關(guān)于豬場(chǎng)偽狂犬病的幾點(diǎn)思考

李相釗 ，吳美芹，呂翠 ，馬小明

(1.齊魯動(dòng)物保健品有限公司，250100；2.煙臺(tái)招遠(yuǎn)市畢郭畜牧獸醫(yī)站，265412；3.安丘市畜牧局262100)

1 豬偽狂犬病的流行動(dòng)態(tài) （見(jiàn)圖1）

2 豬偽狂犬病的反思

自2011年以來(lái)，全國(guó)豬場(chǎng)偽狂犬病再次席卷全國(guó)，整個(gè)行業(yè)為之震驚，很多行業(yè)從業(yè)者為之困惑，利用gB-ELISA方法檢測(cè)，gB抗體合格率幾乎達(dá)到了100%，但確實(shí)豬偽狂犬病發(fā)生了，到底問(wèn)題出在哪里？ 有人說(shuō)是毒株變異了，毒力變強(qiáng)了，現(xiàn)有的疫苗保護(hù)不住了；也有人說(shuō)，現(xiàn)有免疫程序有問(wèn)題，已經(jīng)不適合當(dāng)下的豬偽狂犬病的防控現(xiàn)狀了?？傊?，眾說(shuō)紛紜，但不可否認(rèn)的事實(shí)：一是發(fā)生豬偽狂犬病的豬場(chǎng)確實(shí)免疫過(guò)疫苗了；二是相同的疫苗，不同的豬場(chǎng)，有的發(fā)病了，有的沒(méi)有發(fā)?。蝗撬袑＜医o出的解決方案的核心思想均是高強(qiáng)度免疫方案，增加免疫次數(shù)+提高疫苗有效含量，保護(hù)率確實(shí)明顯改觀?；谝陨鲜聦?shí)，我們需要反思的是：只有更換所謂的變異毒株才能保護(hù)嗎？現(xiàn)有偽狂犬疫苗產(chǎn)品，調(diào)整免疫方案能不能保護(hù)的?。縢B抗體合格率幾乎都是100%，而且抗體值比較高，為什么還不能阻止野毒的感染？針對(duì)各個(gè)階段的豬只，gB抗體合格率幾乎都是100%的現(xiàn)狀，如何利用gB-ELISA方法推薦首免日齡？

3 關(guān)于豬場(chǎng)偽狂犬病的思考

3.1 思考一：只有更換所謂的變異毒株才能保護(hù)豬不患偽狂犬??？

誠(chéng)然，目前普遍認(rèn)為，如果免疫某種疫苗，過(guò)去沒(méi)有問(wèn)題，現(xiàn)在保護(hù)不住或者保護(hù)率下降了，我們就會(huì)立體構(gòu)象形成蛋白質(zhì)），氨基酸沒(méi)有變化，則蛋白質(zhì)就不會(huì)變化，蛋白質(zhì)不變，則血清型就不會(huì)發(fā)生變化，換一句話講，基因型發(fā)生變異，則血清認(rèn)為毒株變異了，對(duì)不上型了，需要更換毒株了，否則該病防不住。這里需要明確的是，我們通常講的對(duì)不上型指的是什么？基因型還是血清型？準(zhǔn)確來(lái)講，是指血清型匹配，血清型匹配才能夠保護(hù)。但目前的事實(shí)是很多人把基因型變化，產(chǎn)生了差異，就認(rèn)為需要更換毒株了。在這里，筆者認(rèn)為這是偷換概念，因?yàn)榛虻淖儺惿踔镣蛔兪菚r(shí)時(shí)刻刻發(fā)生的事，雖然有些基因發(fā)生變異，不代表氨基酸產(chǎn)生變化（3個(gè)核苷酸組成的密碼子編碼1個(gè)氨基酸，而1個(gè)氨基酸可能有多種核苷酸密碼子組成，3個(gè)核苷酸組成的密碼子，其中第二位核苷酸、第三位核苷酸發(fā)生變化，可能編碼的氨基酸仍然不會(huì)變，多個(gè)氨基酸形成多肽，多肽通過(guò)型不一定變異。從這個(gè)角度看，很多人過(guò)度夸大了基因變異的作用，或者是在市場(chǎng)營(yíng)銷過(guò)程中強(qiáng)行差異化產(chǎn)生的結(jié)果。而異源疫苗這類產(chǎn)品，指利用不同種微生物菌(毒)株制備的疫苗：如犬接種麻疹疫苗后能產(chǎn)生對(duì)犬瘟熱的抵抗力；兔注射纖維瘤病毒疫苗后能抵抗粘液瘤??；或用同一種中某型微生物種毒制備的疫苗，接種動(dòng)物后能使其獲得對(duì)異型病原體的抵抗力：如牛、羊接種豬型布氏桿菌弱毒菌苗后，能使牛和羊獲得牛型和羊型布氏桿菌病的免疫力，預(yù)防雞馬立克病的火雞皰疹病毒 （馬立克共3個(gè)血清型，1型致病，2、3型不致病，從火雞分離的3型皰疹病毒對(duì)雞不致病，對(duì)雞馬立克有良好免疫力）。異源疫苗很好的說(shuō)明了這個(gè)問(wèn)題，雖然基因組有明顯的不同，但可以編碼成相同的蛋白，也就具有了交叉保護(hù)，也就是說(shuō)即使不是同種類病原，也可以有較好的保護(hù)。

圖1 豬偽狂犬病的流行動(dòng)態(tài)

圖2 豬偽狂犬野毒檢測(cè)結(jié)果分析

3.2 思考二：現(xiàn)有偽狂犬疫苗產(chǎn)品，調(diào)整免疫方案能不能保護(hù)的?。?/h3>

目前，由于沒(méi)有真正的變異毒株疫苗，現(xiàn)在能夠做的就是改變方案，在2011年之前，偽狂犬最流行的免疫方案是，母豬普免3次/年，仔豬8～10周，免疫一次。這種免疫方案也收到了非常好的免疫效果，當(dāng)時(shí)偽狂犬的野毒帶毒率極低，基本達(dá)到了可執(zhí)行凈化的標(biāo)準(zhǔn)了。但從2011年之后風(fēng)云突變，卻出現(xiàn)了偽狂犬大流行。盡管對(duì)出現(xiàn)偽狂犬再次大流行的原因有諸多爭(zhēng)議，但給出的解決方案卻驚人的一致：高強(qiáng)度免疫法：增加免疫次數(shù)+提高疫苗有效含量，雖然沒(méi)有完全控制住偽狂犬的野毒感染，但抑制了野毒的蔓延，野毒感染率呈逐年明顯下降的趨勢(shì)，從側(cè)面證實(shí)了高強(qiáng)度免疫法的有效性。（圖2援引齊魯檢測(cè)中心數(shù)據(jù)）

而目前高強(qiáng)度免疫法基本上采用：母豬 4～5 次/年，仔豬 1 日齡，噴鼻，35～70 日齡肌注二免，90～110 日齡肌注三免這種方法。而從另一個(gè)角度，采用免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果看，提高疫苗的有效含量完全可以保護(hù)野毒的攻擊，從不同權(quán)威機(jī)構(gòu)的結(jié)果看，疫苗有效含量在106.3～107.0TCID50之間。免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果從另一個(gè)角度也反映了偽狂犬病毒的毒力確實(shí)增強(qiáng)了，疫苗的免疫保護(hù)需要更高的含量了。

3.3 思考三：gB抗體合格率幾乎都是100%，而且抗體值比較高，為什么還不能阻止野毒的感染？

圖3為某規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬gB抗體、gE抗體檢測(cè)結(jié)果，gB各個(gè)階段的豬只抗體合格率幾乎都是100%，而gE抗體也在45.5%～100%，gB抗體雖高，依然沒(méi)有阻止野毒感染。該豬場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果基本反映了中國(guó)豬場(chǎng)的現(xiàn)狀。在這里，很多人就很困惑了，抗體水平如此高，為什么還能發(fā)生偽狂犬或出現(xiàn)野毒感染呢？這也是炒作毒株變異能夠讓養(yǎng)豬場(chǎng)能夠接受的原因 （毒株變異了，抗體中和野毒感染能力變?nèi)趿耍钥贵w水平雖高，但不能阻止野毒感染）。我們需要科普的是，免疫偽狂犬疫苗，能不能保護(hù)得住偽狂犬病，需要看總免疫力水平是否足夠高，不僅僅單指抗體水平多高，我們所講的抗體主要指體液免疫產(chǎn)生的中和抗體，主要包括gB抗體，gC抗體、gD抗體,而gB-ELISA主要檢測(cè)gB抗體，也是偽狂犬產(chǎn)生主要中和抗體的中和位點(diǎn)，所以也不能完全代表體液免疫力，除此之外，總免疫力還需要看細(xì)胞免疫、黏膜免疫水平，換一句話講，偽狂犬免疫力=體液免疫 （gB抗體+gC抗體+gD抗體）+細(xì)胞免疫+體液免疫，目前檢測(cè)方法，細(xì)胞免疫、黏膜免疫基本沒(méi)有進(jìn)行評(píng)估，如果體液免疫力高，細(xì)胞免疫力不足、黏膜免疫不足，則總免疫力依然會(huì)不高，依然會(huì)出現(xiàn)野毒感染，再者我們講的體液免疫力高，主要是指gB抗體高，gC抗體、gD抗體,也是沒(méi)有評(píng)估的，如果出現(xiàn)gC抗體、gD抗體不高，則也會(huì)出現(xiàn)體液免疫水平其實(shí)并不高的現(xiàn)象。所以會(huì)出現(xiàn)gB抗體合格率幾乎都是100%，而且抗體值比較高，依然會(huì)出現(xiàn)野毒感染的現(xiàn)狀了。從這個(gè)角度看，免疫偽狂犬疫苗能不能保護(hù)得住野毒感染，免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)就是最好的驗(yàn)證方法了，因?yàn)樵摲椒紤]到了包含體液免疫力、細(xì)胞免疫力、體液免疫力的總免疫力了。

圖3 2018年某規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬抗體檢測(cè)結(jié)果分析

3.4 思考四：針對(duì)各個(gè)階段的豬只，gB抗體合格率幾乎都是100%的現(xiàn)狀，如何利用gB-ELISA方法推薦首免日齡？

如果執(zhí)行現(xiàn)有的高強(qiáng)度免疫方案，我們需要解決一個(gè)問(wèn)題，仔豬第一次肌注的首免日齡時(shí)間，因?yàn)橛捎谀肛i免疫次數(shù)，免疫的有效疫苗含量大幅提高，那仔豬的母源抗體勢(shì)必也會(huì)比較高，母源抗體的持續(xù)時(shí)間也會(huì)變長(zhǎng)，豬場(chǎng)需要什么標(biāo)準(zhǔn)確定首免日齡呢？這確實(shí)是不得不面對(duì)的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，否則會(huì)出現(xiàn)免疫時(shí)機(jī)不合適，出現(xiàn)母源抗體中和疫苗毒的現(xiàn)象，人為造成免疫空白期，加速了偽狂病的發(fā)生。目前檢測(cè)偽狂犬母源抗體持續(xù)時(shí)間采用較多的是IDEXX公司的gB-ELISA試劑盒，但通過(guò)檢測(cè)gB抗體發(fā)現(xiàn)，各個(gè)階段幾乎是100%，面對(duì)這種現(xiàn)狀就很更難確定首免日齡了。針對(duì)這種現(xiàn)狀，如何利用gB-ELISA試劑盒指導(dǎo)生產(chǎn)呢？畢竟gB-ELISA是一種方便，快速、標(biāo)準(zhǔn)的方法，為此，很多權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行過(guò)大量的摸索，也總結(jié)很多經(jīng)驗(yàn)，其中，最能被很多學(xué)者接受的主要有兩種方法，均是優(yōu)化了gB-ELISA評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，使其更符合目前中國(guó)偽狂犬病的流行現(xiàn)狀，這兩種gB-ELISA試劑盒改進(jìn)方法是：一是可以通過(guò)血清1∶40稀釋檢測(cè)，再執(zhí)行S/N＞0.7（陰性）的數(shù)量占整個(gè)檢測(cè)群體20%～40%為最佳免疫時(shí)間 （與中和試驗(yàn)測(cè)中和抗體結(jié)果呈正相關(guān)）。二是正常按照試劑盒操作，執(zhí)行 S/N＞0.2（定為陰性，標(biāo)準(zhǔn)為0.7，提高了要求）的數(shù)量占整個(gè)檢測(cè)群體20%～40%為最佳免疫時(shí)間。此兩種方法，有異曲同工之妙，優(yōu)化的結(jié)果，均是拉開(kāi)了不同檢測(cè)樣品間的離散度，從而具有了區(qū)分意義，找到了合適的臨界點(diǎn)。