銅陵地區(qū)不同種類牡丹籽提取物抑菌性比較

金 磊方 凌 汪 穎

（銅陵市食品藥品檢測中心，安徽銅陵 244000）

牡丹是毛茛科多年生落葉小灌木，經(jīng)培育繁衍至今已有幾百個品種，銅陵牡丹屬江南品種群。牡丹花朵碩大，品種繁多，花色奇絕，寓意富貴繁榮，和平幸福，可作觀賞之用；牡丹皮是一種常用中藥，性、苦、辛，微寒，具有鎮(zhèn)靜、解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌等功能。其中產(chǎn)自銅陵鳳凰山地區(qū)的稱為“鳳丹”的牡丹最為出名。近年來，隨著牡丹籽油被國家批準(zhǔn)為新資源食品，油用牡丹也逐漸走進人們生活。本試驗以銅陵鳳凰山地區(qū)的觀賞牡丹、藥用牡丹、油用牡丹為研究對象，對幾種不同類型牡丹的牡丹籽提取物的抑菌作用進行比較，以期為牡丹進一步開發(fā)以及不同類型牡丹種植提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料與儀器

試驗材料：2014年5月6日、2015年5月13日、2016年5月10日于安徽銅陵鳳凰山景區(qū)牡丹園采集觀賞型紫斑牡丹籽約100 g；2014年5月6日、2015年5月13日、2016年5月10日于安徽銅陵新橋鎮(zhèn)鳳凰村采集藥用鳳丹籽約100 g；2014年5月12日、2015年5月15日、2016年5月16日由銅陵市食品藥品檢驗中心提供當(dāng)年油用牡丹籽約100 g；2014年5月6日、2015年5月13日、2016年5月10日于安徽銅陵新橋鎮(zhèn)鳳凰村牡丹混載區(qū)分別采集觀賞型紫斑牡丹籽、藥用鳳丹籽、油用牡丹籽各約100 g。

1.1.2 供試菌種

經(jīng)液體、斜面2次復(fù)壯活化后的沙門氏菌(Salmonella sp.)、根霉(Rhizopus)，由銅陵市食品藥品檢驗中心提供。

1.1.3 主要儀器

諾基SHZ-C水浴恒溫振搖器；Lab Tech EV331旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；賽多利斯BSA224S-CW電子天平(0.1 g)；LMQ.C立式滅菌器；SPX-250B-Z生化培養(yǎng)箱；DHP-9162B電熱恒溫培養(yǎng)箱；蘇凈BHC-1300Ⅱ-A2生物安全柜。

1.1.4 主要試劑

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、無菌蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 牡丹籽提取物的制備

取上述試驗材料中不同類型不同地區(qū)的牡丹籽去皮、粉碎、烘干，稱量約50 g，加入200 mL正己烷，于水浴恒溫振搖器50℃振蕩提取10 h，過濾；將濾渣烘干，各稱量約30 g，加入95%乙醇150 mL，于水浴恒溫振搖器60℃振蕩提取3 h，過濾，濾渣按上述操作重復(fù)提取1次，合并濾液，將其減壓濃縮成浸膏。將浸膏經(jīng)3次，每次用無水乙醇25 mL溶解洗滌，合并洗液。將洗液減壓濃縮后得到脂溶成分a以及水溶成分b。

1.2.2 菌懸液的制備

將復(fù)壯活化后的供試菌種沙門氏菌接種至營養(yǎng)瓊脂平板，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h；根霉接種至孟加拉紅平板，于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，用無菌蒸餾水稀釋配制成106cfu/mL～107cfu/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 牡丹籽提取物抑菌試驗

將脂溶成分a用甲醇溶解，水溶成分b用無菌蒸餾水溶解，分別定容至25 mL，得到試液a、b。取6 mm濾紙片置培養(yǎng)皿中經(jīng)121℃、20 min滅菌，烘干后用無菌鑷子將其放入上述試液a、b中浸潤2 h。用移液槍分別移取沙門氏菌和根霉菌懸液0.1 mL于配制好的營養(yǎng)瓊脂平板和孟加拉紅平板，涂布使其均勻分布在培養(yǎng)基表面。夾取3片濾紙片放入含菌平皿中，分別置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h、28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，量取抑菌圈直徑。重復(fù)3次，計算平均值，并用甲醇和無菌蒸餾水代替菌懸液做空白對照。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同牡丹籽提取物抑菌效果

不同牡丹籽提取物抑菌效果分別見圖1、圖2、圖3、圖4。由圖可知，牡丹籽提取物a對沙門氏菌和根霉有抑菌效果；牡丹籽提取物b對根霉有抑菌效果；不同類型牡丹籽的抑菌效果不同：藥用型＞油用型＞觀賞型，且抑菌效果比較穩(wěn)定；甲醇和無菌蒸餾水組抑菌圈直徑均為0 mm，無抑菌效果。

圖1 2014-2016牡丹籽提取物a對沙門氏菌的抑菌作用

圖2 2014-2016牡丹籽提取物a對根霉的抑菌作用

圖3 2014-2016牡丹籽提取物b對沙門氏菌的抑菌作用

圖4 2014-2016牡丹籽提取物b對根霉的抑菌作用

2.2 混栽區(qū)內(nèi)不同牡丹籽提取物抑菌效果

混栽區(qū)內(nèi)牡丹籽提取物抑菌效果分別見圖5、圖6、圖7、圖8。由圖可知，混栽區(qū)內(nèi)牡丹籽提取物抑菌效果同2.1，但有比較明顯地減弱趨勢。

圖5 2014-2016混栽區(qū)牡丹籽提取物a對沙門氏菌的抑菌作用

圖6 2014-2016混栽區(qū)牡丹籽提取物a對根霉的抑菌作用

圖7 2014-2016混栽區(qū)牡丹籽提取物b對沙門氏菌的抑菌作用

圖8 2014-2016混栽區(qū)牡丹籽提取物b對根霉的抑菌作用

3 討論

本次試驗采用抑菌圈法對銅陵地區(qū)不同類型的牡丹籽提取物的抑菌作用進行研究，可見牡丹不僅可作觀賞、藥用，而且是一種天然的植物殺菌劑，若進一步對其抑菌成分進行確定、分離、純化，利用其抑菌特性開發(fā)新的產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于日常生活中，可極大改善人們生活。

4 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，牡丹籽提取液a對沙門氏菌和根霉均有抑菌效果，提取液b對沙門氏菌有抑菌效果，對根霉無抑菌效果，抑菌效果為藥用型＞油用型＞觀賞型，且混栽會對原品種抑菌效果產(chǎn)生影響。當(dāng)不同種類牡丹混栽時，由于花粉交叉?zhèn)鞑?，可能使其原有品種的純度發(fā)生變化，這樣從抑菌性變化的角度可以對不同種類牡丹的混栽提供一定依據(jù)。