乳腺癌中CCR7、E-cadherin的表達與侵襲轉(zhuǎn)移的研究

周海玲 李 壯 曹自平

佳木斯大學，黑龍江省佳木斯市 154007

在中國乳腺癌呈逐年上升趨勢[1]，如何預防及醫(yī)治乳腺癌成為醫(yī)學研討的一個重要內(nèi)容。腫瘤的發(fā)生一般相對比較隱秘，特別有些人更是缺少醫(yī)學常識延誤治療時機。乳腺癌患者新發(fā)病人數(shù)每年都在增多，其因癌癥死亡的人數(shù)也是呈上升趨勢。癌癥的發(fā)生與基因異常改變有很大干系。最近幾年許多學者發(fā)現(xiàn)特異性趨化因子及其受體是許多腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的必要因素，尤其CCR7的表達成為乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的必須因素。乳腺癌組織中CCR7的出現(xiàn)在癌細胞的趨化與侵襲活性中有一定的加速作用。大量研究證實乳腺癌以及多種實體腫瘤的轉(zhuǎn)移與CCR7有關(guān)。鈣粘附蛋白(Cadherin)可以把它歸為能夠參與細胞間同質(zhì)黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白。其中的 N-cadherin存在于神經(jīng)組織、肌肉組織中，本題研究的 E-cadherin存在于上皮組織中， P-cadherin存在胎盤組織中等。在此之中E-cadherin 與腫瘤的轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，也是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程當中的重要生物標識物，而多受研究者關(guān)注。人的E-cadherin編碼基因位于16號染色體q22.1附近，由723～748個氨基酸組成，分子量80～124KD，分子位于跨膜區(qū)。CC類趨化因子受體成員CCR7被證明在包含乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著主要作用[2]，腫瘤轉(zhuǎn)移的過程包含腫瘤細胞向腫瘤細胞團外侵襲，向血管、淋巴管遷徙，然后經(jīng)此過程管道上的開口進入當中，沿著血管、淋巴管到達轉(zhuǎn)移部位。談及腫瘤細胞的侵襲，細胞外基質(zhì)(ECM)的降解是腫瘤細胞可以向外侵襲以及血管淋巴管開放的重要環(huán)節(jié)，而基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs成員MMP-9 在這一過程中起到的作用極其重要。相關(guān)文獻報道MMP-9 可以降解E-cadherin 調(diào)節(jié)組織重塑、增殖和遷移，也能從胞外區(qū)近質(zhì)膜處將其分裂開[3]。在腫瘤細胞的定向遷移方面，趨化因子與其相應受體之間能為治療乳腺癌提供大量理論依據(jù)。本課題研究通過免疫組織化學方法測驗CCR7與E-cadherin兩因子在乳腺癌中的表達情況及對相關(guān)性進行分析。

1 資料與方法

1.1 標本來源 搜集在2017年7月—2018年11月佳木斯大學附屬第一醫(yī)院病理科80例乳腺浸潤性導管癌的石蠟包塊,取癌旁5cm組織45例，另取對應腋窩轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)40例。術(shù)前均未行任何放化療、內(nèi)分泌治療及生物靶向治療，術(shù)后病理診斷明確，上述標本均常規(guī)制作石蠟包埋切片。

1.2 主要試劑 試劑包含兔抗人CCR7單克隆抗體，兔抗人 E-cadherin(bs-1016R，1∶200)蛋白單抗，和由北京博奧森生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)PS法試劑盒和DAB顯色試劑，PBS磷酸鹽緩沖液緩沖液。

1.3 免疫組化 通過免疫組化方法(SABC)處理蠟塊，染色，研究CCR7、E-cadherin在浸潤性乳腺癌、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及癌旁組織中的表達情況。

1.4 結(jié)果處理 在高倍鏡下進行觀察癌細胞數(shù)量，CCR7 和E-cadherin均以細胞膜和(或)細胞質(zhì)染色。幾乎不染色為陰性(-)；淺黃為弱陽性(+)；棕黃染陽性(++)；深棕染強陽性(+++)。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用Spearman等級相關(guān)進行檢驗分析，用SPSS17.0軟件包處理本文數(shù)據(jù)；均以α=0.05作為測驗水準，P<0.05有意義。用χ2檢驗研究CCR7與E-cadherin在浸潤性乳腺癌中表達情況。

2 結(jié)果

2.1 CCR7、E-cadherin在乳腺中的表達 由表1所示可見，

表1 CCR7、E-cadherin在癌旁正常組織、浸潤性導管癌及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的表達

注：*χ2=11.424，P<0.05，**χ2=15.374，P<0.05。

CCR7在乳腺癌、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的陽性表達率均高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。E-cadherin在乳腺浸潤性導管癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及癌旁組織皆有表達,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=15.374，P<0.05)，且E-cadherin在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)、癌旁組織中的陽性表達率均高于乳腺浸潤性導管癌組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 CCR7、E-cadherin在乳腺癌組織中的表達與其臨床病理特征的關(guān)系 由表2可見，CCR7、E-cadherin與乳腺癌組織的組織分化水平、臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況顯著相關(guān)(P<0.05)，與患者年齡、腫塊大小及絕經(jīng)前后無相關(guān)性(P>0.05)。

表2 CCR7、E-cadherin在乳腺癌組織中的表達與其臨床病理特征的關(guān)系

2.3 乳腺癌組織和癌旁組織中CCR7與E-cadherin表達相關(guān)性 利用Spearman措施計算,剖析CCR7、E-cadherin二者在乳腺癌中的表達相關(guān)性，前者在乳腺癌組織中出現(xiàn)高表達，后者在癌旁組織中出現(xiàn)高表達。結(jié)果為CCR7與E-cadherin表達呈負相關(guān)性(r=-0.42)，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 乳腺癌組織和癌旁組織中CCR7與E-cadherin表達相關(guān)性

3 討論

乳腺癌最常見的轉(zhuǎn)移形式是經(jīng)過腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其轉(zhuǎn)移部位包含骨、肝、肺，其中腎臟和皮膚部位的轉(zhuǎn)移較罕見。值得注意的是轉(zhuǎn)移是致使絕大多數(shù)癌癥患者復發(fā)以致死亡的主要影響因素。乳腺癌轉(zhuǎn)移現(xiàn)如今有兩種說法，第一種理論為“種子和土壤”學說，認為體內(nèi)各部位的組織器官給癌細胞供的生長條件是有差別的，因此具有相對特異性生長的腫瘤細胞。第二種認知是“歸巢理論”，癌癥的轉(zhuǎn)移是因為人來自身的器官能夠產(chǎn)生某些趨化因子，正是在這些趨化因子的介導下，癌細胞最終經(jīng)過富含趨化因子的器官的血管壁轉(zhuǎn)移到特定的部位[3]。研究乳腺癌細胞如何轉(zhuǎn)移，將對治療其復發(fā)、侵襲轉(zhuǎn)移帶來不小啟迪。研究表明，乳腺癌干細胞既是乳腺癌細胞群體中具備強大成瘤能力的細胞亞群，而且與乳腺癌發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移、治療抵抗等多種生物學行為顯著相關(guān)?，F(xiàn)今觀點認為，乳腺癌治療后復發(fā)轉(zhuǎn)移的根源是乳腺癌干細胞在化療、內(nèi)分泌治療中能夠發(fā)生抵抗。導致乳腺癌患者預后不良的重要因素是腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，而淋巴結(jié)是乳腺癌轉(zhuǎn)移最常見的部位。乳腺癌細胞侵襲進入微淋巴管是乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移的早期事件。Muller等提出了CCR7在乳腺癌組織中的異常表達與乳腺癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。最近大量研究發(fā)現(xiàn)CCR7在癌細胞轉(zhuǎn)移過程中起到主要作用。CCR類趨化因子受體主要在單核細胞、中性粒細胞、T細胞、B細胞和嗜酸性粒細胞及肺和肝等組織中表達。CC類趨化因子受體成員CCR7 與其配體CCL21的結(jié)合在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及淋巴轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，很可能作為防止腫瘤轉(zhuǎn)移的靶點。大量研究表明在對黑色素瘤、甲狀腺癌、肝癌宮頸癌、肺癌等多種腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)CCR7的表達與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。因此，CCR7與其配體的相互作用在腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移過程中充當重要介質(zhì)。已有研究證明，CCR7活化后可以激活細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(Erk1/2)，而Erk1/2是MMP-2/9的上游信號分子,通過下調(diào)E-cadherin誘發(fā)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生[4]，從而促使乳腺癌多階段過程的發(fā)展，推測乳腺癌CSCs中CCR7可能通過活化Erk1/2促進腫瘤細胞 MMP-2/9的分泌，下調(diào)E-cadherin降解細胞外的基質(zhì)及破壞微淋巴管基底膜，為乳腺癌 CSCs轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件[5-7]。

本實驗通過免疫組化方法來檢測CCR7、E-cadherin在乳腺正常組織、乳腺浸潤性導管癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達與侵襲轉(zhuǎn)移情況的研究。檢測發(fā)現(xiàn)CCR7、E-cadherin在浸潤性導管癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的陽性率不同于癌旁組織的陽性率(P<0.05),揭示其在乳腺癌的惡變與轉(zhuǎn)移中能夠起到促成作用。CCR7、E-cadherin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽性率高于無結(jié)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組(P<0.05)。CCR7、E-cadherin在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的陽性率也較浸潤性乳腺癌組織陽性率相對高一些。上述結(jié)果說明，CCR7、E-cadherin可能與乳腺癌淋巴結(jié)的侵襲轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，這兩種因子可能作為乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預后的重要檢測目標。并且CCR7、E-cadherin在浸潤性乳腺癌的組織分化程度、臨床TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，而與患者年齡、是否絕經(jīng)及腫瘤大小無相關(guān)性(P>0.05)。揭示兩者在轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)組織中陽性率高，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床TNM分期及組織分化程度有關(guān)，證明了異常表達的CCR7、E-cadherin對浸潤性乳腺癌的進展過程可能起到一定作用，可認為是乳腺癌患者預后不良的標志。最后在乳腺癌組織中CCR7、E-cadherin呈現(xiàn)負相關(guān)(r=-0.42,P<0.05)，提示CCR7、E-cadherin在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起到對抗作用，并且CCR7能下調(diào)E-cadherin的表達,同時也預示在其高表達時可能有復發(fā)轉(zhuǎn)移的可能。本試驗檢測到CCR7、E-cadherin與浸潤性乳腺癌的產(chǎn)生侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān),CCR7可能加強E-cadherin對細胞外基質(zhì)的破壞作用，從而腫瘤細胞通過趨化作用由細胞外基質(zhì)向遠處轉(zhuǎn)移。如果這個推論成立，將可能為乳腺癌的治療及防止其復發(fā)轉(zhuǎn)移提供很好的依據(jù)。