wú)補(bǔ)血作用,考慮為失去多糖成分所致。
1.3乙醇提取
王玉華采用乙醇回流法,以乙醇濃度、溶媒用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為影響因素,以芍藥苷、阿魏酸及出膏量為測(cè)定指標(biāo),采用正交試驗(yàn)優(yōu)選工藝。結(jié)果顯示回流次數(shù)、回流時(shí)間和乙醇濃度具有顯著性影響,溶劑用量無(wú)顯著影響。最終確定最佳工藝為95%乙醇回流提取二次,分別為1.5h、1.0h,溶媒用量分別為8倍量、6倍量。含量測(cè)定結(jié)果為芍藥苷5.09m/g,阿魏酸223.9mg/g,出膏率21.32%。
王玉華同時(shí)用冷浸法提取,測(cè)得阿魏酸含量為96.84u/g,芍藥苷2.45mg/g,與回流法相比提取含量低且耗時(shí)長(zhǎng)。
1.4乙酸乙酯提取
陳薇以乙酸乙酯進(jìn)行提取并研究其促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)增殖的活性。結(jié)果表明提取成分包括蒿本內(nèi)酯、十六酸甲酯、十八酸乙酯,具有較強(qiáng)的促進(jìn)體外增殖的活性。
賈梅等研究乙酸乙酯對(duì)急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)、凝血功能和血小板系統(tǒng)的影響,發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯提取液顯著降低大鼠各切變率下全血黏度、血漿黏度;明顯延長(zhǎng)凝血酶時(shí)間(TT),凝血酶原時(shí)間(PT),活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT),降低血漿纖維蛋白原(FIB)含量;明顯抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率;顯著降低血漿TXB2含量,升高6-ket0-PGFla含量(P<0.01)。
2揮發(fā)油的提取
四物湯中揮發(fā)油主要來(lái)源于當(dāng)歸和川芎。當(dāng)歸揮發(fā)油具有降低血壓、改善心肌缺血、抗心律失常、提高機(jī)體免疫功能及抗炎鎮(zhèn)痛等藥理作用;川芎揮發(fā)油具有抑制血小板活化,改善微循環(huán)等,但性質(zhì)極不穩(wěn)定。
譚有能認(rèn)為藥典工藝提取揮發(fā)油含量低,原因?yàn)槭紫葥]發(fā)油一般提取時(shí)間為3-8h,而藥典工藝為30min其次實(shí)驗(yàn)室提取率及藥物中揮發(fā)油含量均低。
楊歡等采用正交試驗(yàn)法,以當(dāng)歸川芎粉末粒度、加水量、提取時(shí)間為主要影響因素,以揮發(fā)油得率為評(píng)價(jià)指標(biāo),以水蒸氣蒸餾法提取。結(jié)果表明粉末粒度和提取時(shí)間具有顯著影響(p<0.05),最終確定最佳工藝為:取當(dāng)歸、川芎飲片粉碎成中粉,加入8倍量水,浸泡30min,水蒸氣蒸餾提取5h。3小結(jié)
中藥活性成分提取是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化戰(zhàn)略的重要組成部分。以上所述四物湯活性成分提取方法各有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),且得到活性物質(zhì)含量差別較大。在提取中可結(jié)合各物質(zhì)活性分析,選取相應(yīng)化合物為指標(biāo),選用最合適及最佳方案進(jìn)行提取。