miRNA-329和Tiam1在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義*

田 衍，舒 若，曾玉劍，王昆華，羅華友

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃腸與疝外科，昆明 650032)

胃癌是最常見(jiàn)的癌癥之一，主要發(fā)生在亞洲國(guó)家，包括韓國(guó)、日本和中國(guó)[1]。胃癌的發(fā)生受到多種因素的影響，包括高鹽食物、硝化食品和酒精攝入過(guò)量，水果和蔬菜攝入過(guò)少，吸煙和幽門螺旋桿菌感染等[2]。與其他惡性腫瘤一樣，遺傳和表觀遺傳因素均參與了胃癌的發(fā)病機(jī)制[3]。如果在發(fā)病早期診斷出胃癌，其病死率會(huì)大大降低[4]，因此尋找發(fā)病早期的特異性腫瘤標(biāo)記物來(lái)篩選高風(fēng)險(xiǎn)人群具有重要作用。但是，由于腫瘤標(biāo)記物的低敏感度和特異度，檢測(cè)胃癌的標(biāo)記物較為有限[5]。因此，發(fā)現(xiàn)診斷胃癌的新的標(biāo)記物是學(xué)界目前亟待解決的重大問(wèn)題。

表1 RT-qPCR檢測(cè)基因的引物序列

miRNA是一類片段大小為21～25 bp的非編碼RNA，它們能夠通過(guò)抑制mRNA的翻譯或者綁定mRNA的3′-UTR區(qū)減少mRNA分子，從而沉默它們同源的靶基因,在不同的細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮重要作用，維持正常的生理環(huán)境[6-8]。在癌癥中，特別的miRNA能夠作為抑癌因子或致癌因子，因此被認(rèn)為是癌癥早期診斷和判斷預(yù)后的生物標(biāo)記物[9]，能夠控制腫瘤的多種功能，包括細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、入侵、分化、凋亡和代謝過(guò)程等[10]。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-329(miR-329)在胃癌中低表達(dá)，而其靶基因T淋巴瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子1(Tiam1)在胃癌中高表達(dá)[11-12]。但目前綜合分析miR-329和Tiam1在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義的文獻(xiàn)較少，本研究通過(guò)檢測(cè)胃癌組織和癌旁組織中miR-329、Tiam1 mRNA表達(dá)，分析兩者相關(guān)性，并且觀察它們與胃癌病理特征的關(guān)系，以探討胃癌的發(fā)病機(jī)制和潛在的藥物治療靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1一般資料 在取得患者知情同意后，收集本院2015年6月至2017年3月手術(shù)切除的胃癌組織標(biāo)本及正常的癌旁組織(距離癌組織大于3 cm)，手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本置于-80 ℃冰箱保存。標(biāo)本共計(jì)36例，其中男23例，女13例；年齡40～79歲，平均(67.89±8.19)歲。參考2010年國(guó)際抗癌聯(lián)盟/美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(UJCC/AICC)的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)對(duì)胃癌組織進(jìn)行臨床分期[13]。

1.2方法

1.2.1檢測(cè)方法 按照Trizol試劑說(shuō)明書取約50 mg組織提取總RNA，RNase-Free H2O溶解RNA，微量分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度及純度，然后反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，-80 ℃保存?zhèn)溆?。采用Taqman RT-PCR kit進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)miR-329以U6為內(nèi)參基因，檢測(cè)Tiam1 mRNA表達(dá)水平以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參基因，引物序列見(jiàn)表1。反應(yīng)在ABIQ6型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行，測(cè)定每個(gè)樣品的Ct值，相對(duì)含量為2-△△Ct。

1.2.2觀察指標(biāo) 記錄并統(tǒng)計(jì)所有患者標(biāo)本的臨床分期及是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。

2 結(jié) 果

2.1miR-329與Tiam1 mRNA在胃癌組織和癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量分析 胃癌組織的miR-329水平比癌旁組織低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；胃癌組織Tiam1 mRNA水平比癌旁組織高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 miR-329、Tiam1 mRNA在胃癌組織和癌旁組織中的水平比較

2.2miR-329與Tiam1 mRNA的相關(guān)性分析 將miR-329與Tiam1 mRNA在胃癌組織與癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示二者表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.854，P<0.01)，見(jiàn)圖1。

圖1 miR-329與Tiam1 mRNA表達(dá)的相關(guān)性

2.3miR-329、Tiam1表達(dá)與胃癌主要臨床病理特征的關(guān)系 在不同臨床分期中，miR-329和Tiam1 mRNA水平表現(xiàn)出不同的趨勢(shì)。隨著臨床分期的進(jìn)展，miR-329水平下降，其中Ⅲ期和Ⅳ期胃癌組織中miR-329水平明顯低于Ⅰ期和Ⅱ期胃癌組織(P<0.05)。隨著臨床分期的進(jìn)展，Tiam1 mRNA表達(dá)上升，其中Ⅲ期和Ⅳ期胃癌組織中Tiam1 mRNA水平明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期胃癌組織(P<0.05)。miR-329在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達(dá)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中Tiam1 mRNA的水平明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 miR-329、Tiam1 mRNA水平與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

胃癌是一種惡性上皮腫瘤疾病，具有高發(fā)病率和病死率[14-16]。研究表明，miRNA在多種癌癥中異常表達(dá)，并且參與癌癥的發(fā)生和發(fā)展[17-19]。miR-329在許多癌癥中低表達(dá)，如神經(jīng)母細(xì)胞瘤、多形性膠質(zhì)細(xì)胞瘤和胰腺癌等[20-22]。miR-329通過(guò)綁定KDM1A能夠抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)[20]。而在胃癌中，通過(guò)下調(diào)Tiam1、miR-329能夠抑制細(xì)胞的入侵和生長(zhǎng)[11]。

本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中miR-329表達(dá)下降，同時(shí)Tiam1過(guò)表達(dá)，兩者呈明顯負(fù)相關(guān)。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道及生物信息學(xué)分析，猜測(cè)腸道正常組織miR-329對(duì)Tiam1的表達(dá)負(fù)向調(diào)控。在各種致瘤因子的刺激下，miR-329對(duì)Tiam1的負(fù)向調(diào)控相對(duì)較弱，從而使Tiam1的表達(dá)在病理狀態(tài)下增加，影響腫瘤的微環(huán)境，從而進(jìn)一步誘導(dǎo)和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn)，與癌旁正常組織相比，Tiam1在胃癌組織中的表達(dá)升高，且TNM分期為Ⅰ、Ⅱ期胃癌組織中miR-329的表達(dá)水平明顯高于Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織(P<0.05)，而Ⅰ、Ⅱ期胃癌組織中Tiam1 mRNA的表達(dá)水平明顯低于Ⅲ、Ⅳ期胃癌(P<0.05)，因此推測(cè)miR-329和Tiam1 mRNA可能成為胃癌臨床分期的指標(biāo)。另外，miR-329在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達(dá)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Tiam1 mRNA表達(dá)則與其相反。曹蘇娟等[23]研究發(fā)現(xiàn)，與正常胃黏膜組織相比，Tiam1在胃癌組織中高表達(dá)，且隨著TNM分期的升高和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，Tiam1蛋白染色陽(yáng)性率逐漸升高。LIU等[24]研究發(fā)現(xiàn)Tiam1在轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌細(xì)胞系(LoVo和SW620)中的表達(dá)明顯高于原發(fā)性結(jié)腸癌細(xì)胞系(LS174T、SW480、HCT116、LST、HRT和Hee8693)的表達(dá)，這說(shuō)明Tiam1基因與癌癥轉(zhuǎn)移性相關(guān)。上述結(jié)果均證明，Tiam1的表達(dá)與癌癥的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。而本文結(jié)果提示，胃癌中miR-329表達(dá)下降，Tiam1表達(dá)上調(diào)可能是胃癌的發(fā)病機(jī)制之一，miR-329和Tiam1可能是胃癌潛在的診斷標(biāo)志物。